用于肿瘤和疾病研究的胶基组织微阵列构建

Summary

该协议描述了一种低成本生产和高效的胶基TMA构建验证方法，为肿瘤和疾病研究提供了便捷的病理诊断平台。

Abstract

组织微阵列技术（TMA）是一种高通量平台，可同时检测和分析多个组织样本，促进高效的肿瘤和疾病生物标志物研究。然而，传统的TMA施工方法往往面临作复杂、程序耗时、精度不一等局限性。开发了一种基于胶水的 TMA 构建方法来克服这些挑战，提供改进的组织核心固定和增强的结构稳定性。系统验证包括组织学评估（HE 染色）、靶蛋白的免疫组织化学分析和荧光原位杂交 （FISH） 分析。结果表明，基于胶水的方法保持了出色的切片完整性，提高了信噪比，并确保了一致的批次间重现性。尽管该方法仅限于手动作，但它为中等通量 TMA 生产提供了可靠且经济高效的选择。该方法特别适合重视灵活性和样本多样性而不是大规模自动化的研究环境，从而扩展了 TMA 在学术和诊断环境中的实用性。

Introduction

组织微阵列（TMA）是一种用于分析组织样品^的高通量技术^1,2,3。获得多个供体组织核心，并将供体石蜡块转移到受体组织块中，以便在理论上相同的^{性能条件下进行}同时差异和比较分子分析^2,4。构建组织微阵列 （TMA） 的经典方法是使用打孔器从供体组织样本中提取组织核心，并将它们依次排列到受体石蜡块中。该方法适用于相似深度的供体石蜡块，并允许在单个切片上对多个样品进行有效分析，大大提高了研究的效率^和数据的一致性^5,6,7。然而，该方法仍然具有某些局限性，包括在包埋过程中对组织核心的处理不充分，这可能导致在后续分析中样品染色不^一致8。

TMA构建的第二种方法是胶带法^9,10

Protocol

所有供体块均取自2016—2018年南京医科大学附属淮安市第一人民医院采集的档案病理标本。样品在使用前经过去识别化处理，并按照批准的方案进行处理（南京医科大学附属淮安市第一人民医院伦理委员会，KY-2024-250-01）。

1. 供体组织的评估和标记

1. 选择厚度为 ≥5 毫米、面积为 ≥15 毫米× 15 毫米的组织块。确保边缘有 2 毫米的安全裕度，并排除出现坏死、出血或钙化的区域，以保持组织完整性。
2. 目标区域识别和标记
   1. 使用光学显微镜评估H&E染色切片。通过低功率扫描定位目标区域，然后切换到高功率以确认细胞形态特征。在幻灯片上标记目标区域边界。
   2. 将所选区域的坐标映射到石蜡块的表面，以完成标记转换。

2.组织核心提取

1. 穿刺准备和样品预处理
   1. 选择直径为2毫米的手持式打孔机，确认其切削刃的光滑度和作的便利性。
   2. 将供体石蜡块放在4°C的冷平台上15分钟。
2. 将针头垂直对准标记点，并施加稳定的旋转压力以达到极限深度。避免在此过程中倾斜或振动

Results

在本研究中，使用胶水方法构建了高质量的组织微阵列。为了验证该方法的有效性，进行了一系列实验，包括H&E染色、特定蛋白质的免疫组化检测和荧光 原位 杂交（FISH）分析。施工过程的一个关键组成部分是组织核心点在预期的位置和彼此相距的距离，并通过目视检查进行评估。对TMA块的目视检查表明，每个TMA中都存在核心并规则间隔（图2A）。H&E染色显示，所有组织核心排列整齐，间距均匀，大小一致，靶组织丰富（图2B）。免疫组织化学染色结果显示，TMA中10种前列腺癌相关蛋白（ZCCHC24、SMAD9、TARBP1、CDHR4、CRTAC1、DNASE1L3、GPR146、IGSF10、ITIH1和CDK1）的稳健表达，显示出一致的染色强度和最小的背景干扰（图3）。此外，FISH分析显示，在干净的背景下，探针信号清晰。在透明的肿瘤区域，识别至少两个浸润性癌区域，并在至少 20 个浸润性癌细胞中随机计数 GSP HER2（红色）和 CSP .......

Discussion

胶水法作为一种构建组织微阵列（TMA）的创新方法，由于其施工程序简便且成本效益高，显示出显着的优势。与依赖精密仪器^14,15的传统针阵法相比，胶合法通过胶合实现样品固定，只需基本工具即可完成，大大降低了技术门槛。与传统的包埋方法相比，胶合方法通过局部分配固定，这显着缩短了组织核心的定位时间，避免了敏感抗原被高温破坏^16,17（表2）。

然而，在实际施工过程中，有许多复杂而精细的步骤。这些步骤不仅消耗了大量的时间，而且对作人员的技术水平和经验提出了极高的要求。从供体组织的选择和标记到组织核心的提取、固定和石蜡包埋，每个步骤都需要精确的构建程序和严格的质量控制^18,19

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
乳腺癌HER2检测试剂盒	安比平	2502001	腺癌HER2检测试剂盒
CDHR4	Abcam	ab166914	CDHR4抗体
CDK1抗体 Abcam		ab265590	CDK1抗体
CRTAC1抗体	Abcam	ab254691	CRTAC1抗体
DNASE1L3	Abcam	ab203669	DNASE1L3抗体
包埋机	P.S.J MEDICAL	BM450A	包埋机
全自动组织脱水机	徕卡生物系统	ASP3005	全自动组织脱水机
玻璃显微镜载玻片	Citotest	250124A1	玻璃显微镜载玻片
水	TIZO	200	胶水
GPR146 抗体	Abcam	ab117104	GPR146 抗体
IGSF10 抗体	Abcam	ab197671	IGSF10 抗体
ITIH1 抗体	Abcam	ab233032	ITIH1 抗体
薄型切片机刀片	赛默飞世尔	3052835	薄型切片机刀片
标记笔	Deli	SK109	标记笔
片机	徕卡生物系统	HistoCore BIOCUT	切片机石
蜡	Solarbio	YA0012	石蜡
SMAD9 抗体	Abcam	ab262940	SMAD9 抗体
TARBP1 抗体	Abcam	ab115896	TARBP1 抗体
ZCCHC24 抗体	Abcam	ab88756	ZCCHC24 抗体