Longa 大脑中动脉闭塞方法的优化

摘要

该协议为研究人员提供了使用改良的 Longa 颈外动脉方法对小鼠进行大脑中动脉闭塞手术的分步指南。本文中介绍的改良旨在提高大脑中动脉闭塞的准确性并确保完全再灌注。

摘要

大脑中动脉闭塞模型是研究缺血性中风的主要动物模型。尽管在研究中使用了三十多年，但其标准化仍然不足。该程序主要在大鼠和小鼠身上进行，由于小鼠的体积更小、更脆弱，因此带来了挑战。与 Koizumi 颈总动脉方法不同，Longa 颈外动脉是唯一确保缺血后完全再灌注的腔内细丝卒中模型。这方面对于研究再灌注现象具有至关重要的意义。本文中演示的手术修改可确保在整个缺血期和再灌注开始后从颈总动脉连续流血。这些修改的目标是在缺血期间，通过在大脑中动脉近端的分支中保持灌注不间断，选择性地闭塞大脑中动脉。此外，再灌注的发生是突然的，可以精确控制，从而更准确地模拟人类医学中的血管内血栓切除术。我们展示这篇全面的视频文章的目的是简化新外科医生的培训，并促进科学界外科手术的标准化。

引言

中风是第二大死亡原因，也是导致死亡和残疾的第三大原因¹。就其原因而言，中风可以是缺血性或出血性，缺血性中风在临床实践中明显更为普遍。缺血性中风是由于向脑组织供血的动脉阻塞引起的，导致缺血、细胞死亡和炎症。自溶栓和机械血栓切除术等再灌注疗法问世以来，中风的治疗取得了长足的进步。然而，所有再灌注疗法都存在导致通常所说的再灌注损伤而加剧患者病情的风险²。再灌注损伤的确切机制尚不清楚，需要进行临床前研究来确定潜在原因和预防措施。为此，为缺血性卒中后的再灌注损伤开发一个相关的动物模型变得至关重要。

大脑中动脉闭塞 （MCAO） 是研究缺血性卒中最常用的动物模型。它主要在啮齿动物中进行，到目前为止，科学文献中描述了许多不同的变体 ^3,4。两种主要类型，小泉和 Longa，被称为颈总动脉 （CCA） 和颈外动脉 （ECA） 变体，在技术上区别在于细丝插入的动脉切开部位 ^5,6。在我们最近的文章中，通过血管灌注的体内监测，我们表明只有 Longa 方法可以真正被视为脑缺血/再灌注模型⁷。该过程包括将细丝插入 ECA，将其推进 ICA，并将其固定在大脑中动脉 （MCA） 的分支点以诱导脑组织缺血。在预定的缺血期之后，丝的退出允许再灌注，模拟短暂性脑缺血。中风发作后，研究中使用的主要结果变量通常是梗死病变的体积，可以使用离体组织学或体内脑部扫描进行测量。MCAO 模型的挑战围绕着归因于变体间、运算符间和受试者间差异的低重现性，后者在临床前卒中研究中构成了重大限制⁴。

此外，相对于啮齿动物大脑的大小，啮齿动物 MCAO 后的梗死区域是巨大的。此外，大脑的海马后部区域经常被募集到梗死体积中，尽管这些区域主要依赖于大脑后动脉 （PCA） 的血流，而不是 MCA⁸。与文献中描述的 Koizumi 和 Longa 方法一样，由于小鼠 Willis 环的通畅不完全，CCA 在缺血期间保持连接状态，导致缺血诱导区域比预期要宽得多 ^5,6,9。即使在缺血期后重新开放或修复 CCA 的方法中，通常的 30-60 分钟缺血也会导致非 MCA 区域出现不可逆的组织损伤¹⁰。此外，与预期相反，先前的研究表明，细丝的硅涂层长度对病变大小¹¹ 没有影响。然而，在闭塞期间，细丝硅涂层长度的选择仅在具有连接 CCA 的模型中得到解决。

该方法的目标是修改小鼠的 Longa MCAO 方法，使其在缺血期间能够不间断地从 CCA 流出，从而提高 MCAO 的选择性，并确保手术后梗死区域的完全再灌注。这些修改将通过降低死亡率和减少受试者间方差，极大地有利于研究小鼠缺血再灌注损伤的纵向研究。

方案

所有动物处理和程序均已获得萨格勒布大学医学院伦理许可委员会和克罗地亚共和国农业部用于科学目的的动物保护伦理委员会的批准。根据克罗地亚动物保护法 （NN 102/17， 32/19）、动物保护法修正案 （NN 37/13） 和用于科学目的的动物保护指南 （NN 55/13） 进行实验程序，这些指南符合欧洲实验动物护理和使用指南（指令 2010/63/EU）。

1. 动物和手术部位的准备

1. 将动物置于敲除盒中，并在氧/氮混合物（1:2 比例）中使用 5% 体积的异氟醚诱导麻醉。
2. 目视检查动物的意识状态和呼吸频率后，将其带到实验室秤上称重。
3. 通过捏住下肢的指间皮肤来检查反射，以确保适当的麻醉深度。
4. 将动物放在加热的手术台上，并将其鼻子放入麻醉面罩中。将初始操作台温度设置为 36 °C 并调节它以将动物的体温保持在 37 °C（通过后续步骤中引入的直肠探针测量）。在所有进一步的步骤中，调整异氟醚的体积分数，以保持动物的呼吸频率为 100 次呼吸/分钟。
   注意:手术前必须彻底消毒所有与动物直接接触的表面和材料。
5. 将眼药膏涂抹在动物的眼睛上，以保护它们免受脱水和异氟醚气体的影响。
6. 将动物仰卧并伸展脖子，在其下方放置一个由手术胶带制成的小枕头。
7. 使用手术胶带将动物的四肢固定到位。注意不要过度伸展前肢，以免无意中导致肩关节脱位。
8. 使用凡士林润滑直肠探头，并将其插入直肠进行连续体温测量。使用手术胶带将探头与尾部一起固定到位。
9. 术前腹膜内注射生理盐水和丁丙诺啡 （0.5 mg/kg），以保持动物在手术过程中水分充足和镇痛。
10. 使用无线动物剪剃掉动物颈部区域的皮毛。使用手术胶带收集所有剃光的毛皮。此外，用剃须刀剃掉该区域，使其完全没有毛皮。
11. 根据被测动物的体重和/或年龄选择 MCAO 细丝。将其从容器中取出，放入可见位置的培养皿中。在细丝的硅胶部分滴一滴盐水，保持其清洁无尘。
    注意: 对于 12-16 周龄的鼠标，应根据制造商的官方建议选择细丝硅胶涂层的厚度。此外，应事先仔细规划硅胶涂层的长度，具体取决于要封闭的灌溉区域的大小（见 讨论）。
12. 将干净的手术单放在手术台上。
13. 将一滴 Betadine 涂抹在动物剃光的皮肤上。使用棉签将消毒剂从内到外以圆周方式擦入皮肤。之后，用浸有乙醇的棉签做同样的事情。每次重复时，用一对新的无菌棉签重复此步骤 3 次。
14. 将少许利多卡因凝胶涂抹在未来切口部位的消毒区域，以进行局部伤口镇痛。

2. 缺血诱导手术

1. 使用手术刀在消毒过的皮肤上做一个初始切口。将皮肤切口敲击的次数保持在最低限度，以使手术伤口更容易愈合。
   注意:所有器械必须事先消毒过。读者应参考其有关使用无菌或外科手套的机构指南。
2. 使用 7 型和 5 型镊子撕开浅筋膜，并将唾液腺从底层组织中分离。
   注意:始终使用闭合的镊子前进，并在远离时伸展镊子以将组织推开。这样，可以以最小的组织创伤穿越解剖空间。
3. 将金属丝牵开器置于初始位置，同时确保唾液腺不会干扰后续步骤。
4. 使用 7 型镊子去除深颈筋膜，并从颈动脉区域分离胸锁乳突肌以重新定位牵开器。
5. 重新定位牵开器以到达胸锁乳突肌下方，以便进入颈动脉区域。
6. 切除舌骨肌，以便清晰、直观地接近颈动脉区域。
7. 将颈动脉及其分支从颈动脉静脉和迷走神经中释放出来，它们一起固定在颈动脉筋膜中。
   注意:必须小心去除此筋膜，以免损伤迷走神经或导致任何严重出血。
   1. 捏住颈动脉三联征外侧的颈动脉筋膜，轻轻地向外侧拉动，以直观地识别动脉、神经、静脉和周围的所有血管分支。
   2. 在横向拉动筋膜的同时，使用 5 型镊子将 CCA 与相邻的神经和静脉分开，直到分支点和穿过 CCA 的甲状腺上静脉。
   3. 使用弯曲的 7 型镊子将 CCA 的下部与下面的组织和筋膜完全分离，确保它准备好在未来的步骤中夹紧。
   4. 在 CCA 分支点上方的区域沿颅骨前进，使用两个镊子撕开颈动脉筋膜。
   5. 同样，向内侧和外侧拉动颈动脉筋膜的松散端，以分别将 ECA 和颈内动脉 （ICA） 与筋膜和周围组织精确分离。
   6. 使用弯曲的 7 型镊子将 ECA 和 ICA 从底层组织中释放出来。
8. 用两个各自的分支精心准备 CCA，使用弯曲的 7 型镊子抬起 ECA，并用 N0 型自闭合镊子夹住它。
9. 小心地将 N0 型自闭合镊子放在手术台上。
   注意: 要重新定位 ECA 的夹紧点，有时需要稍微松开夹具并向尾部推动 ECA 分支点。此时，重要的是要确保在 ECA 夹紧和分支点之间保留超过 1 mm 的 ECA。
10. 用 N0 型镊子夹住 ECA 并牢固固定后，在 ECA 后面引入两根编织丝线。
    注意:颅骨线将形成结扎结，必须从夹钳部位放在颅骨上。
11. 完全系住颅线，因为它是永久性的，然后用剪刀剪掉多余的线。
12. 将尾线打成一个松散的固定结。
    注意:必须将其放在靠近 ECA 分支点的位置，并保持松散，以便 MCAO 细丝通过。
13. 使用血管微夹，夹住 CCA 和 ICA，以防止动脉切开术后出血。
    注意:确保应用于 CCA 的微夹具有足够强的抓地力至关重要，因为 CCA 是一条搏动的高通量动脉，如果不这样做，可能会导致动物在后续步骤中大量出血和死亡。
14. 使用微弹簧剪刀，在 ECA 夹紧部位正下方进行小动脉切开术。
    注意:动脉切开术需要足够大，以便细丝的硅部分进入，但不能大于 ECA 周长的一半，以免损害 N0 型镊子保持的张力。
15. 以与 ECA 的角度匹配的角度，将细丝沿 CCA 近端方向插入动脉切开部位，穿过 ECA 分支部位的松散固定结，并与细丝一起插入 CCA 的管腔。
16. 拧紧灯丝硅部分周围的固定结。
    注意:此时需要非常小心，因为细丝往往会在最后一次机动的中途从 ECA 中滑出，此时将其放回去非常困难。
17. 小心地打开 ICA 微型夹并将其取下。
18. 将细丝部分插入 ECA 并固定下来，进行完整的动脉切开术，从而使 ECA 残端松散，MCAO 细丝在里面。此时，松开 N0 型自闭合镊子并将其取出。
19. 用一套 5 型镊子，用力捏住 ECA 残端并稍微抬起。在用另一把镊子抓住部分插入的细丝的同时，降低并轻轻拉动 ECA 残端，使细丝的内端朝向 ICA。切勿夹住细丝的硅胶部分。
20. 用镊子抓住细丝，慢慢地将细丝穿过 ICA 推向 Wills 的圆圈。
    注意:ICA 的第一个分支点也是操作员唯一可能错过所需 MCA 分支点的分支点。因此，需要一个轻微的横向前进角才能将细丝引导到 MCA 分支点。随着轻微的横向推进角，细丝从翼腭动脉 （PPA） 弯曲，使前进端更有可能进入 Willis 环（图 1）。

图 1:大脑中动脉闭塞丝推进超过翼腭动脉分支点的图示。 适当的细丝推进（左）是通过调整 MCAO 细丝的方向来实现的，使其背靠 ICA 的侧壁并弯曲远离 PPA 分支点。否则（右侧）可能会导致细丝进入 PPA 而不引起中风。在后一种情况下，细丝将无法达到应有的程度，外科医生应撤回细丝，直到其末端在 ICA 分支点可见，然后再次开始推进细丝。绿色动脉代表后交通动脉 （PcomA），在小鼠中大多为非通畅动脉。使用 BioRender.com 创建。 请单击此处查看此图的较大版本。

21. 慢慢地将 MCAO 细丝推进穿过 Willis 圈，直到感觉到阻力突然增加。
    注意:此时，观察细丝的剩余长度很重要。细丝应毫不费力地从成年小鼠的 ICA 分支点开始至少 7 毫米。
22. 拧紧固定结，以确保细丝在缺血期间不会移位。
23. 移除 CCA 剪辑并记下时间。
    注意:这标志着缺血发作的开始。
24. 将 MCAO 细丝的松散端塞入颈动脉三角和同侧胸锁乳突肌之间的凹槽中，使其不会从手术伤口中伸出。
25. 取下金属丝牵开器，使手术伤口的边缘彼此靠近。让手术部位停留几秒钟，让组织恢复到其解剖位置。
26. 使用胶带伤口闭合闭合手术伤口，以促进缺血期后伤口更快地重新开放。
    注意:如果研究人员希望让动物在缺血期间醒来，建议缝合伤口以防止伤口过早重新打开。

3. 缺血期

1. 使用 MRI 或其他一些定量灌注测量方法验证手术是否成功。
   注意:在进行 MRI 扫描的情况下，灌注加权成像 （PWI） 应显示宽 MCA 区域的严重缺血，弥散加权成像 （DWI） 应概述由于细胞水肿导致表观弥散系数 （ADC） 降低的部位。
2. 将动物放入干净的笼子中，直到缺血期结束。

4. 细丝撤离手术

1. 在分配的缺血时间结束前大约 5 分钟，将动物定位并再次固定在手术台上。
2. 取下胶带缠绕闭合处，然后用导丝牵开器重新打开手术伤口。
3. 将 MCAO 细丝的松散端从周围组织和固定结线的末端松开。
4. 用 N0 型镊子，捏住并向腹侧拉动 ECA 残端的边缘，使其施加张力。小心地将捏镊子放下，类似于第一次外科手术。
   注意:操作员必须避免捏住固定结，因为这会使结无法解开。
5. 用微血管夹再次夹住 CCA。
6. 使用 5 型镊子，松开固定结以提取细丝。
   注意:开始松开打结的最佳方法是不断捏它，直到它分成单独的部分，然后将线末端推向打结。
7. 慢慢抽出 MCAO 细丝，直到硅部分开始从 ECA 残端伸出。稍微收紧固定结，为完全抽出细丝做好准备。
8. 当靠近灯丝的硅端时，拧紧固定结，使其推出 MCAO 灯丝并一次性闭合 ECA 残端。细丝滑出后，将结完全收紧。
9. 打开并取出捏合镊子和 CCA 夹。
   注意:这标志着缺血期的结束和再灌注过程的开始。
10. 拆下金属丝牵开器，将手术伤口的边缘再次合拢。
11. 从外围开始缝合手术伤口，完全闭合伤口，看不到任何底层组织。
    注意:所需的缝合线数量取决于手术伤口的大小。
12. 使用外用酒精湿巾清洁和消毒手术部位。

5. 术后护理

1. 将动物放在干净的笼子里，让它从麻醉中自发醒来。
2. 将颗粒状食物放在笼子底部，以便于取用。用饮用水软化食物颗粒。在一个小培养皿中装满饮用水，并将其也带到笼子的地板上。
3. 在接下来的 48 小时内，每 24 小时腹膜内注射 0.25 mL 盐水和丁丙诺啡 （0.5 mg/kg）。

结果

术中或术后 MRI 扫描，特别是灌注加权成像 （PWI） 和/或弥散加权成像 （DWI） 扫描（图 2）可以提供手术成功的明确证据。术中 PWI 显示同侧 MCA 区域严重缺血，从而证实细丝放置导致完全闭塞。成功手术的术后 PWI 显示病灶核心高灌注，以及 MCA 区域边界有一定程度的再灌注。术中 DWI 病灶对应于术中 PWI 上观察到的缺血区域。术后 DWI 病灶向缺血病灶核心收缩，伴有病灶表观弥散系数显着降低，使其比术中 DWI 病灶和周围再灌注脑组织更暗。标准的 T2 解剖扫描，包括术中和术后，通常不会显示任何值得注意的，除非发生细导的出血

（图 3）。在这种情况下，PWI 和 DWI 扫描显示不完全缺血或无缺血。

再灌注过程在接下来的 48 小时内进行，并在手术后第二天进行的 MRI 扫描中确认已发生（图 2，第 2 天的 CBF）。PWI 扫描显示病变部位完全再灌注，病灶核心有轻微的高灌注。DWI 扫描显示由于脑水肿形成，多个区域的表观弥散系数降低。T2 解剖扫描显示水肿高信号区域包围 MCA 区域，不涉及非 MCA 区域，例如海马体。

醒来后，动物表现出明显的急性中风迹象。常见的行为症状包括病变一侧的肌肉张力增加，导致动物将其躯干向该方向弯曲。沿同侧方向盘旋和旋转也是急性中风的明显迹象。共济失调步态通常表明海马体参与缺血病灶体积。然而，由于异氟醚麻醉的副作用，这种症状在超急性期可能缺乏特异性。在随后的几天里，动物应该出现前肢同侧屈曲和姿势状态恶化，并伴有胡须反射的缺失。由于脑水肿，死亡率在手术后 3 天左右达到峰值。慢性期始于脑水肿开始消退后。在此期间，动物可能会出现尿潴留。因此，检查动物的膀胱硬度以及尿道出口处的坚硬帽非常重要。大多数时候，这个问题可以通过轻轻按摩膀胱以促进排尿来解决。体重恢复迹象通常在中风发作后的最初 7 天内出现。

图 2:通过 MRI 扫描确认完全再灌注的成功 MCAO 的代表性示例。 CBF、ADC 和 T2w 分别代表脑血流图、表观弥散系数图和 T2 加权解剖扫描。IntraOP 、 postop 和 D02 分别表示缺血发作后、再灌注发作后和 MCAO 后第 2 天的 3 个不同影像学检查时间点。 请单击此处查看此图的较大版本。

图 3:MCAO 手术期间细导出血的代表性 MRI 扫描。 CBF、ADC 和 T2w 分别代表脑血流图、表观弥散系数图和 T2 加权解剖扫描。IntraOP 、 postOP 和 D02 表示 3 个不同的影像学时间点: 缺血发作后、再灌注发作后和 MCAO 后第 2 天。 请单击此处查看此图的较大版本。

图 4:大脑中动脉分支正确放置细丝的图示。 在大多数情况下，细丝的硅部分（白色）位于大脑前动脉 （ACA） 的近端部分，比 MCA 分支点远约 2 毫米。通常，小鼠的 ACA 大脑区域不会受到影响，因为 ACA 与对侧的 ACA 连接成一个单一的合子 ACA。受影响的动脉显示为灰色。在左侧，CCA 在缺血期间保持通畅，从而向所有 ICA 分支供应血液，直到被细丝的硅部分阻塞的 MCA。在右侧，细丝的位置相同，除了 CCA 连接在缺血期间保持。由于 PcomA（绿色）在大多数情况下不是通畅的，如果保留 CCA 连接，卒中会通过 MCA、AchA、VTA、HTA 和 PCA 非选择性地包裹同侧半球的大部分。在这些情况下，由于 PPA 阻塞，也可以观察到眼部急性梗塞（白细胞症和神经萎缩不等大）的迹象。使用 BioRender.com 创建。 请单击此处查看此图的较大版本。

讨论

MCAO 对操作者来说是一个要求很高的程序，对动物来说是一个使人衰弱的程序。出于这个原因，研究人员拥有一个标准操作程序至关重要，该程序可以最大限度地减少中风的严重程度，减少手术失败，并改善动物术后的健康状况。该 MCAO 协议强调了在鼠标上执行此过程时需要考虑的一些关键方面。

MCAO 细丝的选择会影响诱发的中风病变的大小和位置，因此是该程序中的关键步骤¹¹。硅涂层细丝，例如 Doccol 率先推出的细丝，在降低细导出血的发生率方面取得了重大飞跃¹²。然而，硅涂层细丝的尺寸和长度多种多样，这给新研究人员在实验动物中选择合适的 MCAO 提出了挑战。虽然细丝制造商通常会提供为给定动物体重选择正确细丝直径的指南，但硅涂层的长度被认为是操作员的个人喜好，只能根据操作员的技能进行选择。在这项工作中，我们主张最小化硅长度，以确保诱导的中风病变仅包括 MCA 冲洗区域，从而提高可重复性。 图 4 表明，大脑后动脉 （PCA） 是第一个颅内 ICA 分支，供应大脑的后部区域，包括海马体的一部分。最近对小鼠的显微 CT 研究确定了在 MCA 分支点之前由 ICA 产生的另外三个较小的分支¹³。脆弱而多变的下丘脑动脉 （HTA）、腹侧被盖动脉 （VTA） 和脉络膜前动脉 （AChA） 按其分支顺序对变异内和受试者内变异性有显着贡献⁸。此外，显微 CT 研究表明，在小鼠中，与 MCA 和 PCA 分支点的平均距离约为 1.7 毫米，比大多数人造细丝的硅涂层长度短得多¹⁴。由于操作员在推进细丝时收到的唯一反馈是细丝到达 MCA 分支点时阻力的突然增加，因此细丝硅涂层的拖尾长度会诱导 MCA 缺血，并且根据硅涂层的长度，会诱导 AChA、VTA、HTA 甚至 PCA， 引入与预期的 MCAO 模型相反的可变性。因此，为了保持可重复性和术后动物健康，目标应仅是 MCA 闭塞。Doccol 提供硅涂层从 1 到 2 毫米不等的 MCAO 线材，但我们的经验表明，使用 1-2 毫米的涂层通常会导致假手术而不会引起中风。术中 MRI 扫描显示，细丝在 MCA 分支点之外推进至 2 毫米，进入大脑前动脉 （ACA），然后向操作者提供关键的阻力反馈。出于这个原因，我们强烈建议使用 2 至 3 毫米长度的硅涂层，与 MCAO 细丝上较长的硅涂层相比，它减少了海马体对中风病变的参与。

该程序的第二个关键步骤是正确放置 MCAO 细丝，以实现 MCA 的完全闭塞。错误地进入第一个 ICA 分支，翼腭动脉 （PPA） 是操作员的常见问题，因为几乎没有任何反馈表明 MCAO 细丝在其前进过程中走错了路。因此，我们建议略微的横向推进角，以便细丝的硅涂层尖端从 PPA 的分支点弯曲，使其更有可能进入 ICA 的颅内部分。（图 1）如协议部分所述，重要的是要观察尾纤的长度以得出灯丝的位置是否足够。如果细丝无法从 ICA 分支点插入至少 7 毫米，操作员应缩回细丝并重复。在细丝插入过程中施加的任何不必要的力都可能导致出血和手术失败。对于这个问题，可以使用连续激光多普勒灌注测量来确认正确的细丝放置。

确保在缺血期间 CCA 的血流畅通无阻是该方案的另一个关键步骤。与大多数描绘小鼠完整 Willis 环的插图相反，研究表明，后交通动脉 （PcomA） 在小鼠中通常不是双侧通畅的，如果 CCA 在缺血期间保持闭合，则无法可靠地供应 Willis 环的同侧^15,16。在这些情况下，即使研究人员仔细选择了正确长度的细丝硅涂层，行程也会覆盖整个半球或仅包裹 MCA 区域，具体取决于 PcomA 通畅性，从而导致行程大小未解释的变化。因此，我们修改了程序以涉及指令步骤，操作员在设置闭塞 MCAO 灯丝后立即移除 CCA 夹。这些修改可以提高手术的精度和可重复性，同时减少结果的异质性。方法的标准化将进一步提高成功率和可比性，以及结果的翻译潜力¹⁷。

拟议技术的最大局限性是 ECA 在手术后保持结扎状态，这可能会使动物在恢复过程中的状态恶化¹⁸。到目前为止，我们在修复 ECA 的努力中未能成功，同时保持了足够高的手术成功率。这仍然是该方法未来改进的潜在点。此外，最大限度地减少 CCA 保持夹紧的时间是一项挑战，但必须防止中风中募集非 MCA 区域。由于这可能提供操作员间和操作员内部差异的来源，因此建议测量 CCA 钳制的持续时间，这可能使研究人员能够在统计上解释观察到的卒中大小总方差的至少一小部分。另一方面，操作员的技能和经验在减少 CCA 结扎时间和整体手术持续时间方面起着至关重要的作用¹¹。

所提出的方法具有重要意义，因为它使研究人员能够选择性地闭塞 MCA，从而使再灌注的发生突然且高度可控。该方法比目前可用的方法更准确地模拟血管内血栓切除术及其随后的再灌注损伤，为可重复和临床相关的动物缺血/再灌注损伤模型提供了详细信息。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
优碘皮肤溶液 10g/100ml	生物碱 Skopje	N/A
编织丝缝合线	Fine Science Tools	18020-60
Dafilon 缝合线 5/0 DS16	B. Braun	C0936154
Dolokain 20 mg/g 凝胶	Jadran-Galenski Laboratorij	N/A
Dumont #5 镊子	Fine Science Tools	11251-20	2 件
Dumont #7 镊子	精细科学工具	11271-30
Dumont N0 自闭合镊子	精细科学工具	11480-11
Durapore 手术胶带 1,25cm x 9,1m	3M	7100057169
Durapore 手术胶带 2,5cm x 9,1m	3M	7100057168
外部恒温器	Petnap	1012536
Halsey 持针器	精细科学工具	12500-12
热珠消毒器	精细科学工具	18000-50
虹膜剪刀	精细科学工具	14060-10
异氟醚 USP	Piramal 重症监护	N/A
激光多普勒监测仪	Moor	MOORVMS-LDF2
金属宠物热垫	Petnap
Micro Vannas 弹簧剪刀	Fine Science Tools	15000-00
Mini-colibri 牵开器	Fine Science Tools	17000-01
Recugel 眼膏	Bausch&Lomb	N/A
S&T B-1 容器微型夹具	Fine Science Tools	00396-01	2 件
S&T 微型夹具应用镊子	Fine Science Tools	00071-14
Schwartz micro serrefines	Fine Science Tools	18052-01
Stemi DV4 点体视显微镜	蔡司	000000-1018-453
Steri-Strip 增强粘合皮肤封闭 3 毫米 x 75 毫米	3M	7100236545
直组织镊子	精细科学工具	11023-10
SZX 支架臂	奥林巴斯	SZ2-STS
Tec III 300 系列校准蒸发器	蒸发器销售和服务公司	N/A
通用支架类型 2	奥林巴斯	SZ2-STU2
VetFlo 六通道麻醉支架	Kent Scientific	VetFlo-1225	改良用于 O2/N2 混合