艾灸实验平台能够无束缚地固定大鼠，使大鼠在清醒状态下接受多穴位艾灸，既保障大鼠福利，保护操作人员安全，又确保治疗效果，提高实验效率。
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本文内容
摘要
摘要
在临床实践中进行艾灸时，受试者需要保持情绪稳定和体位舒适，以避免艾灰掉落、烫伤皮肤以及疗效不佳等问题。在大鼠艾灸实验中也存在类似问题。为了模拟临床实践，动物实验中需要引入一种实验装置，即具有固定大鼠与同步实施艾灸治疗功能的艾灸装置，使实验大鼠在非麻醉状态下能够安静、舒适地接受艾灸治疗。
本研究团队设计了一种大鼠艾灸实验平台。该装置由木板框架、支撑底板、多个固定组件和分隔组件构成，能够实现对大鼠进行无束缚艾灸的操作模式，避免使用麻醉和造成烫伤，同时暴露背部多个穴位。该操作可避免对大鼠及操作人员造成身心损伤，提高研究效率，进一步推动艾灸动物实验的发展与研究。
该装置结构简单，易于操作和推广，设计全面且具有创新性，可重复使用，适用于以艾灸为主的实验大鼠研究。本文主要介绍用于大鼠艾灸的实验平台装置的结构、利用该装置进行实验大鼠隔药饼灸的基本操作流程，并描述大鼠慢性肾功能衰竭（CRF）模型的建立方法及典型的实验结果。
引言
艾灸随着火的应用而出现。古代医生偶然发现，身体某些部位经火灼烧后可缓解不适症状。经过长期实践，逐渐选用"Artemisiae Argyi Folium"作为主要的艾灸材料1。艾灸是中医学的重要组成部分，与中药汤剂和穴位针刺并列，这三大中医疗法在多种疾病中被广泛应用。
早在《黄帝内经》时期，中国医生就常使用艾灸疗法治疗疾病。艾叶（Artemisiae Argyi Folium）是一种具有温经止血、散寒止痛功效的中草药，常用于中医外治法，也可用于中药汤剂的配制。艾灸是一种外治法2，将艾绒或其他药物置于体表穴位上燃烧，利用艾火的温和热力及药物作用来治疗疾病3。
作为常用的治疗方法之一，艾灸已在临床实践中广泛应用。随着艾灸治疗应用范围的不断扩大，越来越多的研究致力于探讨艾灸的作用机制，并开展了大量动物实验4,5。
艾灸方法可分为直接艾灸和间接艾灸。将艾炷直接置于皮肤上施灸的方法称为直接艾灸。间接艾灸则是在艾炷与穴位之间垫上药物或其他材料。艾灸可用于治疗多种疾病，如肠易激综合征
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方案
该方案遵循云南中医药大学的动物护理指南，并已获得云南中医药大学动物伦理委员会的批准。实验动物福利与伦理审查编号为 R-062021G098。
1. 艾灸实验平台装置（图1）
注意：我们根据大鼠前后肢之间的距离及其行为学和生理学特征，设计并构建了大鼠艾灸实验平台装置。
- 艾灸装置的尺寸
- 使用防撞板材料和木板制作装置；整体尺寸为 52 cm 长 × 23.5 cm 宽 × 64 cm 高，装置底部面积为 1222 cm2.
注意：艾灸操作在此高度的平台上进行，可使大鼠保持安静。
- 使用防撞板材料和木板制作装置；整体尺寸为 52 cm 长 × 23.5 cm 宽 × 64 cm 高，装置底部面积为 1222 cm2.
- 艾灸装置的主体框架
- 使用防撞板材制作整个装置的底座：底板尺寸为长52 cm、宽23.5 cm，表面为白色。确保底座占装置总重量的较大比例，以稳定整个装置。
- 使用实木制作设备的 elevated platform，尺寸为 60 厘米高。
注意：这是整个仪器的主框架，用于稳定整个装置，并支撑大鼠直立放置。 - 在高台上方设置五个放置槽，尺寸为 10 cm 长 × 6 cm 宽 × 10 cm 高。使用....
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结果
肾脏形态学
如图所示 图5与其他组相比，第X组肾脏的大小、颜色和质地 D （隔药饼灸组）的指标更接近于正常组。模型组和氯沙坦钾组的肾脏形态显示出不同程度的白色纤维化。
肾脏重量
图6 表明A组左肾重量与B组存在显著差异，说明慢性肾功能衰竭（CRF）模型建立成功。A组左肾重量 D 更接近于第2组 A，而各组左肾重量 B 和 C 与对照组相比具有显著差异 D.
B组的右肾重量与A组相比存在显著差异，表明慢性肾功能衰竭（CRF）模型.......
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讨论
临床上， 针灸治疗要求患者保持平静、放松，避免过度愤怒和饥饿，强调“平和”的状态。然而，目前的 针灸实验实践仍以束缚动物为前提，这不仅违背了实验的初衷，也不符合临床实际。束缚动物会导致动物恐惧和愤怒，迅速升高实验动物体内肾上腺素等激素水平，从而影响实验结果22。在进行动物针灸实验操作时，必须尽快解决这些问题，以确保实验的准确性并保障动物福利。艾灸对大鼠的刺激较强，加之其性情较为暴烈，若实验过程中无法对大鼠进行安全有效的固定，可能导致操作者受伤、增加疾病传播风险，并影响实验数据的准确性。由于中药饼隔姜灸治疗时间较长、疗程较长，因此需要一种能够耐受长期艾灸的固定装置。研究团队发明的大鼠艾灸实验平台能够克服这一难题，更贴近临床实际。
实验过程中需牢记以下要点。首先，泥的干湿程度目前尚无准确的定量标准。文中提到的泥中粉末与水的比例约为1:1，仅为大致比例，具体数值取决于实验大鼠的数量及操作者的经验。制备时需使泥干燥但不结块，湿润但不挤出水分；过湿或过干均会影响实验结果。使用模具制成的艾炷相对较松，容易散开，但仍需用力捏紧。.......
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披露
作者声明不存在利益冲突。大鼠艾灸实验平台装置的专利 号为 ZL202320880924.X。
致谢
我们感谢黄副教授和崔女士对本文的严格指导与支持。本研究得到以下资助：1. 国家自然科学基金委员会（NSFC），82160938， "从交互效应探讨隔饼灸治疗肾间质纤维化的机制研究 TGF-β1介导的ERK和Smad信号通路"；2. 云南省卫生健康委员会 "2020年高层次中医药人才"孵化项目（云卫中医发展〔2021〕1号）；3. 云南省科学技术厅—中医药应用基础研究联合专项资金（No.2019FF002-022，No.202101AZ70001-286，No.202301AZ070001-030）；4. 中国云南针灸推拿防治脑病创新团队（2023）
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材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 0.5 mL 肝素锂生化管 | 石家庄康为士医疗器械有限公司 | 220518 | 血液采集 |
| 0.9%生理盐水 | 昆明南疆制药有限公司 | / | 冲洗 |
| 1.5 mL Eppendorf管 | 北京兰杰科生物科技有限公司 | 12100024 | 子包装 |
| 2 mL 冻存管 | 巴洛克生物技术有限公司 | 88-0151 | 包装好的肾脏 |
| 4 °C型冰箱 | 海尔集团有限公司 | BCD-236WDGL | 储存 |
| 5 mL 注射器 | 四川新世纪医用高分子制品有限公司 | 20211115 | 灌胃 |
| 50 mL 离心管 | 北京朗科生物技术有限公司 | CT-002-50A | 包装好的肾脏 |
| 12 G 灌胃针 | 北京中科恒天科技有限公司 | 12#55mm | 灌胃 |
| 96孔板 | 北京兰杰科生物科技有限公司 | 11510 | 蛋白质浓度测定 |
| -80 °C 冷冻室 | 赛默飞世尔科技 | 991 | 储存 |
| 腺嘌呤 | 北京博奥拓技术有限公司 | A0607 | 药物成型 |
| BCA 显色剂 | 碧云天生物工程有限公司 | P0010 | 蛋白质浓度测定 |
| BCL-2蛋白抗体试剂 | Abcam 上海贸易有限公司 | ab196495 | 蛋白质印迹法 |
| Caspase-3 蛋白抗体试剂 | Abcam 上海贸易有限公司 | ab184787 | 蛋白质印迹法 |
| 化学发光成像系统 | 上海勤翔科学仪器有限公司 | 100240073 | 蛋白质条带成像 |
| 中药粉 | 云南中医药大学第二附属医院 | / | 治愈 |
| 直接上样彩色预染蛋白分子量标准 | 北京康润诚业生物科技有限公司（GenStar） | M221 | 蛋白质印迹法 |
| 一次性采血针 | 中国台湾柳营三里医疗科技发展有限公司 | YZB/国 0411-2010 | 采血 |
| 一次性人体静脉血液样本采集容器 | 中国台湾柳营三里医疗科技发展有限公司 | 20210901 | 血液采样 |
| DK-30 自动制冰机 | 河南兄弟仪器设备有限公司 | SHDX0023 | 制冰 |
| ECL 化学发光底物试剂盒 | 北京兰杰科生物科技有限公司 | BL520B | 将曝光胶片中的潜影转化为可见影像 |
| 电子天平 | 上海然昊电子有限公司 | JCS-31002C | 测量大鼠的体重和肾脏重量 |
| 冷冻切片机 | 赛默飞世尔科技 | HM525 NX | 切片机 |
| 全自动生化分析仪 | 天津微纳芯科技有限公司 | PV2112001Z02410305 | 肾功能检测 |
| 气体麻醉系统 | 中实科技有限公司 | ZS-MV-1 | 麻醉 |
| 甘氨酸 | 北京索莱宝科技有限公司 | 货号 G8200 | 运行缓冲液，Western 转膜缓冲液 |
| HE染色试剂 | 北京索莱宝科技有限公司 | G1120 | 染色 |
| 高蛋白饲料 | 江苏协同生物工程有限公司 | XT19008 | 喂养 |
| 智能型实验室超纯水机 | 重庆华畅水处理工程有限公司 | 15L | 过滤 |
| 内参 β-肌动蛋白 | 江苏秦科生物研究有限公司 | AF7018 | 蛋白质印迹法 |
| 异氟烷 | 江苏中牧倍康药业有限公司 | 20220701 | 麻醉 |
| 液氮 | 昆明博泰干冰销售有限公司 | / | 肾脏组织冷冻 |
| 氯沙坦钾片 | 默克雪兰诺 &默沙东（中国）投资有限公司 | J20180054 | 治愈 |
| 低温高速组织研磨仪 | 武汉赛维尔生物科技有限公司 | SKZ3F20200191 | 组织研磨 |
| 马松染色试剂盒 | 北京索莱宝科技有限公司 | G1340 | 染色 |
| 甲醇 | 广东光华科技股份有限公司 | 20220519 | Western 转膜缓冲液 |
| Mini-PROTEAN Tetra | 博乐生命医药产品（上海）有限公司 | 552BR 233193 | 电泳 |
| 艾灸 | 云南中医药大学第二附属医院 | / | 治愈 |
| Multiskan Spectrum 微孔板分光光度计 | TECAN | 火花 | 检测组织蛋白的吸光度和浓度 |
| 手术剪 | 张家港市金丰鹿刀切割厂 | 201118 | 切开皮肤 |
| 多聚甲醛 | 北京兰杰科生物科技有限公司 | BL539A | 固定组织 |
| PERK蛋白抗体试剂 | 上海普迈生物科技有限公司（CST中国代理商） | 3192 | 蛋白质印迹 |
| 正荧光显微镜 | 卡尔·蔡司苏州有限公司 | 5446000456 | 拍摄图片 |
| 预制胶水 | 德润诚（北京）生物科技有限公司（ACE中国代理） | B230418 | 蛋白质印迹法 |
| ProteinFind 山羊抗兔 IgG(H+L)，HRP 标记 | 上海鼎然电子科技有限公司（TRAN） | HS101 | 蛋白质印迹法 |
| 研磨机 | 合肥荣事达小家电有限公司 | RS-FS1401 | 粉碎的中药 |
| PVDF膜 | 默克密理博公司 | IPVH00010 | 蛋白质印迹 |
| 冷藏离心机 | Hettich Precision Technology (Zhuhai) Co., LTD | MIKRO 220R | 离心 |
| RIPA 裂解液 | 北京索莱宝科技有限公司（Solarbio） | R0010 | 裂解组织 |
| 毛细管采样 | 江苏康健华医疗器械有限公司 | 20160157 | 内眦取血 |
| 烫伤膏（紫连膏） | 云南省中医医院 | / | 用于治疗艾灸引起的烫伤 |
| 脱脂奶粉 | 广州赛国生物科技有限公司（BIOFROXX） | 1172GR500 | Western 封闭缓冲液 |
| 手术刀片 | 上海医疗器械有限公司 | JOBO10 | 切口肾脏组织 |
| 手术刀柄 | 上海医疗器械有限公司 | J11010 | 安装刀片 |
| TS-200 轨道摇床 | 海门麒麟铃制造有限公司 | TS-8S | 凝胶固定 |
| Tween 80 | MedChemExpress | HY-Y1819 | TBST |
| 镊子 | 上海医疗器械有限公司 | JD1050 | 夹取艾绒 |
| 兽药*微核心肾功能检测试剂盘 | 天津微纳芯科技有限公司 | 47031-35.5-0145-0227-62-220750 | 肾功能检测 |
参考文献
- Run-Ming, Y. The origin and development of Chinese acupuncture and moxibustion. Ancient Science of Life. 4 (4), 224-228 (1985).
- Zhang, Q. W. Moxibustion Theories of Different Schools. , China Press of Traditional Chinese Medicine. Beijing. (2016).
- Ren, H. W., Cai, D. J.
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