十二指肠-空肠旁路（DJB）手术可改善葡萄糖代谢并减轻胰岛素抵抗。本文中，我们介绍一种建立稳定且可靠的小鼠DJB模型的实验方案。
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方法文章
饮食诱导的肥胖糖尿病小鼠十二指肠-空肠旁路手术
* These authors contributed equally
本文内容
摘要
摘要
肥胖和2型糖尿病的流行已成为严重的全球公共卫生问题。肥胖是2型糖尿病、心血管疾病以及某些癌症的主要致病因素。减重手术为肥胖和糖尿病提供了长期且有效的治疗选择。袖状胃切除术（SG）和Roux-en-Y胃旁路术（RYGB）被广泛认为是最常用的减重手术方式。此外，一些探索性的减重手术也显示出良好的治疗效果。十二指肠-空肠旁路术（DJB）特别适用于体重指数较低的糖尿病患者，并已显示出有益的代谢改善作用。然而，由于动物模型有限，其独立于体重变化的代谢益处尚未完全阐明。本文介绍了在饮食诱导的肥胖（DIO）糖尿病小鼠中实施DJB手术的优化护理方案和外科技术。利用小鼠模型有助于更深入地理解DJB手术所诱导的代谢变化本质，同时推动相关临床实践的发展。
引言
肥胖症和2型糖尿病是世界上最常见的慢性疾病，其在年轻个体中的患病率正在上升1。减重手术是治疗肥胖症和糖尿病最有效的方法，能够促进长期血糖稳定，同时改善与肥胖相关的并发症2,3。减重手术有多种类型，根据其是否减少胃容量或肠道吸收能力可分为限制性、吸收不良性和联合性手术4,5。
十二指肠-空肠旁路术（DJB）最初由 Rubino 和 Marescaux 开发，他们证明连接十二指肠与空肠可缓解2型糖尿病，其效果并非源于胃容量的减少6,7。DJB 保留完整的胃，并绕过整个十二指肠及近端空肠。肠道被分为胆胰支、食物支和共同支6,8。DJB 与多种减重手术具有相似之处，包括 Roux-en-Y 胃旁路术（RYGB）、迷你胃旁路术、胆胰分流术、十二指肠转流术以及 DJB 联合袖状胃切除术9。与 RYGB 相比，DJB 无需进行胃肠吻....
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方案
以下所述的所有实验方案步骤均遵循中国南部战区总医院动物护理与使用委员会在批准号2020112501下的指导方针。
1. 术前常规准备
注意：购入30只6周龄雄性C57BL/6小鼠。小鼠饲养于特定病原体阴性（SPF）级实验室内，光照周期为12小时明/12小时暗，温度为22 ± 2 °C，湿度为55–65%。小鼠可自由饮水，并饲喂60% kcal脂肪饮食持续6周以诱导肥胖。随后连续5天给予腹腔注射链脲佐菌素（40 mg/kg）以诱导糖尿病17。在30只小鼠中，有22只小鼠随机血糖水平> 300 mg/dL，被随机分配至DJB组（n=15）和假手术组（n=7）。另有8只小鼠因血糖未达标被排除于实验之外。
- 手术前对小鼠禁食 8 小时，术前 2 小时撤去饮水。
- 经腹腔注射 1% 戊巴比妥钠溶液（6 mL/kg）和丁丙诺啡（1 mg/kg）。用镊子轻触小鼠足趾或尾巴，确认小鼠无明显抽搐或抖动反应。在充分麻醉状态下，小鼠可自由呼吸，无需辅助供氧。
- 将小鼠仰卧置于无菌板上，并在体视显微镜下操作。眼部涂抹眼膏以防干燥。使用电热毯在整个手术过程中维持小鼠体温。采用无菌操作技术，包括穿戴无菌手术衣、无菌手套及使用经高压灭菌的器械。
- 对于假手术对照组小鼠，在幽门下方 1 cm 处的....
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结果
一般情况
DJB 手术的平均手术时间为 84.5 ± 2.6 分钟。共有 15 只小鼠接受了 DJB 手术，其中 9 只存活。如表 1所示，大多数死亡发生在手术期间或术后 7 天内。术后死亡原因为：术后第 1 天出血（n=2），术后第 4 天吻合口漏（n=1），术后第 7 天吻合口梗阻（n=2），以及术后三周原因不明死亡（n=1）。
在本实验开始前的8周内，我们每周对10只小鼠进行一次DJB手术，作为预实验以简化操作流程。如图4所示，我们获得了预实验期间小鼠每周存活率的变化趋势。观察结果显示，存活率呈逐步上升趋势，表明掌握DJB技术需要进行强化的手术训练。
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讨论
1953年，Varco等人18实施了首例空肠-回肠旁路手术，标志着减重外科的开端。自那时以来，外科医生已开展了大量减重手术。这些手术可实现体重下降，并改善代谢相关并发症4,19,20。此外，1967年，Mason和Ito21完成了首例Roux-en-Y胃旁路术（RYGB），该术式能有效减轻体重并改善代谢综合征。与RYGB类似，十二指肠转流术（DJB）是一种保留胃的RYGB改良术式，将小肠分为胆胰支、食物通道支和共同支。DJB手术可在不依赖食物摄入量减少或体重下降的情况下，实现显著且持久的血糖控制22,23。因此，DJB已被推荐作为体重指数较低的2型糖尿病患者合适的减重手术选择24。
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披露
作者声明无利益冲突。
致谢
本研究得到了中国广东省科学技术计划项目（编号：202002020069）的资助。
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材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 腹部拉钩 | F.S.T | 17000-03 | Colibri 拉钩 -3cm，拉钩范围 1.5cm/3cm 长 |
| 1% 戊巴比妥钠溶液 | 广州化学试剂厂 | / | 将 500mg 戊巴比妥钠粉末溶于 50ml 生理盐水中，配制成 1% 戊巴比妥钠溶液。 |
| 注射用青霉素钠 | 华北制药股份有限公司 | F2062121 | 青霉素 |
| 丁丙诺啡 | 广州化学试剂厂 | / | 镇痛 |
| 丁丙诺啡 | 广州大冢制药有限公司 | / | 镇痛药 |
| 柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液 | LEAGENE | R00522 | 缓冲溶液 |
| 棉签 | 好正医疗 | 60220610 | 棉拭子 |
| 脱毛膏 | Veet | AAPR-S222 | 脱毛乳霜 |
| 耳标 | ZEYA | SUS304 | 耳标标记 |
| 电热毯 | ZOSEN | ZS-CWDRT | 加热垫 |
| 电子天平 | 梅特勒-托利多 | 20060902-6 | 称量体重 |
| 肠内营养粉 | 雅培实验室 | / | 营养粉 |
| 眼膏 | 广州大冢制药有限公司 | / | 保护眼睛 |
| 血糖仪 | 罗氏 | 6993788001 | 评估血糖水平 |
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| 高脂饮食（高脂 [60FDC] 纯化啮齿类动物饲料） | Dyets | 112252 | 60kcal% 高脂饮食 |
| 微型镊子 | 金钟医疗 | 18-1140 | 微型镊 |
| 微型持针器 | 金钟医疗 | EMT-160-Z | 持针器 |
| 微型剪刀 | 金钟医疗 | YBC010 | 微型剪 |
| 显微镜相机 | LAPSUN | E 2000 | 视频采集 |
| 眼科剪刀 | 金钟医疗 | Y00030 | 手术剪 |
| 戊巴比妥 | 广州化学试剂厂 | / | 麻醉 |
| 氯化钠注射液 | 广州大冢制药有限公司 | B21L0301 | NaCl 0.9% |
| 体视显微镜 | ZEISS | Stemi 305 | 双目体视显微镜 |
| 链脲佐菌素 | Sigma | S110910-1g | STZ |
| 缝合线 | 灵桥缝线 | ZS-LQPMRZ5/0 | Prolene 6/0，Prolene 10/0 |
| 组织镊 | 金钟医疗 | H1701 | 手术镊 |
参考文献
- Lascar, N., Brown, J., Pattison, H., Barnett, A. H., Bailey, C. J., Bellary, S. Type 2 diabetes in adolescents and young adults. Lancet Diabetes Endocrinol. 6 (1), 69-80 (2018).
- Song, Y., Zhao, F. Bibliometric analysis of metabolic surgery for type 2 diab....
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重印与许可
