腹部按摩改善脑瘫大鼠运动功能障碍

摘要

本文介绍了一套在脑性瘫痪大鼠模型中应用的按摩操作方法，可显著改善脑性瘫痪大鼠的运动功能。

摘要

脑性瘫痪（CP）是一种致残率和发病率均较高的疾病。脑性瘫痪的临床症状主要表现为运动功能障碍和异常姿势发育，常伴有认知功能障碍。推拿作为中医传统疗法之一，具有调和脏腑、调理气血、促进内脏功能协调以及平衡阴阳的作用，临床上已被证实对脑性瘫痪具有良好的疗效。本文总结了一套针对脑性瘫痪幼年大鼠的简便、标准化推拿操作方法，易于学习和重复。操作步骤如下：首先，按摩四肢穴位，包括曲池（LI11）和足三里（ST36）；其次，按摩腹部穴位中脘（RN12）、天枢（ST25）、关元（CV4）和气海（CV6）；最后，对大鼠腹部进行整体按摩。该套推拿方法显著改善了脑性瘫痪幼年大鼠的运动功能，且操作简便、标准化程度高、可重复性强。我们将这套操作方法应用于动物模型，旨在推动推拿疗法的国际化与标准化进程。

引言

脑性瘫痪（cerebral palsy，CP）是一种致残率和发病率均较高的疾病。流行病学调查显示，每1,000名新生儿中有3-5例患有脑性瘫痪¹。脑性瘫痪的典型症状包括持续性的中枢性运动和姿势发育障碍²、伴有感觉³、知觉、认知⁴、交流⁵、行为障碍的活动受限， 癫痫以及继发性肌肉骨骼问题¹。目前，该病尚无治愈方法，属于终身性致残性疾病。现有的治疗方法包括运动疗法⁶、水疗⁷、功能性电刺激⁸、肌肉外骨骼⁹、脐带血细胞治疗¹⁰、肉毒毒素注射和手术治疗¹¹。然而，临床康复过程耗时长、耗费大量精力，且需要患者主动配合，因此难以在动物模型中复制。手术治疗存在局限性、适应证限制且不可逆。口服药物对脑性瘫痪患儿运动功能的改善效果较差¹²。肌肉外骨骼治疗和脐带血治疗经济成本较高，难以普及，因此寻找合适的治疗策略至关重要。

推拿是一种非侵入性、无副作用、接受度高且成本效益显著的儿童治疗方法。临床研究¹³和动物实验¹⁴均已证实，推拿可改善脑性瘫痪（CP）的功能障碍。中医认为，推拿通过调节脏腑功能和疏通经络来改善CP所致的功能障碍¹⁵。作为一种有效的中医治疗手段，推拿需要借助现代医学研究方法阐明其作用机制，以推动其在全球范围内的推广应用。然而，在脑瘫患儿中开展相关机制研究存在客观的研究局限性和伦理限制。因此，通过动物模型研究推拿改善CP的相关机制更为可行。尽管动物与儿童存在差异，但在动物身上研究推拿效应时，仍需遵循中医的基本理论。从临床与实验动物学的角度出发，我们将把人体应用的推拿技术复制到动物模型中，以验证其疗效，这将有助于推动推拿疗法的应用与发展。

首先，中医认为慢性前列腺炎属于“淋证”、“精浊”等范畴 "五次延迟" 和 "五种柔软度"¹⁶脑瘫的病因包括先天性胎儿功能障碍、肝肾亏虚、精气不足，或后天营养缺乏。¹⁵肾脏主导人体各器官和组织的生长、发育以及再生与修复，这些物质对于身体的生长发育、组织修复及机能恢复至关重要。肾之精气是生长发育的根本基础。肾精不足可导致骨髓失养、气血功能紊乱，以及脏腑、肌肉和骨骼失于濡养。脑瘫患儿易出现生长发育迟缓、四肢关节活动度下降及肌张力增高等表现。此外，久病可致气血亏虚过度，形成血瘀，进而引起经络阻滞，导致智力障碍、反应迟钝、运动功能障碍、语言不清、吞咽无力及流涎等症状。

脾主运化，为气血生化之源，后天之本。人体连接脏腑、四肢的经络是运行气血、沟通上下、调节阴阳的通路。按摩任脉可增强肾功能，调节气血。在按摩手法中运用足太阴脾经、足阳明胃经及手阳明大肠经上的穴位，可改善脾胃功能，有助于促进气血运行。 按摩通过经络、特定部位和穴位对儿童身体施以良性的物理刺激，引起由表及里、由外至内的反应性变化，从而改善局部和整体的血液循环，恢复大脑正常的兴奋与抑制功能，实现脏腑和组织血流功能的相应平衡。依据该理论，我们主要在腹部、中脘（RN12）、天枢（ST25）、关元（CV4）和气海（CV6）等穴位进行按摩。腹部按摩可改善脑性瘫痪患儿的临床症状^17,18,19，且极有可能通过脑-肠通路促进脑损伤修复²⁰。由于脾胃为后天之本，通过健脾和胃、益气养血，可促进脑损伤的恢复。

我们在大鼠上复制了该技术，以尽可能模拟中医对慢性胰腺炎（CP）的干预，发现腹部按摩可改善CP大鼠的功能障碍。综上所述，我们提出了一套研究腹部按摩的方法，用于探讨通过腹部按摩改善CP的相关机制。由于按摩种类繁多，导致按摩机制的研究极为困难，因此有必要对按摩方法进行标准化。

方案

本研究经上海复旦大学附属金山医院动物伦理委员会批准。幼年Sprague Dawley（SD）大鼠饲养于SPF级动物房，光照时间为08:00至20:00，黑暗时间为20:00至08:00，温度控制在22 °C，室内相对湿度为40%-50%。动物可自由摄食和饮水。所有动物实验操作均符合实验动物福利伦理及动物实验安全规范。

1. 新生儿缺氧缺血性脑病动物模型²¹

1. 将18只出生后7天（P7）的Sprague Dawley（SD）雄性大鼠幼崽随机分为以下三组：假手术组（无按摩）、模型组和按摩组（模型+按摩）（每组n = 6）。
2. 麻醉
   1. 使用小型动物气体麻醉机，以5%七氟烷气体、氧流量4 L/min、诱导浓度4%对幼鼠进行麻醉。当幼鼠仰卧、四肢停止活动、触碰无反应且肌肉松弛时，确认其已完全麻醉。
   2. 为麻醉后的幼鼠涂抹宠物用眼膏并滴眼药水，以防止角膜干燥。
3. 显微外科手术过程
   1. 首先用碘伏对幼鼠颈部皮肤消毒一次，再用75%乙醇消毒一次（上述操作重复三次），于颈部正中做长约0.5 cm的纵行切口。钝性分离右侧皮下组织，暴露颈总动脉。
   2. 模型组和按摩组：仔细分离颈总动脉与迷走神经（图1A）。分离颈总动脉后，使用电凝器对颈总动脉进行凝固处理。确认无出血后，逐层缝合皮肤，并再次对术区进行消毒（图1C）。
   3. 假手术组（无脑瘫，无按摩）：仅分离颈总动脉，不对其进行任何血管处理。逐层缝合皮肤并再次消毒术区。当观察到幼鼠可自由爬行后，将其放回母鼠身边。
4. 术后用碘伏消毒。将完成手术的幼鼠置于37 °C保温垫上，持续观察伤口是否出血及眼部是否有炎症。
5. 将模型组和按摩组的幼鼠放入开放式缺氧舱中，观察1小时直至苏醒。
   注：当幼鼠能够自由爬行时，即可进行缺氧处理。
6. 缺氧处理
   1. 麻醉恢复后，将幼鼠置于37 °C、92% N₂ 和8% O₂ 气体条件（2 L/min）的密闭缺氧装置中，持续缺氧3小时。缺氧处理结束后，将清醒的幼鼠放回母鼠身边。
   2. 手术器械消毒，并用酒精擦拭缺氧舱。术后用碘伏对幼鼠进行消毒，每日监测伤口有无感染迹象，并使用无菌垫料。整个手术过程在SPF级动物房内完成，动物术后也饲养于SPF级动物房中。
   3. 模型组在造模成功后正常饲养，不施加任何干预措施。按摩组在造模完成后接受手法干预。
      注：假手术组正常喂养，不接受缺氧处理。
7. 将各组幼鼠放置于经高温灭菌的无菌垫料上并靠近母鼠。观察1–2小时，直至母鼠开始哺育幼崽。每日观察幼鼠伤口是否出血及眼部是否有炎症；持续观察直至伤口完全愈合。

2. 按摩技术参数

注意：按摩的核心技术包括按压和揉擦，为主要干预技术。实验前，研究人员参考了技术测试员的操作，该技术测试员从天津腹部按摩专家王景贵处采集了相关技术。

1. 将按压和摩擦的力分别设置为 6 N 和 3 N^22,23,24,25。

3. 按摩操作

注意：确保研究人员拇指按压穴位时压力稳定且持久。

1. 术后第2天（P8），将幼鼠从笼中取出，注意不要惊扰母鼠。在按摩组中，从第8天开始对幼鼠进行按摩^th 出生当天至第40天^th 天
2. 在给幼鼠按摩前，应轻轻摩擦双手，使其温度升高至与幼鼠皮肤温度相近。
3. 按摩顺序如下：四肢穴位 → 腹部穴位 → 腹部
4. 将幼鼠置于左手掌中，用四指的指腹面从头部向尾部轻轻触摸幼鼠背部1分钟，使其安静。
5. 执行以下揉搓步骤。
   1. 用右手拇指和食指来回揉搓腹部。
   2. 从近端向远端摩擦前肢约30秒。按压曲池（LI11）、外关（SJ5）和合谷（LI4）穴位，每个穴位按压10次，每次1秒。
   3. 从近端向远端揉搓后肢约30秒，并按压阳陵泉（SP9）、足三里（ST36）、三阴交（SP6）和太冲（LR3）穴位，每个穴位按压10次，每次1秒，总时长约5分钟。
6. 用右手拇指依次按压中脘（RN12）、天枢（ST25）、关元（CV4）和气海（CV6）穴位，每个穴位按压10次，每次约1秒，持续1分钟。
7. 保持幼鼠俯卧位，用右手拇指按压并揉动腹部中脘穴。以幼鼠脐部为中心，拇指顺时针方向按摩，频率约120次/分钟，持续约5分钟。
8. 最后，用右手四指的指腹轻轻从幼鼠头部向尾部抚摸，使其安静，然后将其放回笼中，让母鼠继续哺育。

4. 腧穴定位

注意：出生两周内的大鼠，其体重和体长与小鼠相同。因此，在大鼠出生后第8至15天期间，我们采用相关文献中的小鼠按摩方法对其进行按摩²⁴。

1. 两周至40天后，使用以下穴位对大鼠进行常规按摩治疗：LI11、SJ5、LI4、SP9、ST36、SP6、LR3、RN12、ST25、CV4 和 CV6²⁶。
   ​注：具体穴位位置请参见表1、其他文献中关于大鼠穴位定位的详细描述²⁶以及图2。

5. 体重与行为学测试

1. 从出生后第7天（P7）到第40天（P40），每天称量幼鼠体重。
2. 在出生后第37至40天（P37–P40）进行平衡木行为学实验。使用平衡木（长35 cm，宽1.5 cm，高100 cm）检测幼鼠的运动平衡功能。
   1. 将幼鼠放置于平衡木上，使其跑向平衡木另一端放置的黑色箱子。
   2. 在P37至P39天对幼鼠进行平衡木训练，每日3次，并于P40天进行正式测试。记录三组幼鼠通过平衡木所需的时间以及后肢滑落的次数（图1D）。
      注意：采用二氧化碳窒息法处死大鼠。

结果

在完成缺血缺氧造模^27,28,29,30（实验在SPF级动物房内完成）后，取存活48 h的幼鼠脑组织，观察水肿、液化及其他相关现象，如图3所示。假手术组和按摩组幼鼠的体重变化与模型组进行比较（补充表S1）。模型组体重增长速度慢于按摩组（图4），表明按摩可促进脑性瘫痪幼鼠的生长发育。平衡木实验结果显示，模型组通过平衡木所需时间长于假手术组和按摩组（图5A和补充表S2）。

此外，与假手术组相比，模型组后肢滑落次数显著增加（补充表 S3). 相比之下，按摩组的后肢打滑次数较模型组显著减少（图5B 和 补充表 S3按摩干预显著改善了脑瘫大鼠的生长和运动功能。

图 1：动物模型构建过程及相关行为学检测。 （A）建模过程中剥离迷走神经。 （B）对5周龄大鼠进行按摩。 （C）脑缺血完成后的大鼠。 （D）平衡木实验。 请点击此处查看该图的放大版本。

图 2：与腹部按摩相关的一些穴位示意图²⁶。 请点击此处查看此图的放大版本。

图3：建模后48小时脑一侧出现水肿。 请点击此处查看此图的放大版本。

图 4：按摩治疗对体重的影响。 从出生后第7天（P7）到第40天（P40）测量大鼠幼崽的平均体重（n = 6），并在P7进行缺氧-缺血干预。HIE造模后，模型组大鼠体重增长速率显著下降，而按摩治疗显著改善了该情况（p < 0.05）。数据以均值 ± 标准差表示；#p < 0.05，按摩组与模型组比较；*p < 0.001，模型组与假手术组比较。请点击此处查看该图的放大版本。

图 5：按摩治疗对脑瘫大鼠运动功能障碍的影响。（A）大鼠穿越横梁所需时间（n = 6）。（B）大鼠后肢滑移次数。根据图 4A、B的结果，按摩组的运动表现显著优于模型组（p < 0.05）。数据以均值 ± 标准差表示；*p < 0.001 模型组与假手术组比较。#p < 0.01 按摩组与模型组比较。**p < 0.0001 模型组与假手术组比较。##p < 0.0001 按摩组与模型组比较。请点击此处查看该图的放大版本。

LI11	桡侧腕伸肌的内侧凹陷处
SJ5	肘部外侧凹陷 在桡尺关节远端5/6处的假想凹陷处
LI4	连接腕部与肘部的连线，位于伸肌后方 指总伸肌腱
SP9	第一背侧骨间肌，第二指中线内侧 前足的掌骨
ST36	胫骨内侧髁下方的凹陷处 胫骨与腓肠肌之间
SP6	从ST35至髌骨前缘连线的近端五分之一处 踝褶侧方
LR3	在假想线上远端五分之一段的近端终点处 连接SP9与胫腓骨内踝
CV4	位于第一与第二结构之间凹陷处的近端 跖骨
ST25	在腹侧中线自上而下3/5处 脐至耻骨结节
CV6	脐外侧，位于脐至乳头线的中点处 腹中线3/10处 脐至耻骨结节

表1：各穴位的解剖位置²⁶。

补充表 S1：三组大鼠体重的原始数据。 请点击此处下载该文件。

补充表 S2：三组大鼠穿越平衡木所需时间的原始数据。 请点击此处下载该文件。

补充表 S3：三组大鼠后肢打滑的原始数据。 请点击此处下载该文件。

讨论

新生大鼠缺血缺氧模型是研究脑性瘫痪最经典的模型^27,28,29,30我们从第8周开始对大鼠进行干预^th 到 40^th 天，这大约相当于干预人类3个月至11.5岁这一人类生长发育的黄金时期³¹结果表明，按摩是改善脑性瘫痪（CP）功能障碍的有效方法。既往动物实验显示，按摩可减轻炎症，并改善患有脑性瘫痪的幼年大鼠的运动和认知功能。^14,32一些临床研究表明，对脑瘫患儿进行背部和膀胱经按摩可改善其运动功能³³这些结果还表明，按摩可以缩短脑性瘫痪幼鼠通过平衡木所需的时间，并减少其后肢打滑的次数。因此可以看出，腹部按摩能够改善脑性瘫痪幼鼠的运动功能。

中医认为，脑性瘫痪（CP）属于“五迟五软”范畴，以先天肾气不足为根本因素，后天脾胃虚弱为促进因素。肾主骨生髓，当肾气充盛时，髓海充足，智力才能正常。脾主肌肉与四肢，若脾胃功能健运，则肌肉丰实，关节活动自如。因此，治疗上需健脾补肾，改善胃肠功能，活动四肢关节，从而提升整体功能。首先，中医理论认为“腹为百病之根”，腹部按摩可调理上下气机，分理阴阳，祛除陈旧积滞、生发新气，充实五脏，驱除外邪，消除内患。其次，研究表明，脑性瘫痪患儿常伴有体重偏低，易出现营养不良，包括能量摄入过多或失衡、营养状态异常^34,35,36,37。生长迟缓和营养不良在脑性瘫痪患儿中较为常见，且与更严重的运动功能障碍直接相关³⁷。营养不良的风险与脑性瘫痪患者的预后密切相关^34,38,39。目前，腹部按摩的主要研究领域集中在改善功能性消化不良、便秘、腹泻及小儿厌食等胃肠道症状^33,40,41,42。大量研究证实，刺激中脘、天枢、关元、气海等腹部穴位，可治疗胃肠道疾病，促进营养吸收，改善营养状况^43,44,45。腹部穴位能治疗与胃肠道相关的疾病，疏理中焦气机，补益元气，促进气血生化。因此，本研究将腹部按摩引入实验方法中，以改善脑性瘫痪幼年大鼠的运动功能障碍。

腹部按摩主要结合腹部穴位，并辅以四肢穴位，如曲池（Quchi）和足三里（Zusanli）。四肢部穴位的经络与关节外络连接内在脏腑，通过腹部按摩以达到最佳治疗效果。一方面，动物实验研究表明，对缺氧缺血性脑瘫新生大鼠针刺足三里（Zusanli）可改善脑瘫幼鼠的功能⁴⁶。另一方面，临床研究显示，针刺合谷（Hegu）⁴⁷等穴位可有效促进脑瘫患儿的发育。曲池（Quchi）和足三里（Zusanli）分别为手阳明大肠经⁴⁸和足阳明胃经上与生长抑素相关的穴位⁴⁹，是中国临床治疗中风常用穴位，用于改善肢体瘫痪^50,51。此外，曲池（Quchi）和足三里（Zusanli）分别为大肠经与胃经的合穴。由此，经络之气可达脏腑，贯通上下，连接经络与络脉。此外，临床研究结果表明，针灸结合艾灸及按摩在改善脑瘫患儿症状方面效果更佳⁵²。综上所述，中医治疗有助于改善脑瘫患者的功能障碍。

尽管已有大量关于按摩如何改善脑性瘫痪（CP）的研究，但按摩技术的多样性已成为一个巨大的挑战。目前存在多种按摩流派，其在力度、方向等方面的差异带来了诸多难题。我们学习了多种按摩方法，并探索出一套简便易行的按摩技术。然而，我们尚无法模拟出多种多样的按摩手法。其次，按摩时间是幼鼠发育过程中的一个重要阶段。幼鼠体重及各身体系统的快速生长，导致我们在对不同发育阶段的幼鼠进行按摩时，所需的手指力度不断发生变化。因此，必须持续努力，深入研究按摩操作的稳定性。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
动物麻醉机	RWD OF SCIENCE	R550
实验手套	Sri Trang Gloves (Thailand) Co.,Ltd	0169
异氟烷	RWD OF SCIENCE	R510-22-10
大鼠	上海嘉会实验动物养殖有限公司
YF-3 操作测试仪	由上海复旦大学与上海中医药大学联合研制		中华人民共和国专利号 (ZL200710187403.1)