本文详细描述了在实验小鼠强直性脊柱炎治疗过程中进行督灸的操作步骤及注意事项。
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本文内容
摘要
摘要
强直性脊柱炎（AS）是一种进行性加重且致残性的关节炎，主要累及中轴骨骼。该疾病主要侵犯脊柱和骶髂关节。在疾病后期，脊柱和骶髂关节可能发生融合，导致脊柱僵硬和驼背，以及行走困难，严重影响患者的工作能力和日常生活质量，给患者、家庭和社会带来沉重负担。近年来，非药物疗法作为强直性脊柱炎的替代治疗手段日益受到关注。艾灸是中医（TCM）中一种古老的治疗技术。督灸疗法是在普通艾灸基础上发展起来的一种独特而创新的外治法，对强直性脊柱炎具有明确的治疗效果。督灸巧妙结合了中医的多种相容技术，融合了经络、穴位、中草药与艾灸的作用。本文详细描述了在实验小鼠中实施督灸的操作步骤及注意事项，旨在为研究督灸治疗强直性脊柱炎的作用机制提供实验依据。
引言
强直性脊柱炎（AS）是一种进行性加重且致残性的关节炎，主要累及中轴骨骼。根据最新的流行病学调查，全球约有0.01%至1.8%的人口患有此病1，其中大多数为年轻男性（男女比例约为2-3:1）2。中国人群中AS的发病率为0.2%至0.4%。该疾病主要累及脊柱和骶髂关节。在疾病晚期，可能出现脊柱和骶髂关节融合，导致脊柱僵硬和驼背，以及行走困难，严重影响患者的工作能力和日常生活质量，给患者、家庭和社会带来沉重负担1。目前尚无根治AS的方法，现有的药物和非药物治疗手段主要集中在缓解疼痛、延缓疾病进展以及提高生活质量。近年来，由于药物治疗选择十分有限3，非药物治疗日益受到关注，已成为AS的一种替代疗法。在中国，患者通常更倾向于接受副作用较小、治疗过程方便的中医外治法。
艾灸是中医使用的一种古老治疗技术。督灸是一种外治技术，包括 "泡沫辅助药物艾灸" 位于督脉的脊柱节段。主要用于强直性脊柱炎（AS）的治疗，已显示出安全性和有效性。与普通艾灸相比，督灸具有艾灸面积广、艾炷大、火力强、温度高的特点4一项系统评价和荟萃分析表明，艾灸是强直性脊柱炎的有效辅助治疗方法5最近一项研究证实，艾灸可改善强直....
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方案
所有动物实验均经山东中医药大学实验动物福利伦理审查委员会批准（编号：SDUTCM20230831301）。
1. 动物准备
- 预先确定实验分组及每组动物数量。
- 选用雄性 BALb/c 小鼠，在温度恒定为 22 ± 1 °C、湿度恒定为 60 ± 5%、光照周期为 12 小时昼夜循环的环境中饲养。
2. AS 小鼠模型的建立
注意：AS 模型通过软骨蛋白聚糖（PG）诱导建立，这是一种经典的建模方法16,17,18,19,20,21。采用 BALB/c 品系小鼠，通过反复免疫 PG 以诱导肌腱炎和脊柱炎。有关本实验方案中所用材料、试剂和仪器的详细信息，请参见材料表。
- 使用200 µL移液器吸取200 ....
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结果
PG诱导的小鼠模型出现了外周关节炎症状，表现为四肢末端和脚趾发红肿胀，并在第14周时即逐渐出现中轴性关节炎，这与强直性脊柱炎（AS）的临床表现非常相似。因此，若小鼠在末次注射后14周的关节炎指数（AI）超过3分，则认为AS小鼠模型构建成功22。当小鼠足部出现肿胀时，每周进行一次督灸治疗，共治疗3次。治疗结束后，在异氟烷深度麻醉下通过颈椎脱位处死小鼠，采集血液并切除踝关节组织。
督灸对运动协调性与自主运动的影响
采用牛痘病毒前列腺素诱导的关节炎模型，观察督灸作用于督脉对运动协调性的影响。首先采用关节肿胀评分评估模型是否成功建立，并通过转棒实验和开放场地实验（OFT）评估运动协调性和自主运动能力。
采用关节炎指数（AI）评估外周性关节炎的严重程度。建模后，双向重复测量方差分析显示，在督灸治疗前，模型组和督灸组的关节肿胀评分均较对照组显著升高（P < 0.01；图6A）。督灸治疗.......
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讨论
强直性脊柱炎的临床表现为背部、腰部及关节肿痛，严重时可出现脊柱畸形和关节强直26早期诊断和治疗可提高强直性脊柱炎（AS）患者的生活质量，降低致残率，并改善预后。根据中医理论，AS被认为是由于肾阳和督脉阳气不足，以及寒邪内积所致。中医认为，基于经络理论的艾灸能够产生温煦体表的气，此气继而沿经络和穴位向下传导。在 黄帝内经 （一部非常经典且重要的中医典籍），其中记载了 "治疗病变的督脉。" 由于强直性脊柱炎（AS）位于督脉，因此刺激督脉被用作治疗穴位。督脉被认为是阳经之海，阳气在此达到顶峰。对督脉进行艾灸可补益阳气，激发督脉功能，并调节肾阳的温煦作用，即增强西医的免疫调节功能。
从西医角度来看，脊髓在传递神经信息方面起着重要作用。督灸作用于脊神经根的进出部位，可通过调节神经递质来影响神经系统的功能与调控机制。20世纪90年代的研究证实，督灸可增加大鼠下丘脑中β-内啡肽的含量，从而产生中枢性镇痛效应7。此外，附着点炎是强直性脊柱炎（AS）常见的并发症，其特征为.......
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披露
作者声明无利益冲突。
致谢
本工作得到国家自然科学基金面上项目（No.82174491）和齐鲁中医药学术流派传承项目（鲁卫函〔2020〕132号）的资助。感谢山东中医药大学实验动物中心为我们提供实验条件。
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材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 10% EDTA | 中国上海麦克林生化有限公司，中国上海 | ||
| 酒精棉片 | HYNAUT，青岛海诺生物工程有限公司，中国青岛 | ||
| 麻醉机 | 医疗用品 & Services INT. LTD，英国基斯利 | ||
| 离心管 | Axygen，Corning，纽约，UAS | ||
| 完全弗氏佐剂（CFA） | 中国上海阿拉丁 | F393378 | |
| 棉球 | 河南瑞科医疗器械有限公司，新乡，中国 | ||
| 棉纱布 | 中国河南瑞科医疗器械有限公司，新乡，中国 | ||
| 砧板 | 自备 | ||
| 来自牛关节软骨的decorin | Sigma-Aldrich，密苏里州，美国 | D8428 | |
| 脱毛膏 | Veet，利洁时（中国）投资有限公司，中国上海 | ||
| 电子天平 | 中国上海雅金电子科技有限公司，中国上海 | ||
| Eppendorf管 | Axygen, Corning, 纽约, UAS | ||
| 眼润滑剂 | 中国北京双吉制药有限公司，中国北京 | ||
| 姜 | 自备 | ||
| GraphPad Prism 7 软件 | GraphPad 软件，美国波士顿 | ||
| 理发剪 | 中国金华，Super human Group CO LTD | ||
| 加热垫 | 中国深圳乐硕科技有限公司，中国深圳 | ||
| 不完全弗氏佐剂’不完全弗氏佐剂（IFA） | 阿拉丁，中国上海 | F393371 | |
| 注射 注射器 | 中国山东新华安德医疗器械有限公司，淄博，中国 | ||
| 异氟烷 | 中国深圳 Rayward 生命科技有限公司，中国深圳 | R510-22-10 | |
| 香薰棒 | 中国石家庄利都香业有限公司，中国石家庄 | ||
| 榨汁机 | 博朗（上海）有限公司，中国上海 | ||
| 刀 | 自备 | ||
| 较轻的 | 浙江虎牌打火机有限公司 | ||
| 研钵 | 中国洛阳，洛阳伊奈陶瓷科技有限公司 | ||
| 小鼠 IL-17 ELISA 试剂盒 | 中国上海，absin | abs520009-96T | |
| 小鼠 TNF-αα ELISA试剂盒 | 中国武汉 中国武汉三赢 | KE10002 | |
| 桑皮纸 | 中国临沂市沂水县穆林桑纸业有限公司 | ||
| OFT | 中国上海 Xinruan | XR-XZ301 | |
| 纸杯 | 自组装 | ||
| 移液器 | OXFORD BIO INSTRUMENTS INC.，英国牛津 | ||
| 精制艾绒 | 自备 | ||
| 转棒实验 | 中国上海 Xinruan | XR-6C | |
| scientz-48L 冷冻高通量组织研磨仪 | 宁波新芝生物科技股份有限公司 | ||
| 剪刀 | 中国山东嘉仁医疗用品有限公司，淄博，中国 | ||
| 半自动石蜡切片机 | 徕卡相机股份公司，德国瓦岑纳赫 | ||
| SPSS 25.0 软件 | 国际商业机器公司，纽约，美国 | ||
| 中药粉末 | 自备 | ||
| 提示 | Biosharp，Labgic，中国北京 | ||
| 毛笔 | 中国临沂市沂水县穆林桑纸业有限公司 |
参考文献
- Sieper, J., Poddubnyy, D. Axial spondyloarthritis. Lancet. 390 (10089), 73-84 (2017).
- Lee, W., Reveille, J. D., Weisman, M. H. Women with ankylosing spondylitis: a review. Arthritis Rheum. 59 (3), 449-454 (2008).
- Sari, İ, Öztürk, M. A., Akkoç, N.
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重印与许可
