方法文章

用于糖尿病心肌病小鼠模型电针预处理的小鼠电针固定装置制备

DOI：

10.3791/67427

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2025年4月18日

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1College of Acupuncture and Orthopedics, Hubei University of Chinese Medicine, 2Department of Acupuncture, Hubei Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine, 3Department of Acupuncture, Affiliated Hospital of Hubei University of Chinese Medicine, 4Hubei Province Academy of Traditional Chinese Medicine

* These authors contributed equally

本文内容

摘要

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在这里，我们提出了一种建立糖尿病心肌病小鼠模型的方案和一种用于小鼠电针的小鼠电针固定装置，它可以在治疗过程中更温和地固定小鼠。

摘要

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糖尿病性心肌病 （DCM） 是糖尿病的一种并发症，可发展为心力衰竭，并且受药物使用的限制。电针作为中医外治糖尿病心肌病的有效方法。小鼠电针固定装置可以在电针治疗过程中轻松、轻柔地固定小鼠，并暴露小鼠腹部和四肢上的穴位。本文介绍了用于制造小鼠电针固定装置的方法以及所有步骤和注意事项，建立了糖尿病心肌病小鼠模型，并采取了综合措施，全面记录了血糖等血液生化指标的变化。实验分为 3 组：对照组、模型组和预处理组，每组 10 只小鼠。预处理组采用标本穴位电针预处理 1 次，每隔一天一次，共 7 个疗程。电针后，预处理组小鼠血糖降低，糖尿病症状减轻。

引言

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糖尿病性心肌病 （DCM） 是糖尿病的一种常见并发症，其特征是特定病灶的心脏结构和心室舒张和收缩功能发生变化，进一步发展为心力衰竭。它是糖尿病患者死亡的主要原因之一 1,2，近年来其日益增加的患病率引起了广泛关注3。已经发现，这种疾病的发病机制主要包括胰岛素抵抗、炎症反应、脂质代谢异常、氧化应激、线粒体损伤 4,5。

目前，糖尿病心肌病的临床治疗主要以口服药物控制血糖和缓解心脏病症状为主，但存在一定的局限性，如药物反应、肾功能影响、对长期用药的依赖性等6。针灸作为一种中医外治方法，对糖尿病心肌病患者的血糖、血脂和炎症反应具有较好的调节作用，临床疗效显著7.针灸对胃肠道和肾功能没有负面影响，长期治疗不会产生依赖性。标本穴位理论是传统针灸理论中选择和使用穴位的重要方法8.它将能改善疾病症状的穴位定义为彪穴，能调节与疾病相关的身体基本功能，治疗疾病根源....

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方案

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所有动物实验均符合动物伦理学的 3R 原则，并已通过湖北中医药大学动物实验伦理委员会（伦理通关号 HUCMS00309300）审查批准。在这里，从湖北省疾病预防控制中心获得 30 只 SPF 级小鼠（质量证书编号 42010200009690）。

1. 电针固定装置的制造

  1. 对于电针固定装置的组装，获得透明的丙烯酸空心塑料管和电针治疗仪作为主体（图 1A）。在管中，保持管体并准备位于两端开口中的闭合片。在每端中心的空心管上开槽，并使用可手动旋转的螺钉将封闭片固定在每端的凹槽中。
  2. 在空心管的中间，制作三个长约 2 厘米、宽约 1 厘米的椭圆形孔，彼此相邻分布。两侧的孔用于拉出小鼠的前肢进行固定，用于前肢的电针治疗，中间的孔可用于露出小鼠胸腹部区域的穴位，用于胸腹部区域的电针治疗。
  3. 在空心管的末端，在中心槽的两侧做一个对称分布的椭圆形孔，可用于拉出小鼠后肢进行后肢电针治疗（图 1B）。
  4. 检查中空塑料管的完整性并安装密封片。当螺钉在凹槽中滑动时，移动管体中的闭合片，确保它可以调整固定长度以适应鼠标的长度。
  5. 打开电针治疗仪并确保其正常运行。每个按钮都可以通过按一次来....

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结果

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我们遵循上述程序并建立了糖尿病心肌病的小鼠模型。从 HE 染色图片中可以看出（图 4），对照组小鼠心肌组织结构完整，心肌细胞排列规则，无明显病变。模型组心肌细胞排列不规则，部分心肌细胞受损解体（黑色箭头），间质观察到明显的炎性细胞浸润（黄色箭头）。提示模型组小鼠有心肌损伤。预处理组小鼠心肌组织结构清晰，心肌细胞排列不规则，少量心肌细胞损伤和崩解（黑色箭头），未观察到其他明显病变。相比之下，对照组心肌组织无明显病变，模型组心肌组织损伤更严重。预处理组心肌组织损伤程度显著低于模型组。这表明治疗前治疗可以减少心肌损伤。

超声心动图心功能指标（图5）显示，与对照组相比，模型组左心室舒张末期容积和左心室收缩末期容积显著增加，左心室射血分数和左心室缩短分数显著降低。差异具有统计学意义 （P < 0.05）。提示模型组小鼠心肌收缩和舒张功能下降，心脏形态和结构异常24,25

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讨论

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在这项研究中，通过腹膜内注射链脲佐菌素溶液获得具有高血糖和出现糖尿病迹象的小鼠，这是一种有效且公认的建模方法27。根据 Biaoben 穴位28 理论，选择 PC6 作为 Biao 穴，选择 ST36 作为 Ben 穴。所有这些穴位都在老鼠的四肢上，因此可以暴露腹部并固定四肢的亚克力管非常适合针刺这些穴位。将小鼠引入管体并固定，针刺后开启电针装置进行电针治疗。可以观察到，用电针治疗的局部肌肉似乎有轻微的颤抖，这是正常的，没有副作用。

针灸作为中医的重要工具，通过调节糖脂代谢和改善炎症反应来治疗糖尿病心肌病29,30。电针是针灸治疗中常用和可量化实施的方法之一，在糖尿病心肌病的临床治疗中得到广泛应用31。电针以间歇波的形式向针灸部位传递电信号，不断向穴位提供刺.......

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披露

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作者没有什么可披露的。

致谢

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这项工作得到了湖北省自然科学基金联合项目 2022CFD024 的资助;国家自然科学基金面上项目 81704142;湖北中医药大学 2023 年双一流建设重点专项科研项目，2023ZZXT005;研究湖北省中医管理局重点项目 ZY2025D001 中医腧穴电针预处理调节心肌缺血再灌注损伤 （MIRI） 大鼠心肌细胞铁死亡的机制;武汉市科技局知识创新项目 2023020201010172;湖北省石镇人才工程项目，鄂伟函 [2024]256.

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材料

本文使用的材料清单
姓名公司目录编号评论
亚克力中空塑料河南智科ZK-GDQ
针托0.3mm×13mmC57BL
/6 小鼠北省疾控
檬酸一水合物西格玛C1909
电针治疗仪托SDZ-V
电子天平河南智科ZK-DST
血糖仪LifeScanOneTouch VerioVue
葡萄糖试纸LifeScanOneTouch Verio
链脲佐菌素SigmaS0130
柠檬酸三钠二水合物SigmaW302600
镊Labshark130302001
针灸华湖中心柠华子

参考文献

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  1. Dillmann, W. H. Diabetic cardiomyopathy. Circ Res. 124 (8), 1160-1162 (2019).
  2. Murtaza, G., et al. Diabetic cardiomyopathy - a comprehensive updated review. Prog Cardiovasc Dis. 62 (4), 315-326 (2019).
  3. Peng, M. L., et al.

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