本研究探讨富含血小板纤维蛋白（PRF）中生长因子释放的昼夜节律变化，并分析其与皮质醇水平的相关性，旨在优化基于PRF的再生治疗操作时机。
需要JoVE订阅才能观看此内容。 请登录或开始免费试用
本文内容
摘要
摘要
富血小板纤维蛋白（PRF）在牙科领域具有广泛的临床应用，尤其在软硬组织再生、拔牙窝愈合、牙周缺损治疗、上颌窦提升以及黏膜牙龈手术中。PRF 是一种来源于血小板、富含生长因子的生物材料，通过单步离心法即可制备。via 单步离心方案制备。本研究旨在评估 PRF 来源的生长因子在早晨与傍晚之间是否存在昼夜节律性变化。20 名健康志愿者参与了研究，每人分别在 08:00 和 20:00 各采集三份静脉血样本。每个时间点的三份样本分别用于全血细胞计数、血清皮质醇分析以及 PRF 制备（以 708 × g 离心 12 分钟）。采用 ELISA 法在 24 小时和 72 小时检测 PRF 中的生长因子（IGF-1、PDGF、FGFR、VEGF、TGFβ-1）水平，并比较不同时间点之间的差异，同时与血清皮质醇水平进行相关性分析。结果显示，傍晚采集样本中 FGFR 在 72 小时的水平显著高于 24 小时；然而，IGF-1、PDGF、VEGF 和 TGFβ-1 在早晨与傍晚之间的水平均无显著差异。早晨样本中，皮质醇水平在 72 小时时与 PDGF 呈负相关；傍晚样本中，皮质醇水平在 72 小时时与 IGF-1 呈负相关；但未观察到其他具有统计学意义的相关性。这些结果提示，采血时间对 PRF 中生长因子含量无显著影响，表明在临床操作中关于采样时间的选择具有灵活性。
引言
富血小板纤维蛋白（PRF）是一种第二代血小板浓缩物，因其自体来源、制备简便以及富含生物活性成分，常用于再生牙科治疗1通过不含抗凝剂的全血离心制备，富血小板纤维蛋白（PRF）可提供富含血小板和白细胞的纤维蛋白基质，这些细胞可分泌多种生长因子，如血小板源性生长因子（PDGF）、转化生长因子-β1（TGF-β1）、胰岛素样生长因子-1（IGF-1）、血管内皮生长因子（VEGF）和成纤维细胞生长因子受体（FGFr）。这些生物分子在细胞增殖、血管生成、细胞外基质重塑及组织再生过程中发挥核心作用。2与需要抗凝剂和外源性激活的富血小板血浆（PRP）相比，富血小板纤维蛋白（PRF）的制备无需抗凝剂和外源性激活 通过 一种单步、无需抗凝剂的处理过程，可生成含有包埋白细胞和血小板的生理性纤维蛋白支架。该结构可支持生长因子和细胞因子更缓慢、更持久的释放，有望增强伤口稳定性及早期组织修复，同时降低操作复杂性和成本1,2此外，由于不含抗凝剂和激活剂，可最大限度减少因操作带来的变异，更有利于保持血小板的天然行为，从而在临床椅旁应用及不同操作者间的标准化方面提供实际优势。2.
尽管富血小板纤维蛋白（PRF）在临床上广泛应用，但其生....
访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。
方案
本研究在土耳其阿达纳的Çukurova大学牙科学院牙周病学系进行，共有20名健康志愿者参与。在纳入研究前，所有参与者均被告知研究的目的、方法和操作流程，并签署了书面知情同意书。本研究已获得Çukurova大学医学院临床研究伦理委员会的伦理批准（批准号：125/55，日期：2022年9月16日）。所有操作均遵循美国国立卫生研究院（NIH）与疾病控制与预防中心（CDC）指南8，包括处理人血样本所需的基本生物安全指导，以及对生物危害材料和化学试剂的废弃物处置说明。所用试剂和设备列于材料表中。
1. 受试者选择
纳入研究的受试者为18至25岁之间的健康个体，无任何已知的全身性疾病，并在操作过程中表现出足够的配合性。若个体存在任何全身性疾病、处于妊娠或哺乳期，或正在使用可能影响血液学或激素参数的药物或激素类制剂，则被排除在外。
2. 血液采集与分组
每位参与者共采集六份10 mL静脉血样本，其中三份在早晨（08:00）采集，三份在晚上（20:00）采集。研究中使用无添加剂的无菌PRF玻璃管（10 mL）。早晨采集时，1号管用于全血细胞计数（CBC），2号管用于血清皮质醇分析，3号管....
访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。
结果
所有20名志愿者（10名女性和10名男性，年龄在18至25岁之间）均完成了研究，无任何样本丢失。全血细胞计数结果证实，所有样本的血小板及血液学参数均在正常参考范围内，表明PRF制备物的可靠性。
早晨与傍晚血液参数的比较
皮质醇水平在早晨样本中显著高于傍晚（p < 0.001），反映了生理性的昼夜节律。白细胞计数在傍晚样本中较高（p = 0.001），而红细胞计数（RBC）、血红蛋白浓度（HGB）和红细胞压积（HCT）在早晨显著升高（所有指标 p < 0.001）。（表1）血小板计数（PLT）和血小板分布宽度（PDW）未见显著差异。然而，平均血小板体积（MPV）（p < 0.001）、大型血小板比率（PLCR）（p = 0.002）和血小板压积（PCT）（p < 0.001）在傍晚样本中显著升高。
皮质醇、白细胞和血小板指标中观察到的显著昼夜差异支持了以下假设：系统性生理参数随一天中的时间变化，可能影响富血小板纤维蛋白（PRF）的组成。
访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。
讨论
基于已知的血小板活性和激素分泌的昼夜节律调控，最初假设血液采集时间（早晨 vs. 晚间）可能影响富血小板纤维蛋白（PRF）中生长因子的含量。本研究旨在检验是否存在此类时间差异，以及这种差异是否与血清皮质醇水平和血液学参数相关。本研究设计为一项初步探索性研究，以考察PRF来源的生长因子释放是否存在昼夜节律性变化。因此，未进行正式的样本量计算。然而，事后功效分析表明，当前样本量（n = 20）已足以提供初步数据，用于估计未来研究的效应量。
研究结果表明，大多数生长因子（IGF-1、PDGF、VEGF 和 TGF-β1）在早晨和傍晚样本之间无显著差异，而 FGFR 水平在 72 小时后傍晚样本中显著升高。这些结果提示，PRF 来源的生长因子释放全天基本稳定，仅在部分标志物中观察到有限的昼夜节律敏感性。
多项研究已记录到血小板生物学的昼夜节律调节，包括血小板计数、反应性及血栓形成风险的变化，这些指标通常在清晨达到高峰，原因是血小板聚集增强和纤溶活性降低6。这一现象被认为.......
访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。
披露
作者无任何利益冲突需要披露。
材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 离心机 | DUO | 913023410238 | |
| ELISA试剂盒 | Fine Test, 武汉菲恩生物科技有限公司 | IGF-1（目录号：EH0165） | |
| ELISA试剂盒 | Fine Test, 武汉菲恩生物科技有限公司 | PDGF（目录号：EH3531） | |
| ELISA试剂盒 | Fine Test, 武汉菲恩生物科技有限公司 | FGFR（目录号：EH0715） | |
| ELISA试剂盒 | Fine Test, 武汉菲恩生物科技有限公司 | VEGF（目录号：EH0327） | |
| ELISA试剂盒 | Fine Test, 武汉菲恩生物科技有限公司 | TGF-β1（目录号：EH0287） | |
| PRF管 |  | 6370 |
参考文献
- Dohan, D. M., et al. Platelet-rich fibrin (PRF): A second-generation platelet concentrate. Part I: Technological concepts and evolution. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 101 (3), e37-e44 (2006).
- Ehrenfest, D. M. D., Rasmusson, L., Albrektsson, T.
访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。