本文介绍了使用标准眼科手术技术在兔模型中进行视神经挫伤的详细操作步骤。
需要JoVE订阅才能观看此内容。 请登录或开始免费试用
本文内容
摘要
摘要
视神经 crush（ONC）是一种用于模拟和研究视神经病变机制及潜在治疗干预措施的实验技术。以往的ONC研究主要采用啮齿类动物模型，但这些模型在解剖结构和生理特性上与人类存在显著差异，可能限制其临床转化价值。本文描述了一种在兔体内建立ONC模型的手术技术，兔眼的眼球尺寸与人类更为接近。该手术技术借鉴了斜视和眼整形手术中的眼科操作方法，无需制作骨窗或进行睑裂切开术。本模型通过评估不同光照条件下瞳孔反应以及ONC术前和术后视觉诱发电位（VEPs）进行验证。结果显示，与未处理的对侧眼相比，ONC眼的瞳孔反应和VEP振幅均显著降低，表明损伤后视觉功能丧失，符合预期。该手术技术可为探索视神经损伤机制及测试潜在治疗策略提供模型，对理解与治疗眼部神经退行性疾病具有广泛意义。
引言
视神经钳夹（ONC）技术是一种实验性方法，用于建立受控的视神经损伤模型，以研究视神经病变1,2,3。通过在视神经局部造成损伤，导致轴突受损和视网膜神经节细胞退化，ONC模型可模拟多种视神经病变的病理特征，例如外伤性视神经病变和青光眼4,5,6,7。该受控模型为进一步深入研究眼科学和神经科学领域中神经损伤、退变及潜在再生的机制提供了重要平台8,9,10,11,12,13,14。
O....
访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。
方案
本研究中使用了新西兰白兔（4.4 - 4.8 kg）。动物实验设计遵循ARVO关于眼科与视觉研究中动物使用指南。斯坦福大学机构动物护理和使用委员会对这些实验进行了审查并批准实施（方案编号：APLAC-33781）。
1. ONC
- 按照兽医服务中心（VSC）指南对兔子（n = 4）进行麻醉，以确保整个操作过程中兔子充分镇静且无痛。简要而言，皮下注射氯胺酮（30 mg/kg）和赛拉嗪（3 mg/kg）。
注意：通过评估多个麻醉深度参数（包括脚趾夹捏反应和下颌张力）来确认麻醉的手术平面。 - 在手术开始时，皮下注射缓释布托啡诺（0.15 mg/kg）以提供镇痛，并给予马罗皮坦柠檬酸盐（2 mg/kg）以促进平稳恢复。每5–15分钟监测一次动物的生命体征和麻醉深度，以确保其健康状况。
- 提供热源，例如电热垫或循环水毯，并根据体温调节设置。
- 根据需要通过面罩提供1-4%异氟烷或1-6%七氟烷以维持麻醉。
- 在操作前约5-15分钟，给予丙帕卡因（0.5%）、去氧肾上腺素（2.5%）和托吡卡胺（1%）滴眼液的联合用药。
注意：眼药水可提供局部麻醉和散瞳作用27. - 将兔子侧卧放置，使右眼暴露（图1）。使用标准无....
访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。
结果
为了评估视觉功能，通过计算瞳孔直径（黄色实线）的比值来量化瞳孔反应 图 4A）相对于白对白直径（图中黄色虚线） 图4A在中等光照和闪光照明条件下，如图所示 图4在视神经钳夹（ONC）手术前，瞳孔对光刺激表现出明显的收缩反应。然而，在ONC术后1至3天内，在相同光照条件下，瞳孔直径与术前相比几乎无变化或无明显变化。图 4E；p < 0.0001，配对t检验）。这种反应性的下降表明在ONC手术后视觉功能显著丧失。
为了进一步评估视觉功能，记录了视神经挤压伤（ONC）眼和未治疗的对侧眼的视觉诱发电位（VEP）波形（图5）。尽管P1潜伏期保持稳定且无显著差异，但ONC眼的P1波幅 显著降低（P = 0.032）。波幅的降低证实了视神经损伤后视觉.......
访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。
讨论
本研究介绍了一种在兔子中实施ONC手术的详细方案，强调采用一种侵入性更小的方法来暴露视神经。既往报道缺乏全面的描述、可视化操作指导，或依赖于更具侵入性的技术，需要植入物、外眦切开和/或骨切除19,20,21,22,23,24,25。我们的方法采用了斜视和眼整形手术中常用的标准化眼科技术，能够实现可重复且一致的视神经损伤。
该操作过程约需20-30分钟完成，且未出现术后并发症，包括角膜擦伤、角膜溃疡、结膜炎、眶隔前蜂窝织炎和眶蜂窝织炎、视网膜动脉阻塞、视网膜静脉阻塞以及球后出血。手术成功的关键步骤包括仔细分离眶内脂肪和结缔组.......
访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。
披露
作者无任何利益冲突或竞争性经济利益。
致谢
本工作由国家眼科研究所资助，资助编号为 K08-EY033407 和 P30-EY026877，以及“预防失明研究”组织。
....访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。
材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 8-0 涂层薇乔紫线缝合线 TG140-8 双针 | Ethicon | J547G | 用于视神经压榨手术 |
| Antisedan（盐酸阿替美唑 5.0 mg/mL 溶液） | Zoetis | NDC:54771-6293 | 用于术中应用 |
| Bonn 打结镊，斜头 0.2 mm，钛材质 | Titan Medical | TMF502 | 用于视神经压榨手术 |
| Castroviejo 弯头持针器，钛材质 | Titan Medical | TMH105 | 用于视神经压榨手术 |
| Castroviejo 缝合镊，1×2，0.12 mm，直头，钛材质 | Titan Medical | TMF411 | 用于视神经压榨手术 |
| Cerenia（柠檬酸马罗匹坦 10 mg/mL 溶液） | Zoetis | NDC:54771-8179 | 用于术中应用 |
| 一次性不锈钢皮下针电极 | Natus | 019-476600 | 用于视觉诱发电位检测 |
| Euthasol（戊巴比妥钠 390 mg/mL 和苯妥英钠 50 mg/mL） | Virbac | NDC: 51311-050 | 用于安乐死 |
| Graefe 肌肉钩，钛材质 | Titan Medical | TME133 | 用于视神经压榨手术 |
| 胰岛素注射器 1/2 mL，29 G，1/2" | Monoject | 8881600350 | 用于玻璃体内注射 |
| Jameson 肌肉钩 | Titan Medical | TME122 | 用于视神经压榨手术 |
| McPherson 打结镊，直头 0.2 mm，钛材质 | Titan Medical | TMF501 | 用于视神经压榨手术 |
| Normosol-R（等渗平衡电解质溶液；晶体液） | ICU Medical Inc. | NDC:0990-7670 | 用于术中应用 |
| 氧氟沙星滴眼液 0.3% | Bausch & Lomb | 60505-0560-0 | 用于术后应用 |
| Olympus FLUOVIEW FV3000 | Olympus | FLUOVIEW FV3000 | 共聚焦激光扫描显微镜 |
| 盐酸去氧肾上腺素 2.5% 滴眼液 | Bausch & Lomb | 82260-102-10 | 用于术前应用 |
| ProLong Gold 抗荧光淬灭封片剂 | Invitrogen | P36934 | 封片介质 |
| 盐酸丙帕他卡因 0.5% 滴眼液 | Bausch & Lomb | 24208-730-06 | 用于术前应用 |
| RETeval 视觉电生理检测设备 | LKC Technologies, Inc. | RETeval | 用于视觉诱发电位检测 |
| 托吡卡胺 1.0% 滴眼液 | Bausch & Lomb | 24208-585-64 | 用于术前应用 |
| Westcott 弯头剪刀 | Titan Medical | TMS401 | 用于视神经压榨手术 |
参考文献
- Chierzi, S., Strettoi, E., Cenni, M. C., Maffei, L. Optic nerve crush: Axonal responses in wild-type and bcl-2 transgenic mice. J Neurosci. 19 (19), 8367-8376 (1999).
- Tang, Z., et al. An optic nerve crush injury murine model to study retinal ganglion cell s....
访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。
重印与许可
标签
