在这里,我们描述了一种从共转导的T细胞混合物中选择性纯化双转导的T细胞的方案。该方法结合了两种逆转录病毒载体,每种载体编码基于亮氨酸拉链的配对细胞分选方法的一个组分,该方法能够对双载体转导的细胞进行选择性免疫磁纯化。
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| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| <强>肿瘤细胞系相关 | |||
| C1498 | ATCC | TIB-49 型 | |
| BM185-CD19 | 参考文献 13 | ||
| BM185-CD20 | 参考文献 13 | ||
| 4D-Nucleofector 核心单元 | 龙沙 | AAF-1003B | |
| 4D-Nucleofector X 单元 | 龙沙 | AAF-1003X型 | |
| Lonza SF 缓冲液试剂盒 | |||
| 病毒生产 | |||
| 10 cm 组织培养 (TC) 处理的细胞培养皿 | 康宁 | 353003 | |
| 50 mL锥形管 | Thermo Scientific | 339652 | |
| 效应烯 | 洽根 | 301425 | |
| pENTR1a 质粒 | 阿德基因 | 17398 | |
| LZRS-Rfa | 阿德基因 | 31601 | |
| PB MMLV puro(小鼠 T 细胞病毒载体) | 参考文献 13 | ||
| PB SFG blastR(人 T 细胞病毒载体) | 参考文献 13 | ||
| pCMV-hyPBase | 桑格研究所 | ||
| 凤凰生态 | ATCC | CRL-3214型 | |
| Phoenix-Eco alpha V beta 3 | 参考文献 13 | Phoenix-Eco 经过改性,可粘附在具有更高亲和力的培养瓶上 | |
| PB-EF1a 内含子 WPRE mCD4 P2A MCS 整合素 β 3 | 参考文献 13 | 可选,以增强包装线细胞与培养瓶的附着力 | |
| PB-EF1a 内含子 WPRE hCD8a 2A 整合素 α V | 参考文献 13 | 可选,以增强包装线细胞与培养瓶的附着力 | |
| 百维克-RD113 | 百维克制药 | ||
| Biovec-RD113 α V β 3 | 百维克制药 | 本研究用 alpha V β 3 载体转染 | |
| Millex-HV 针头过滤器(0.45 &m) | 米利孔 | SLHVR33RRS | |
| 聚乙二醇 8000 (PEG) | 费雪科学 | BP233-1型 | |
| 氯化钠 | 费雪科学 | S271-500型 | |
| 嘌呤霉素 | 圣克鲁斯生物技术 | SC-108071B | |
| 杀稻瘟菌素 | 圣克鲁斯生物技术 | SC-204655 | |
| T175 TC处理烧瓶 | 康宁 | 353112 | |
| 胰蛋白酶-EDTA(0.25%),酚红 | 吉布科 | 25200056 | |
| 细胞培养基 | |||
| 2-巯基乙醇 | 吉布科 | 21985023 | |
| RPMI1640 | 吉布科 | 11-875-119 | |
| DMEM的 | 吉布科 | 11-965-118 | |
| FBS的 | 西格马 | F2442型 | |
| 谷氨酸 | 吉布科 | 35050061 | |
| MEM 非必需氨基酸 | 吉布科 | 11140050 | |
| 青霉素-链霉素 | 吉布科 | 15140-163 | |
| 丙酮酸钠 | 吉布科 | 11360070 | |
| <强>T细胞刺激/转导 | |||
| 15 mL锥形管 | Thermo Scientific | 339650 | |
| 6 孔非 TC 板 | 吉布科 | 351146 | |
| 6 孔 TC 板 | 吉布科 | 353046 | |
| 抗CD19微珠 | 米尔特尼生物科技 | 130-121-301 | |
| InVivoMab 抗小鼠 CD28(克隆 37.51) | BioXCell | BE0015-1型 | |
| InVivoPlus抗小鼠CD3&εsilon;(克隆 145-2C11) | BioXCell | BE0001-1型 | |
| Bovine Serum Albumin | 西格玛·奥尔德里奇 | A4737-1G | |
| 达沙替尼 | 开曼化学 | 11498 | |
| Dynabeads 人 T 激活剂 CD3/CD28 | 吉布科 | 11131D | |
| EDTA (0.5 M),pH 8.0,不含 RNase | Invitrogen | AM9260G | |
| HybriMax 红细胞裂解缓冲液 | 西格马 | R7757-100毫升 | |
| LD色谱柱 | 米尔特尼生物科技 | 130-042-901 | |
| Pan T 细胞分离试剂盒,人用 | 米尔特尼生物科技 | 130-096-535 | |
| Dynamag-15 磁铁 | Invitrogen | 12301D | |
| 磷酸盐缓冲盐水 (1X) | 康宁 | 21040CV | |
| 雷通蛋白 | 宝 | T100B 型 | |
| rhIL-2 | 白细胞介素(aldesleukin) | ||
| T25细胞培养瓶 | 康宁 | 353109 | |
| Zip-sort | |||
| &微;MACS DYKDDDDK 隔离套件 | 米尔特尼生物科技 | 130-101-591 | |
| CD34 MicroBead Kit,人用 | 米尔特尼生物科技 | 130-046-702 | |
| 四边形MACS | 米尔特尼生物科技 | 130-090-976 | |
| MACS 多支架 | 米尔特尼生物科技 | 130-042-303 | |
| LS色谱柱 | 米尔特尼生物科技 | 130-042-401 | |
| 流式细胞术和细胞监测 | |||
| 抗 CD90.1 Thy1.1 APC(克隆 OX-7) | BD生物科学 | 货号# 561409;RRID:AB_10683163 | |
| 抗 V5 标签抗体,(克隆 4C12E11)iFluor 488 | 金斯瑞 | 货号# A01803, RRID:AB_2925231 | |
| Myc PE | 细胞信号传导技术 | 货号# 2233;RRID:AB_823474 | |
| Myc Alexa 647 | 细胞信号传导技术 | 货号# 2233;RRID:AB_823474 | |
| APC 抗 DYKDDDK 标签(克隆 L5) | 生物传奇 | Cat# 637307;RRID:AB_2561496 | |
| 小鼠抗 CD34 抗体,Alexa Fluor 647,(克隆 QBEnd/10) | 诺武斯生物制品 | 货号# NBP2-34713AF647;RRID:AB_2925234 | |
| 链菌 FITC | 金斯瑞 | 货号# A01736;RRID:AB_2622221 | |
| Incucyte SX5 | 缝纫机 | ||
| Penteon 流式细胞仪 | 安捷伦 |
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