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方法文章

用于临床前研究的结扎诱导牙周炎小鼠模型的优化

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DOI：

10.3791/65908

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2026年4月30日

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Division of Comprehensive Care, Department of Periodontology, University of North Carolina at Chapel Hill, 2Division of Pediatric and Public Health, Adams School of Dentistry, University of North Carolina at Chapel Hill, 3Department of Epidemiology, Gillings School of Global Public Health, University of North Carolina at Chapel Hill, 4Department of Applied Physical Sciences, University of North Carolina at Chapel Hill, 5Department of Biostatistics and Health Data Science, School of Medicine, Indiana University

本文内容

摘要

结扎诱导型牙周炎小鼠模型是研究牙周病的一种有效且日益普及的工具。本文详细介绍了该模型的一种简化版本的实施方法，重点在于邻间隙牙槽骨破坏，包括实验室研究设计、3D打印工具的制作，以及利用μCT分析进行骨量定量。

摘要

小鼠结扎诱导牙周炎的实验模型在理解牙周病发病机制方面发挥了基础性作用；然而，该模型在转化研究和治疗应用方面尚未得到充分利用。与人类疾病相似，小鼠结扎诱导的牙周炎通过一系列明确的微生物、炎症及骨免疫学事件发展而来。结扎引起的牙槽骨破坏在相对较短的时间内进展，且易于量化，使其成为一种经济高效的临床前研究疾病模型。

为克服经典结扎模型的技术难题，研究人员建立了简化的结扎诱导型小鼠牙周炎模型。该简化模型并非在两颗相邻牙齿的整个周径诱导疾病，而是仅针对两颗后牙的邻间区域引发炎性骨质破坏，此区域亦是人类常见牙周病的起始部位。由于该方法采用三维（3D）打印工具辅助结扎，操作快速且高效  领先的 每只小鼠的操作时间为5-10分钟。结扎后3天可检测到破骨细胞生成信号，而骨破坏则在结扎后9天持续出现。

在此，通过强调研究设计中的关键要素（即功效计算、操作标准化、校准），对简化的结扎模型方案进行了详细阐述，并介绍了3D打印工具的开发（即 "小鼠牙床" 和 "结扎夹持器"），以及采用μCT分析进行牙槽骨定量。牙龈基因表达的检测 Rank、Rankl 和 Opg 作为治疗有效性的间接证据，破骨细胞生成的关键调控三联因子被广泛应用。本文所述方法将指导研究者在临床前阶段应用简化的结扎诱导性牙周炎模型，以评估创新性牙周治疗手段的效果。

引言

牙周病是一种复杂的炎性过程，可导致牙周支持结构的破坏，包括牙龈、牙周膜、牙骨质和牙槽骨。牙槽骨丧失的发生需要牙龈屏障的破坏和细菌侵入，同时伴有炎性细胞的募集，以及免疫反应从以固有免疫为主向以获得性免疫为主的转变1。成骨细胞与破骨细胞之间最终的失衡将导致牙槽骨的破坏性吸收2。区别牙周病与可逆性牙龈炎症（牙龈炎）的关键表型特征是牙槽骨的丧失。因此，在临床前研究中，牙周支持性牙槽骨的量是评估治疗效果的关键指标。

没有一种动物模型能够复制开发不同治疗方法所需的全部生物学特征3,4,5结扎诱导的牙周炎小鼠模型可在相对较短的时间内（3-9天）产生可量化的骨质破坏5，使其成为测试牙周炎预防和调控新型治疗干预措施的经济高效模型。尽管其 成功支持II-III期人体临床试验的开展6,7,8,9,10，小鼠结扎诱导性牙周炎作为临床前模型并不常用。为克服 经典模型中结扎线环绕牙齿所带来技术难题，简化结扎诱导牙周炎小鼠模型11,12 已建立该模型。对经典模型的这一简单改良主要集中在牙齿之间而非牙齿周围的一个明确的骨破坏区域。这种改良具有多重优势，包括缩短以下方面所需的时间：1）人员培训，2）实验操作的技术难度，以及3）结果的可重复性 骨量定量。此外，研究发现，在该简化模型下发生和表现的多种微生物学和免疫学事件，与目前对人类常见牙周病的认识相一致2,11,12,13最后，我们先前已报道的有效药物诱导的骨丢失预防措施2,14 进一步支持将简化的结扎诱导牙周炎模型作为 体内 评估新型牙周治疗关键方面的工具。

简化型结扎诱导牙周炎模型的一个创新之处在于开发了3D打印工具，以更便捷地促进疾病诱导过程11,12尽管对某些人来说较为直观，但研究人员报告称无法组装这些3D打印工具15，这可能会进一步阻碍或延迟动物实验的启动。本研究在我们先前报告的基础上进行了拓展 先前的实验方案研究11并提供详细信息，以确保在实验室环境中成功实施简化的结扎诱导牙周炎模型。本方案中包含的细节属于一系列复杂的因素，这些因素可能导致科学研究结果的可重复性不足。15,16,17多项研究中一致的模型应用和可靠的骨吸收结果2,11,12,14,18 以及合作研究团队13,19,20,21 在过去10年中，支持传播详细信息以促进科学界可重复性的重要性。

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方案

本方案遵循《动物研究：体内实验报告指南》（ARRIVE指南）22,23。本方案中描述的所有实验程序均经北卡罗来纳大学教堂山分校动物照护与使用委员会（IACUC）批准。

1. 实验设计

  1. 样本量计算
    注意：由于本研究项目的转化性质，此处提供的功效计算基于8至12周龄野生型C57Bl6小鼠的牙槽骨测量数据。
    1. 根据釉牙骨质界与牙槽骨嵴顶之间的线性距离（CEJ-ABC）分析骨量。
      1. 健康小鼠的平均附着水平（即CEJ-ABC测量值）为0.2 mm，而结扎后第9天出现牙周炎的小鼠该数值增加一倍（CEJ-ABC距离为0.4 mm）11。从结扎后第9天到第18天，牙槽骨吸收未见显著进展11。
      2. 基于此效应量进行功效分析，以确定揭示健康与疾病之间差异所需的小鼠数量（此处共需8–10只小鼠[图1A]）。
        注意：采用双样本均值功效检验计算功效，目标功效为0.8至0.95，α = 0.05。各组均值及标准差见图1B。
    2. 为评估治疗对骨吸收的影响，需进行不同的功效计算。由于在本实验方案中，实验组与对照组小鼠均会发展为牙周炎，因此每组应预留19至31只小鼠，以确保在使用简化的结扎诱导牙周炎小鼠模型检测骨吸收调控时结果具有可重复性（参见代表性结果及图1C）。
      注意：功效计算采用与上述相同的统计方法。各组均值及标准差见图1D。
  2. 操作标准化与人员校准
    1. 在研究开始前，对所有参与疾病诱导与量化评估的人员进行培训和校准（包括组间和组内校准；r2 ≥ 0.90）。
      注意：预计结扎操作与骨吸收量化培训需要2–3个月时间（时间线见表1）。其他必要步骤的时间安排也列于表1中。
    2. 在结扎操作过程中，安排两名经过培训的研究人员在操作室内协同工作。主要研究人员（已完成组内和组间校准）作为操作者负责放置结扎线。
    3. 第二名研究人员作为操作助手，执行以下步骤：
      1. 记录小鼠体重。
      2. 将小鼠放入麻醉箱。
      3. 在将小鼠交给操作者并将其安置于"小鼠牙科床"之前，为其涂抹眼膏。
      4. 确保至少有3个"结扎线夹持器"已正确装载结扎线并处于待用状态。
        注意：为提高效率，建议预先准备至少3个已装载好的"结扎线夹持器"供操作者使用。推荐操作迅速（即每只小鼠操作时间5–10分钟），以增加每日可完成的实验数量，并减少潜在的批次效应。
      5. 对小鼠进行术前及术后监测。
        注意：结扎诱导的牙周炎是一种非侵入性、非手术性操作，类似于人类牙齿的牙线清洁。结扎线的放置可能引起小鼠极轻微的不适（主要由于两颗牙齿间细菌积聚所致），但通常无需使用镇痛药物。由经过培训的人员操作时，预期不会出现并发症。结扎后应每2–3天对所有动物进行一次监测。实验方案中应列出人道终点指标（例如无法自我梳理或进食、无法站立或移动、呼吸困难、伤口坏死或感染等），若出现任何异常情况，应及时咨询兽医人员以采取适当措施。

2. 制备用于在小鼠中诱导结扎性牙周炎的打印工具

注意：为了优化结扎线的放置，开发了名为Mouse Dental Bed和Ligature Holder的3D打印工具，这些工具由多个单独打印的3D打印部件组成，需手动进一步组装。这些装置的蓝图规格此前已发表11，可供有经验的研究人员用于创建各自的STL文件。 本研究中的新装置是与北卡罗来纳大学教堂山分校BeAM设计中心合作开发的。材料可通过相应的核心设施获取，或 使用补充文件1中的STL文件进行3D打印。

  1. 小鼠牙床
    1. 打印小鼠牙床（图2A）和结扎线夹持器（图 2B) 使用标准打印质量，以3.0 mm聚乳酸（PLA）耗材在3D打印机上打印。牙床部分按设计方向打印，其余部件则将统一的平面朝下，贴合打印平台。启动 支持材料选项 通过实现 支撑放置设置确保支撑材料首先接触构建板，方法是选择 触碰构建板选项.
      注意：使用五个 STL 文件 补充文件 1 打印所有必需部件，包括分离式管、结扎线（带凹槽）、小鼠牙床（带凹槽）、盖子和结扎线固定锁。参见 材料表 每件物品的尺寸（先前提供的蓝图规格）10).
    2. 打印完成后，使用剪线钳、尖嘴钳或其他工具修剪模型上打印的支撑材料部分。
      注意：进行此操作时需佩戴安全护目镜。
  2. 小鼠牙床组装
    1. 为准备小鼠牙床，按图示摆放所有部件（图3A）并准备好要使用的胶水（图3B).
    2. 滴加少量胶水（图3C）并按图示安装螺丝（图 3D）。再次准备转移胶水（图3E) 至预定应用区域。将打印好的试管的插槽滑动到相应位置。图3F）固定，倒钩端朝向远离小鼠牙床的方向（异氟烷输送软管将在此处连接）。
    3. 用胶水将头部固定部件固定在相应位置（图3F).
    4. 擦去多余的胶水，并对所有插入的部件保持轻微压力，以确保牢固粘合（图3F).
  3. 结扎丝固定器调整
    1. 为减轻锁定/解锁装置时的不适感，请确保结扎夹持器锁外部的所有方形/尖锐边缘均经过处理图 4A使用15C手术刀片手柄（3号手柄）配15C刀片，将末端以45°角略微斜削。
    2. 为确保锁定装置与结扎夹持器紧密贴合，需将结扎夹持器锁具内部的圆角修整为直角图4B- F使用15C号手术刀片。
      注意：这将使锁紧装置完全贴合结扎夹持器，仅需进行微调。
      1. 使用3D打印修整工具或15C手术刀片去除 "闪光" 顶部和底部边缘在去除大部分支撑材料后仍需保留，并将边缘以45°轻微倒角（类似于步骤1中对结扎夹持器锁进行的倒角），以确保锁件紧密贴合。
        注意：不要去除过多材料，仅需去除足够使锁具无阻力滑动的量即可。
    3. 如果过细，则修剪每根尖端的长度，直至达到较粗的横截面（至少0.5 mm厚），同时确保尖端之间保留足够的间隙，以防止结扎时触碰到腭部。修剪后应确保尖端长度至少为3 mm。图 5A，由……显示 "CUT").
    4. 在结扎夹持器的尖端，去除任何毛边 "支持" 确保工具打印时，尖端侧面保持平整（图5B，箭头）。
    5. 取出一个 "切片" 将每根结扎丝末端的一侧以45°角进行弯折，以便于将其安装到托槽上，同时使边缘更圆钝，防止对软组织造成创伤性损伤（图5C（由箭头指示）。
    6. 确保结扎线固定器上的每个尖端都包含一个 "V"-形凹槽，用于放置缝合丝线结扎。如果在步骤2.3.6中因初始打印的尖端过薄而将其移除，则需对打印件进行修整或重新制作。
      1. 如果这 "V"形切口可见时，将结扎夹持器平放在平坦表面上，使其两个尖端与台面平行，将15C手术刀片轻轻放入切口底部，并轻轻左右摇动刀片，使刀片边缘保持在切口底部 "V" 且刀片侧面接触顶部壁面的 "V". 将刀片置于切口底部，极其小心地将刀片朝向尖端的外表面倾斜，并重复此操作以修整尖端基部 "V"外缘有一个U形切口，便于缝合线更顺畅地引导到位。
        注意：这种摇动操作能使灯丝产生足够的位移，从而将其移开并修整切口，同时避免去除过多材料。
      2. 如果这 "V"形切口为 不 可见时，将结扎夹持器平放在平坦表面上，确保其两个尖端与台面垂直。沿结扎夹持器两个尖端的轴线垂直向下观察，将15C手术刀片置于尖端中间位置，并以一次果断的动作进行浅切，形成最终将成为 "V"形切口
        注意：分别对每个尖端进行此操作通常更为简便，而不必尝试同时将刀片放置在两个尖端的正确位置。
      3. 如有必要，重复步骤 2.3.7.2，确保刀片边缘始终回切至尖端中部的同一位置。
        注意：如果刀片边缘未能准确回切至同一位置，将产生多次切割，导致这些区域的丝材层开始分离，并可能降低工具的性能。
        注意：深度的 "V"- 形凹槽必须定期使用打结的丝线结扎线进行测试，以确定结扎线是否能够固定，或是否持续滑脱（若滑脱可能表明需要进一步优化）。打印持针器时，应使凹槽朝下接触构建平台，且结扎线固定锁的较宽开口朝下接触构建平台。同样，仅可使用“仅接触构建平台”模式设置支撑材料。
  4. 已组装的结扎线夹持器
    注意：完成修改后，组装结扎夹持器，并检查以下项目：
    1. 当结扎线固定到位时，应确保锁扣将线材夹紧在结扎线夹持器上（图中未显示）。 图6A 如箭头所示，但可见于 图6B在锁的顶部或底部（如果可能，同时在顶部和底部）固定。
      注意：这种摩擦力可确保结扎线不会滑脱。
    2. 当将结扎线穿入结扎线夹持器的凹槽时，若结扎线持续从尖端滑脱，可加深凹槽，或将凹槽进一步延伸至尖端外侧，以形成一个 "追踪" 线将放置的位置。
    3. 检查两个结是否居中（图6C）和水平（直线在 图6D从结扎夹持器前方观察时，若两个凹槽深度不一致，则其中一个凹槽比另一个更深。
    4. 检查结扎线是否恰好位于凹槽内，且未插入过深；否则，在放置结扎线时，结扎钳尖端可能接触软组织，导致创伤风险升高。
    5. 使用牙科探针（图6E），确认在结之间施加轻柔外力时，结扎线能回弹到位而不滑脱（此操作可模拟结扎线在实际放置过程中所受的力）。

3. 结扎线放置

注意：结扎丝可用于小鼠牙齿之间，可选择是否添加人类牙周致病菌11。对结扎丝上微生物组成（未添加人类细菌种类）进行的时间依赖性分析显示，在牙周炎发展过程中，微生物群落发生了改变（菌群失调）12。因此，不建议更换结扎丝，以免影响实验结果的可重复性。是否在结扎丝基础上引入细菌种类，取决于具体研究中所要解决的科学问题。由于预计会有10–15%的结扎丝脱落率11，通常在同一只小鼠双侧同时放置结扎丝。该方法可最大限度减少实验过程中小鼠的损失。

  1. 使用吸入式异氟烷麻醉小鼠后，将麻醉后的小鼠置于小鼠牙科床中，使其背部紧贴床面，鼻部靠近鼻罩。
    注意：小鼠应使用4%（体积/体积）异氟烷进行麻醉。异氟烷蒸发器和氧气需通过0.2 µm空气过滤器过滤。当小鼠完全麻醉并放置于小鼠牙科床后，应通过鼻罩以1.5–2.5%的浓度维持麻醉。通过观察小鼠的非自主性身体运动和呼吸频率（约55–65次/分钟）进行监测。对于诱导结扎性牙周炎的小鼠，无需给予镇痛药物，因为该操作为非侵入性、非手术性程序，类似于人类牙齿的牙线清洁。结扎操作可能引起小鼠极轻微的不适（主要由于两颗牙齿间细菌积聚所致），但不应使用任何镇痛药物。由经过培训的人员操作时，结扎放置后不应出现任何并发症。
  2. 使用橡胶带固定小鼠头部并打开其口腔。
    注意：缠绕下颌门齿的橡皮筋同时可牵拉舌头，其张力为被动作用，可在不牵拉下颌的情况下打开颌部。当光源以一定角度照射时，可减少阴影对视野的遮挡，从而更易于观察磨牙区域。该小鼠牙科床专为简化的结扎诱导牙周炎小鼠模型设计。小鼠鼻部与鼻罩之间需保持一定距离，以允许小鼠在实验过程中产生轻微的身体活动。这种活动有助于操作者在使用结扎夹持器时监测手部动作，并控制结扎放置过程中施加的力度。每只小鼠的结扎放置过程应耗时5–10分钟。实验操作应在通风良好的动物实验通风柜中进行。
  3. 在右侧放置结扎线时，右手持结扎夹持器，左手持探针。
    注意：如果结扎线上的结未位于夹持器两端之间居中位置，而是更靠近某一端，则该结扎线可能更适合放置于特定一侧。例如，若结更靠近结扎夹持器的右端，则该结扎线在右侧放置时更为方便。
  4. 将探针尖端轻柔地置于第一和第二磨牙邻接面腭侧下方。
    1. 应先使探针尖端接触牙齿表面，然后缓慢滑下并轻靠牙龈，以避免损伤软组织；探针正确就位后，将其手柄保持水平角度。
    2. 注意记录探针的哪一端用于右侧放置，哪一端用于左侧放置。确保探针尖端向上钩入邻接区域，同时使其杆部弯曲部分跨过对侧以稳定头部，抵抗放置过程中产生的反作用力。
  5. 以水平角度持结扎夹持器，首先将其置于第二和第三磨牙邻接面上方，将夹持器边缘抵住颊部并向外推动以牵开颊黏膜，随后将夹持器移至第一和第二磨牙的邻接处就位。
    注意：此步骤有助于确保在结扎线与牙齿之间无颊侧黏膜被夹入，否则将干扰结扎线的正确放置。
  6. 当结扎线已就位于第一和第二磨牙的邻接处时，将结扎夹持器手柄向上旋转至多45°，并结合轻柔的摇动和滑动动作，将结扎线推过邻接点。
  7. 剪除多余线头：
    1. 使用精细镊子夹住右侧结上连接的多余线头，将线头向左跨过牙齿拉直，然后使用略微张开的剪刀沿该线头向下滑动，直至剪刀位于距结约1.5 mm处，再进行剪断。
      注意：此操作有助于降低剪断多余线头时意外损伤黏膜的风险。
    2. 对另一侧的结重复上述操作，方向相反。
  8. 在口腔对侧放置结扎线时，重复步骤3.3至3.7.2。
    注意：建议在处死动物时收集结扎线，因为不同实验条件可能影响菌群失调的变化12。为便于收集，将小鼠置于小鼠牙科床中，先剪断结扎线的一个结，然后用镊子轻柔地从邻接面取出结扎线。在结扎线收集过程中使用小鼠牙科床可确保小鼠的适当稳定性，并便于接近结扎部位。

4. 骨破坏定量分析

  1. μCT 分析
    1. 打开软件并点击 文件 | 导入图像…
    2. 点击 浏览 在弹出菜单中，进入包含某次扫描的Dicom文件的文件夹，并选择第一个文件。
    3. 点击 检查 查找并选择文件夹中属于同一扫描样本的任何其他文件。单击 好的.
    4. 图像开始加载后，单击 可视化 和 等值面.
    5. 更换 图像阈值 到 5,000 和 表面质量因子 (%) 到 55.
    6. 已标记的复选框 启用图像平滑 和 使用当前感兴趣区域裁剪表面 并点击 更新.
    7. 调节 层级属性 通过右键单击 窗宽/窗位 在底部（图7A）并点击 调整窗宽/窗位属性选择一个 骨密度 所有样本的标准化值。遵循本方案时，请使用 2,000 但应根据样本的骨密度进行调整，并在所有测量中保持恒定。
    8. 要操纵平面：
      1. 使用键盘快捷键 I/J/K 显示/隐藏 三个不同的平面。
      2. 右键单击并移动光标以放大和缩小。
      3. 按压 移位 然后单击左键平移。
      4. 点击 切片 移动和旋转平面。
      5. 单击平面中心可前后移动平面，或在目标平面中心放置光标，然后使用上下箭头键逐层移动平面。
      6. 点击平面的边缘，围绕位于平面中心且平行于该边缘的直线进行旋转。
      7. 点击平面的角落可围绕该平面旋转。
    9. 调整 z 轴（屏幕顶部的蓝色面板——z 切片），使三颗牙齿的表面/形状同时（或尽可能接近同时）可见图7B).
    10. 在同一平面（屏幕顶部的蓝色面板-z-slice）中滚动，使1的根部st 和 2nd 磨牙可见（图7C尽量选择根部较深处的一点，以便观察到周围全部解剖结构，同时确保根管轮廓清晰且呈直线排列。
      注意：可能需要旋转平面以使管道垂直定向。
    11. 将x轴（z切片面板中的垂直绿色线）定向，使其与第一磨牙的颊侧根对齐st 和 2nd 磨牙（尽量通过每个根管的中央部分进行对齐；否则，通过对上颌第一磨牙的颊根进行对齐）st 磨牙及第二磨牙远中颊根nd 摩尔）（图7D).
    12. 以x切片的方向作为y切片对齐的参考（x切片面板中的垂直蓝色线条）。
      1. 将 y 切面调整至在 x 切面面板中垂直穿过第一磨牙牙根根部的位置​图7E）。旋转平面使根部呈垂直方向。观察到蓝线穿过根部的中点。
        注意：在骨量丢失区域（在此模型中属预期现象），牙槽嵴可能存在缺损；因此，必须估算牙根的中线位置，因为周围骨组织可能缺失，无法理想地界定牙槽窝的中点。
    13. 在 y 轴切片面板中，将光标置于釉牙骨质界（CEJ）沟槽最深点，按下并测量从釉牙骨质界（CEJ）至牙槽骨嵴顶（ABC）的距离 1，然后将光标置于ABC的最近点并按下 2 如所示（图7F）。第1st 第一个点用蓝色箭头表示，第二个点用绿色箭头表示。
      1. 如果箭头直到两个点都被选中后才出现，则需将箭头悬停在目标区域并按下键盘上的数字键进行选择，因为仅单击鼠标无法生效。
      2. 如果难以确定釉牙骨质界（CEJ），可使用上下箭头键滚动查看相邻切片以确认其位置。
      3. 如果测量 ABC 的多个点 "最近点" 很难确定以证实测量结果几乎没有变异。
        注意：为确认测量位置准确，必须观察到x和z切面在目标根部相交，并可通过隐藏切面在3D视图中直观确认测量位置图 7F).
  2. 牙龈表达中 Rankl/Opg 和 Rankl/Rank 的定量分析
    1. 按照先前所述方法收集牙龈组织9.
      注意：使用新鲜组织样本可获得最佳的RNA提取效果，且RNA纯化应尽快进行。
    2. 使用指定试剂盒和陶瓷珠，通过珠击法提取牙龈组织RNA。按照试剂盒说明书操作，并将样本于 -80 保存 °C，直至进行qRT-PCR分析。

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结果

野生型雌性和雄性小鼠在基线（健康状态）和结扎后9天的线性牙槽骨测量值的代表性数据分析如图所示 图1A功效计算表明，如果主要结局指标为通过μCT测量的线性骨水平，则每组需要4-5只小鼠，共需10只小鼠，以检测各组之间的差异图1B）。然而，临床前研究的统计功效计算要求两组小鼠均需发展出牙周炎，但其中一组接受治疗干预图1C）。对于此类研究，每组所需小鼠数量较多，为19–31只（图1D）。临床前研究中所需动物数量较多主要有两个原因：1）虽然两组均诱导疾病发生，但仅对其中一组施加实验干预，这会增加结果的变异性并影响可重复性；2）

将牙槽骨测量值与破骨细胞生成主调控三联体 Rank-Rankl-Opg 的信号特征相整合2 可为揭示驱动骨代谢调控的机制提供重要见解。为验证实验性药物VX-765（caspase-1...

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讨论

本研究提供了有关先前报道的简化型结扎诱导牙周炎小鼠模型方案的深入信息和详细的分步指导10。本文所包含的细节可显著影响实验的可重复性，并基于该研究团队在使用这一特定结扎诱导牙周炎小鼠模型方面的经验而提出11,12,13,18,19,21。文中详细描述了实验设计的具体内容、3D打印工具的开发与组装过程，以及量化骨破坏的分步操作指南。预计本文提供的详细信息将有助于推广并简化该简化型结扎诱导牙周炎小鼠模型的应用，使其成为未来治疗干预措施开发中一种经济高效的临床前研究模型。

该研究团队11开发的3D打印材料...

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披露

先前发表的研究中用于创建3D打印设备的STL文件9 受北卡罗来纳大学教堂山分校（"UNC-Mouse Surgical Bed 和 UNC-Ligature Holder"，UNC 参考编号：18-0024）的版权协议保护。作者声明不存在竞争性财务利益。

致谢

本出版物中报告的研究由美国国家牙科与颅面研究所 & 美国国立卫生研究院颅面研究项目资助编号 K01DE027087（JTM）和 R01DE032830（JTM）。本工作还获得美国国立卫生研究院过敏与传染病研究所资助编号 R01-AI153265（KVS）的支持。上述内容仅代表作者观点，不代表美国国立卫生研究院的官方立场。此外，本研究所报告的工作还得到富布赖特/CAPES 项目（资助代码 001，TA）的支持。

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材料

本文使用的材料清单
姓名公司目录编号评论
刀片Integra4-315C15C 刀片
陶瓷珠VWR10158-6080.5 mL × 1.4 mm 陶瓷珠
胶/树脂材料The Gorilla Glue Company8401519
结扎夹持器（带凹槽）北卡罗来纳大学教堂山分校 BeAM 设计中心核心设施不适用118.01 mm × 13 mm × 13.74 mm
结扎夹持器锁北卡罗来纳大学教堂山分校 BeAM 设计中心核心设施不适用17.5 mm × 14.57 mm × 17.8 mm
Lulzbot mini v1.0 3D 打印机 Lulzbot（Fargo Additive Manufacturing Equipment 3D, LLC）不适用Aleph Objects Lulzbot Mini v1.0 型号
MicroView 软件Parallax Innovations2.5.0-3139用于骨测量的软件
小鼠牙科床（带凹槽）北卡罗来纳大学教堂山分校 BeAM 设计中心核心设施不适用103.86 mm × 196.85 mm × 50.99 mm
小鼠牙科床上盖北卡罗来纳大学教堂山分校 BeAM 设计中心核心设施不适用99.8 mm × 77 mm × 21.5 mm
聚乳酸（PLA）线材Verbatim552593.0 mm PLA
Rapidpure RNA 组织试剂盒MP Biomedicals112721050
手术刀片手柄Bard-Parker37103015C 手术刀片手柄
丝线缝合线Roboz Surgical InstrumentSUT-15-1
Taqman qPCR 引物Thermo FisherRank (Mm00437135_ m1), Rankl (Mm00441906_ m1), Opg (Mm00435452_ m1), Gapdh (Mm99999915_g 1)
VX-765 InvivoGen, San Diego, USA#inh-vx765-1用于宿主调节的 Caspase-1 抑制剂

参考文献

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