通过咪喹莫特建立银屑病小鼠模型

摘要

本文介绍了一种利用咪喹莫特建立的高效且稳定的银屑病小鼠模型。此外，我们还详细描述了用于评估银屑病严重程度的方法学。

摘要

银屑病是一种常见的慢性复发性炎症性皮肤病，其特征为皮肤增厚、浸润、脱屑和红斑。该疾病的发病机制极为复杂，涉及遗传、免疫和环境等多种因素的相互作用。为了研究银屑病的发病机制，研究人员已开发出多种动物模型。然而，由于方法学的差异，这些模型的构建在一致性方面面临挑战。本研究建立并全面评估了一种使用咪喹莫特（IMQ）诱导的高效且稳定的银屑病小鼠模型。采用8周龄的SPF级雌性C57BL/6J小鼠建立银屑病模型。在适应环境一周后，剔除脱毛区域皮肤有刺激或损伤的小鼠。从第2天开始，每天在脱毛的颈部和背部区域涂抹5%咪喹莫特乳膏（62.5 mg/d），连续7天。实验期间每日进行体重测量、皮肤摄影、皮肤评分及行为学观察。实验结束后，进行脾脏指数测定、皮肤组织学分析、血清细胞因子检测以及皮肤mRNA水平检测。结果显示，IMQ组小鼠出现了典型的银屑病样症状，包括红斑、脱屑和皮肤增厚，同时伴有抓挠行为增加、体重减轻、脾脏指数升高及皮肤厚度增加。血清中TNF-α、IL-23和IL-17A水平显著升高，皮肤中IL-23、IL-17A、IL-17F和IFN-γ的mRNA表达水平也明显上调。相比之下，对照组未出现上述变化。通过优化IMQ诱导时间、标准化给药方案，并动态监测皮肤变化，本研究旨在为科研人员提供一个构建可靠银屑病模型的标准化框架。

引言

银屑病是一种常见的慢性复发性炎症性全身皮肤疾病，其中斑块型银屑病是最主要的临床表现形式¹。其临床特征通常包括皮肤浸润、增厚、鳞屑和红斑²，还可引发多种并发症，如银屑病关节炎、抑郁、代谢综合征和心血管疾病¹。此外，银屑病常伴有慢性瘙痒³。全球范围内，银屑病影响约2%至3%的人口⁴，且发病率呈上升趋势。因此，建立能够紧密模拟人类银屑病病理特征的可靠动物模型，对于揭示其发病机制并开发新的治疗策略至关重要。

在皮肤科研究领域，银屑病因其复杂的发病机制而受到广泛关注，其发病机制涉及遗传、免疫和环境因素之间的相互作用，为深入研究带来了巨大挑战¹。目前研究表明，银屑病的发病主要由T细胞介导，活化的T细胞可刺激角质形成细胞过度增殖，并在其分化过程中改变细胞因子的分泌⁵。在此过程中，白细胞介素（IL）-23/IL-17轴发挥着关键作用。IL-23促进Th17细胞的分化与活化，后者产生IL-17A和IL-17F等细胞因子，在银屑病的发生发展中起重要作用^6,7

方案

以下动物使用方案已通过广西中医药大学实验动物福利与伦理委员会审查批准（DW20191220-153）。所购小鼠的动物合格证号为SCXK（湘）2024-0009。本研究中，将8周龄C57BL/6J雌性小鼠（SPF级）随机分组，每组6只。饲养笼置于温度可控的房间内（23 ± 2 °C，12小时光照/黑暗循环），自由摄食和饮水。实验流程图见图1。对照组小鼠除不使用咪喹莫特乳膏诱导外，其余处理均与咪喹莫特组相同。

1. 动物准备

1. 在动物适应环境一周后开始建模。实验开始前，使用75%乙醇溶液仔细消毒实验台。
2. 使用记号笔清晰标记小鼠尾巴，确保个体可识别。
3. 使用剃毛器剃除所有小鼠颈部和背部约4 cm × 3 cm面积的毛发（第0天；图2A）。用棉签蘸取适量脱毛膏，均匀涂抹于已剃除毛发的皮肤区域（图2B）。
4. 涂抹脱毛膏后，等待约15秒。脱毛膏在小鼠皮肤表面停留的最佳时间为15–20秒，随后轻柔快速地擦拭去除。
5. 使用新的棉签蘸水，沿小鼠尾部至头部方向反复擦拭以清除残留毛发。用医用吸水纸轻轻擦干局部皮肤。
6. 脱毛后24小时检查小鼠皮肤状况，剔除脱毛区域受损的个体。<....

结果

连续给予咪喹莫特（IMQ）后，IMQ组小鼠背部皮肤出现类似银屑病的临床症状（图4），IMQ诱导区域表现出红斑、鳞屑和增厚等典型特征（图5）。相比之下，对照组未出现与IMQ组相似的任何症状。与对照组相比，IMQ组从第3天开始出现红斑及轻微鳞屑（图5A、C）。至第5天，这些小鼠形成浸润性斑块，表面鳞屑增多（图5E）。到第8天，皮肤红斑加重，表面覆盖广泛鳞屑，表皮显著增厚，并出现类似人类银屑病皮损的病变（图5B、D、F），导致总评分显著升高（图5G、H）。

对小鼠自发搔抓行为的观察和统计分析显示，与对照组相比，IMQ组小鼠从第4天开始.......

讨论

我们的研究利用IMQ诱导类银屑病皮肤病变，从而构建银屑病模型。该模型可用于研究银屑病发病机制，并为该疾病的治疗方案开发提供理论依据。在van der Fits的研究中⁷在初次给予咪喹莫特（IMQ）诱导时，诱导时间设定为5天或6天。然而，Jabeen 等人提出，IMQ诱导的银屑病模型严重程度在第6天时将达到最大值^th 天至第8天^th 使用咪喹莫特后的第1天¹⁶考虑到这一点，我们通过将咪喹莫特（IMQ）诱导时间延长至7天来优化实验方案。这一调整有助于更全面地呈现银屑病症状，相较于先前的方案，更有利于展示银屑病的典型特征。

既往研究^7,20,21表明，大多数研究人员采用咪喹莫特（IMQ）、普萘洛尔和十二烷基硫酸钠（SLS）等化学试剂诱导银屑病模型。这三种试剂均可直.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
5% 咪喹莫特乳膏	Sichuan Medshine Pharmaceutical Co.	40220602
75% 乙醇	XUE HUAN	20240401
分析天平	sartorius	SQP
脱毛膏	Reckitt Benckiser	20240612 08X
电子秤	Yingheng Technology	7915
医用卫生纸	JD	20221208
剃须刀	HORD shenjian	AUX-C6S
无菌棉签	Beilun River	20230728