一种用于大鼠针灸治疗的新固定方法

摘要

本文介绍一种新的大鼠固定方法，该方法有助于对大鼠背部进行针灸和艾灸操作。

摘要

研究人员在进行与针灸相关的动物实验时，常常面临动物难以控制的问题。目前已有一些方法用于防止动物离开治疗区域，但这些固定方法的效果与人类接受治疗时的状态存在差异。因此，我们发明了一种新的固定方法，可在治疗过程中使大鼠保持俯卧、安静且清醒的状态。

该设备由一个多孔塑料固定平台、一块方形棉布以及若干用于固定大鼠的束缚带组成。首先，将束缚带穿入固定平台中。每根束缚带穿过同一行上的两个孔，两个孔之间间隔两个孔位。放置第一根束缚带后，以相同方式将另一根束缚带穿入平台，确保两根束缚带之间间隔四行。其次，抓住大鼠尾巴，将其引导至由两根束缚带形成的通道中，并用方形棉布覆盖大鼠头部。第三，收紧颈部的束缚带以固定头部和前肢；然后抓住大鼠后肢，并收紧另一根束缚带以固定腰部和后肢。

该方法无需麻醉。设备结构简单，易于操作。为评估其有效性和安全性，我们对60只大鼠实施了该操作。所有大鼠均顺利完成针灸治疗，未出现并发症。尽管有14只大鼠在操作过程中出现短暂挣扎，但未观察到任何不良反应。结果表明，该方法在使用上是有效且安全的。

引言

手术建模和体外干预均需要适当的动物固定方法，以确保动物处于最便于操作且相对舒适的位置。本文重点介绍针灸干预中的动物固定方法。针灸在治疗多种疾病方面具有显著疗效^1,2。针灸作用机制的研究已受到广泛关注，目前，针灸与艾灸是国内外研究的热点课题。针灸治疗的病理机制仍需进一步探索，除临床试验外，还需要基础研究的支持^3,4。在针灸与艾灸的基础研究中，动物固定是一项重要的技术步骤。

目前常用的固定方法包括束缚、麻醉、摇晃、高台固定等其他固定方法。以下概述了这些方法的优缺点。

实施麻醉固定法的第一步是对大鼠进行麻醉。使用该方法时，研究人员面临大鼠可能死亡的风险。此外，麻醉后也可在无约束状态下直接进行操作⁵。使用袜兔平台固定法时，研究人员将大鼠头部套入经修剪的袜子中，前肢从袜子上的孔洞伸出，并用橡皮筋将四肢固定在兔台上。该方法便于对四肢穴位进行定位。研究人员需根据针灸部位对袜子进行修剪，但操作过程较为复杂⁶。一些研究人员开发了一种艾灸固定装置，由固定座、固定夹和艾条 holder 三部分组成。该装置可实现多个穴....

方案

本工作得到中国国家自然科学基金（编号 82205287）的支持。本研究中使用的实验方案在实施实验前已通过北京中医药大学动物实验伦理与使用委员会（编号 BUCM-2024052704-2223）的审查和批准。所有演示的操作步骤必须经过机构动物护理与使用委员会（IACUC）的批准。

本研究中所用设备的详细信息见材料表。该方案可分为四个部分：实验准备、固定过程、处理操作以及设备拆卸。

1. 实验准备（图1）

1. 准备多孔塑料固定平台。该固定平台长500 mm，宽300 mm，高5 mm。其上的孔长7 mm，宽3.2 mm。相邻两孔之间的距离为7 mm。此设备用于固定大鼠。
2. 准备固定带。每条固定带长300 mm，宽4.8 mm。固定带呈锯齿状，末端带有扣环，插入后可锁定。
3. 准备好一块方形棉布。该棉布为30 cm × 30 cm的正方形，用于遮挡实验动物的视线。
4. 准备电针仪。使用该设备进行电针治疗操作。
5. 准备针灸针（直径0.25 mm，长度25 mm）。
6. 准备一副实验室级乳胶手套。这些手套是实验的基本防护措施。
7. 准备一副防咬割手套，用....

结果

为了评估固定方法的有效性，我们对总共60只大鼠进行了试验，将其分为两组：电针组30只大鼠，温针组30只大鼠。治疗操作分别为电针和温针。

在将针插入穴位后，针灸师对每根针进行提插和捻转操作以达到得气。在操作过程中，观察到20只大鼠出现挣扎，其中7只将针甩脱。对于轻度挣扎的大鼠，通过安抚并结合棉布覆盖可较快恢复平静；而对于出现剧烈挣扎的大鼠，则暂停针灸操作5分钟，待其恢复平静后继续进行。

在电针过程中，30只大鼠中有22只保持安静并成功完成了治疗。其中，8只大鼠出现挣扎行为，导致6只大鼠的针脱落。出于伦理考虑，电针期间未固定大鼠尾巴。通过电极连接督脉20穴（DU20）和大鼠尾巴。电刺激引起轻微的身体反应，大鼠尾巴偶尔出现抖动。在30只大鼠中，有5只出现尾巴抖动，其中3只导致纱布脱落。在我们重新包扎大鼠尾巴上的纱布后，它们未再出现尾巴抖动现象。

在温针灸组中，30只大鼠中有24只在整个治疗过程中保持安静。尽管有6只大鼠出现挣扎，但针具和艾球均未脱落。实施覆盖与安抚方法后，所有大.......

讨论

大鼠倾向于栖息在黑暗环境中。当有遮蔽时，它们会感到安全，并对刺激表现出较为平静的反应，应激水平较低。本文所述方法正是利用了大鼠的这些特性。该固定方法的优势可总结如下：（i）该方法可最大程度地减少实验动物所经历的应激反应和疼痛，符合动物伦理的3R原则，即减少（Reduction）、优化（Refinement）和替代（Replacement）¹³。（ii）遮蔽装置可降低大鼠的应激反应，确保固定牢固，有效防止大鼠咬伤操作人员。（iii）该方法充分暴露大鼠的头部和背部，使针灸操作更加便利。较大的暴露面积使研究人员能够同时在多个部位进行操作。（iv）通过使大鼠保持俯卧位，该方法更准确地模拟了人类针灸治疗的实际场景。固定后的大鼠在治疗过程中情绪稳定，从而保证了实验结果的高度可靠性。（v）该方法适用于不同穴位和体型，因为固定带的位置可调节。研究人员可根据大鼠的体型和治疗部位需要调整间距。具体数据见Table 2。（vi）该方法可由单名研究人员轻松完成，固定一只大鼠仅需三分钟或更短时间，从而减少了人力和时间消耗。

该.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
针灸针	北京中研太和医疗器械有限公司	20222200133	针灸针的规格为直径 0.25 mm，长度 25 mm。
防咬手套	临沂市兰山区绿大洲劳动防护用品厂	H0315103941	用于在实验过程中保护研究人员免受大鼠咬伤。
电针仪	苏州医疗用品厂有限公司	20172200675	该设备用于实施电针治疗操作。
实验室级乳胶手套	中宏普林医疗用品有限公司	268237719221	这些手套是实验中最基本的防护措施。
艾绒	北京同仁堂兴安健康科技有限公司	152200000000613	艾绒用于制作直径为 5 mm 的艾炷，供后续艾灸治疗使用。
多孔塑料固定平台	滁州华信塑料工业有限公司	341124000005877	固定平台长 500 mm，宽 300 mm，高 5 mm。其上的孔洞长 7 mm，宽 3.2 mm，相邻两孔之间的距离为 7 mm。该设备用作固定大鼠的平台。
固定绑带	浙江利泰塑胶有限公司	331003000001553	每条固定绑带长 300 mm，宽 4.8 mm。绑带呈锯齿状，末端带有扣具，插入后可锁定。
方形棉布	无印良品（上海）有限公司	WYLP20241105_1	方形棉布尺寸为 30 cm ´ 30 cm，用于遮挡实验动物的视线。
方形纸片	得力集团有限公司	7752-1114	为防止大鼠烫伤，研究人员裁剪了一些规格为 2 cm ´ 2 cm 的方形纸片。
无菌纱布	江西中淦医疗器械有限公司	20172140084	无菌纱布用于包裹大鼠尾巴，以确保电针治疗过程中的导电性。