本方案介绍了一种基于微控制器的行为学检测箱,通过采集置于箱体下方传感器的加速度数据,评估 Prepulse 抑制(PPI)。该数据用于分析社交隔离大鼠的感觉门控缺陷,并额外提供一种将数据与神经元活动同步的方法,以推动关于行为障碍的神经生理学研究。
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本方案介绍了一种基于微控制器的行为学检测箱,通过采集置于箱体下方传感器的加速度数据,评估 Prepulse 抑制(PPI)。该数据用于分析社交隔离大鼠的感觉门控缺陷,并额外提供一种将数据与神经元活动同步的方法,以推动关于行为障碍的神经生理学研究。
生命早期的痛苦经历被认为是神经发育障碍的潜在前兆。在动物模型中研究这一状况的方法之一是断奶后社会隔离。研究表明,啮齿类动物在生命早期经历的这种痛苦会导致类似精神分裂症患者所观察到的神经改变,包括前额叶皮层体积减小、树突棘密度降低以及腹侧被盖区多巴胺能活动增强。前脉冲抑制(PPI)范式是一种用于评估人类和动物模型中感觉门控缺陷的成熟方法。PPI 是指当一个较强的声学刺激(例如 120 dB 脉冲)之前出现一个较弱的声学前刺激(例如 65 dB 脉冲)时,对前者引起的惊跳反射会受到抑制。这种现象在精神疾病患者及其动物模型中常常减弱。本文介绍了一种构建用于 PPI 研究的行为箱的实验方案,使研究人员能够使用一种可及且成本较低的精神分裂症动物模型,并实现行为箱与该模型神经活动记录(如电生理记录)的同步。该定制化行为箱能有效检测自由活动啮齿类动物在经历断奶后隔离后所产生的惊跳反应,并支持同时进行神经记录的 PPI 评估。
被诊断为精神分裂症(SCZ)的个体常表现出感觉运动障碍。这些患者通常对感觉刺激的反应减弱,并难以从多种感觉输入中区分出相关信息1,2。对于健康个体而言,在给予较强刺激之前先给予较弱刺激,会减弱对较强刺激通常产生的惊吓反射3。这种现象被称为前脉冲抑制(prepulse inhibition, PPI),已被用于研究精神分裂症患者及精神分裂症动物模型中的感觉门控缺陷4。
在声学PPI任务中,将个体对单一强声脉冲(例如,约120 dB)引起的惊吓反应,与同一强声脉冲前短时间内(30至500 ms)出现一个较弱刺激(例如,约65 dB)时的惊吓反应进行比较3,4。在健康个体中,当较弱的预脉冲先于强脉冲出现时,强脉冲引发的惊吓反应会减弱(与仅呈现单一强脉冲时的惊吓反应相比)。这种现象在精神分裂症(SCZ)患者中受到破坏,即使在强脉冲前呈现了较弱的预脉冲,他们的惊吓反应抑制程度仍较低1,5,6,7,8。
与精神分裂症(SCZ)患者类似,中脑边缘多巴胺系统过度活跃的大鼠也表现出声学前脉冲抑制(PPI)减弱9,这使得该范式成为研究精神分裂症动物模型中行为和生理改变的有用工具。通常,商用PPI设备包含一个声学舱,舱内配有传感器、扬声器以及用于设定实验参数(如脉冲间间隔和刺激强度)、记录啮齿类动物惊吓反应并处理数据的软件。然而,商用系统通常定制化选项有限且价格昂贵。自行构建灵活科研装置的“DIY”(自己动手做)方法正在增加研究人员对设备的可及性,并促进知识的传播10。在研究前脉冲抑制(PPI)等感觉运动门控机制时,DIY方案必须考虑若干关键因素以确保其有效性与可靠性。这些关键因素包括设计规格、环境与光照控制、声音衰减、刺激呈现系统、行为测量传感器以及数据采集与分析系统。
针对不同功能,人们已开发出多种行为箱的DIY解决方案,例如操作性舔舐实验11、听觉辨别任务12,以及前肢功能研究13。尽管已有多种DIY方法聚焦于视频追踪14,但此类数据的分析需要较高的计算资源。一种开源的硬件与软件平台可用于构建低成本的PPI行为箱,既能灵活地开展定制化实验15,16,17,又能同步记录自由活动动物的神经元活动。
本文介绍了一种利用低成本平台开发行为箱以评估前脉冲抑制(PPI)的方法,用于研究断乳后隔离大鼠模型——一种导致出现类似精神分裂症(SCZ)症状的早期生命应激模型,该方法还可与同步脑电生理记录联合使用。
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动物实验按照《实验动物护理与使用指南》进行。本项目已获得桑托斯杜蒙特研究所动物伦理委员会(CEUA)批准(批准号:04/2016)。在PPI测试中,共纳入35只Wistar大鼠(3月龄,体重290–490 g,雄性19只,雌性16只),在PPI测试箱中进行个体化评估。所有35只大鼠均接受了断奶后隔离方案,单独饲养于温度23 °C、湿度70%、12小时光照/12小时黑暗循环的受控环境中。 随意摄取 可自由获取食物和水。本研究中所用试剂与设备的详细信息见下文 材料表.
1. PPI 盒

图1:加速度计牢固地安装在行为箱下方。该图展示了低成本的加速度计模块(左)和高端商用加速度计(右),用于数据对比。加速度计必须牢固地固定在亚克力箱上,扁平电缆也需固定在亚克力表面,以避免因清洁操作和更换动物导致电缆断裂。请点击此处查看此图的放大版本。

图 2:基于微控制器的集成化行为学实验箱。 示意图显示一只大鼠位于亚克力箱内,通过有线头端连接至脑电生理记录系统。箱体下方安装的加速度计连接至微控制器,可将三轴加速度数据发送至计算机,并接收用于离线数据处理的刺激触发标记。扬声器播放背景噪声和声音脉冲,这些声音信号会为加速度计数据提供触发标记。麦克风采集声学刺激信号,以便与电生理数据同步(例如,在实验任务中同步记录发声行为)。请点击此处查看该图的高清版本。
2. 大鼠断奶后隔离程序
3. 电极阵列脑植入手术操作

图3:微电极阵列植入。(A)包含32根50 µm钨丝的微电极阵列,用于前肢核和下肢核前额叶皮层(Prelimbic 和 Infralimbic PFC)、腹侧被盖区(VTA)、杏仁核(AMY)、伏隔核(NAcc)和海马(hipc)。(B)显示脑区靶点、前囟(bregma)和后囟(lambda)的大鼠颅骨。(C)开颅及固定螺钉的钻孔位置。(D)用于支撑微电极阵列植入体及开颅结构的螺钉示意图。(E)去除硬脑膜后的颅骨开窗。(F)微电极插入脑组织。 请点击此处查看该图的放大版本。
4. 蛋白质-蛋白质相互作用及神经元记录

图4:听觉刺激类型。 实验中随机呈现了持续7分钟的白噪声,包含5种预脉冲+脉冲组合。 请点击此处查看该图的放大版本。
5. 电生理学与行为学分析



图 5:三轴加速度计数据与均方根(RMS)。(A)在6分钟基线期及随机白噪声80 PPI刺激期间记录的代表性三轴加速度计(x、y、z轴(g))数据。(B)由三个加速度计轴(x、y、z,灰色高亮列,于B中展开)计算惊跳反应的均方根(RMS)值。请点击此处查看该图的放大版本。
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预脉冲抑制在脉冲1和3与脉冲5(仅120 dB)之间无差异,但在脉冲2和4之间显示出统计学差异(p < 0.05)(图6)。

图6:五种脉冲类型对听觉刺激的平均反应幅度。 脉冲1和脉冲3的PPI%与脉冲5无显著差异。脉冲2和脉冲4(*)的PPI%与脉冲5有显著差异。误差线表示标准误。
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本方案介绍了一种用于研究自由活动Wistar大鼠前脉冲抑制任务的自制行为学实验箱,同时可记录脑部数据(本示例中为局部场电位和锋电位活动)。该实验箱可使用神经科学研究实验室中常见的组件构建并进行定制,因此成本低廉且易于获取。此类自制解决方案还可在实验设计和个性化设置方面提供更高的灵活性。
使用DIY系统可以观察到诸多优势,包括成本低廉和操作简便。开源软件和硬件支持新协议的构建与测试,有助于其在多种应用中推广使用。然而,DIY系统也存在缺点和局限性,例如与更先进的微控制器或单板计算机相比,处理能力较弱,这可能限制其在需要多个输入传感器(例如高采样率传感器)的复杂且计算密集型应用中的使用。
关于现有方法的重要性,该方法能够使用集成传感器和用于数据采集与分析软件的自动化惊跳舱,重现商业系统的设置,并提供详细分析,从而实现对PPI更一致且可靠的测量。为了测试行为箱的准确性,将此开源行为箱的数据与商业系统的加速度计数据进行了比较。基准测试结果显示,在时间精度和惊跳幅度方面具有一致性,表明利用廉价的DIY材料研究Wistar大鼠社会隔离相关...
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作者声明不存在任何竞争性经济利益。
感谢伊迪丝·格拉纳多斯(Edith Granados)及墨西哥国立理工学院瓜达拉哈拉分校(Cinvestav Guadalajara)为本项目提供 PPI 脚本和数据同步方面的支持。本工作由桑托斯·杜蒙特研究所、教育部、国家科学技术发展委员会(CNPq)、高等教育人员培训基金会(CAPES)以及国家科技与工业促进基金会(FINEP)资助。
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| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 亚克力盒 | 定制 | 5 mm 厚亚克力板,尺寸为 20 cm × 25 cm × 25 cm | |
| 粘性橡胶防震垫 | Gorilla grit | MPU6050 | 直径 0.8",高 0.38"。用于稳定亚克力盒并隔离外部振动的橡胶垫。由于亚克力盒下方装有 MPU6050,垫子高度应大于 5 mm。 |
| Arduino Uno | Arduino | ATmega328P | 基于 ATmega328P 的 Arduino 微控制器板,具有 14 个数字输入/输出引脚、6 个模拟输入和 16 MHz 的时钟频率。 |
| Cedrus 刺激追踪器(音频检测器) | Cedrus | https://cedrus.com/stimtracker/index.htm | Cedrus 刺激追踪器可检测声学刺激,并向加速度计数据发送 TTL 标记。 |
| Cineplex 研究系统 | Plexon | https://plexon.com/plexon-systems/cineplex-behavioral-research-system/ | 同步记录动物行为视频与电生理数据。 |
| 氰基丙烯酸酯胶水 | MPU6050 | 用于将 MPU6050 牢固粘接在亚克力盒底部的强力胶。 | |
| 数字声级计 | 实验前用于校准刺激参数的分贝计。 | ||
| IBM SPSS | SPSS(社会科学统计软件包,美国) | IBM SPSS 统计分析软件平台。 | |
| Matlab | MathWorks | https://www.mathworks.com/products/matlab.html | 用于数据分析、算法开发和模型构建的 MATLAB 平台。 |
| 微型不锈钢螺钉 | 直径 1.2 mm、长度 4 mm 的眼镜用螺钉。 | ||
| 微电极阵列 | 实验室自制 | 采用 Omnetics 连接器和加州精细线材公司(California Fine Wire)生产的涂有聚对二甲苯的 50 微米钨丝。 | |
| 麦克风 | 用于同步采集声学刺激与电生理数据的麦克风。 | ||
| MPU-6050 | InvenSense | https://invensense.tdk.com/products/motion-tracking/6-axis/mpu-6050/ | MPU-6050 是一款三轴陀螺仪和三轴加速度计 |
| 多通道数据采集处理器 | Plexon | SPIKE/LFP | Plexon MAP 系统,用于采集神经电生理数据(SPIKE/LFP)及辅助通道信号(麦克风、TTL 标记、加速度计)。 |
| NeuroExplorer | Nex | https://www.neuroexplorer.com/ | 用于分析连续记录信号和时间戳(如脉冲序列、行为事件)的 NeuroExplorer 数据分析程序。 |
| Neuroexplorer | Nex Technolgie | https://www.neuroexplorer.com/ | 用于 SPIKE 和 LFP 神经生理数据的分析软件。 |
| Offline Sorter | Plexon | https://plexon.com/products/offline-sorter/#38957t34842 | 用于离线脉冲分类的软件。 |
| OffLineSorter | Offline Sorter | https://plexon.com/products/offline-sorter/ | Offline Sorter 是一款离线脉冲分类软件 |
| 直肠式兽用 SpO2 传感器 | KTMED | FS-03 | 适用于小型动物的 SpO2 传感器 |
| 带状电缆 | 用于连接 MPU6050 与 Arduino 的细带状电缆。 | ||
| Roboti 钻机 | Neurostar | https://robot-stereotaxic.com/drill-injection-robot/ | 与 Neurostar 立体定位仪配合使用的机器人钻机。可用手动钻替代。 |
| 扬声器 | 扬声器频率范围为 100 至 40 kHz,强度可达 150 dB。 | ||
| 立体定位仪 | Neurostar | 用于啮齿类动物神经外科手术的立体定位装置 |
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