CD44 通过调控 PI3K/Akt 信号通路的活化，协调炎症级联反应和破骨细胞分化，从而促进疾病的发生发展。金雀异黄素通过靶向抑制 CD44 介导的信号传导，对共病性骨质疏松症（OP）和牙周炎（PD）表现出治疗作用。
研究文章
CD44 通过调控 PI3K/Akt 信号通路的活化，协调炎症级联反应和破骨细胞分化，从而促进疾病的发生发展。金雀异黄素通过靶向抑制 CD44 介导的信号传导，对共病性骨质疏松症（OP）和牙周炎（PD）表现出治疗作用。
本研究通过蛋白质组学分析阐明了骨质疏松症（OP）与牙周炎（PD）共病相关的关键分子决定因素，同时揭示了其调控功能 CD44 在骨质疏松小鼠模型的实验性牙周炎中。第一阶段包括收集来自本机构接受常规健康评估的骨质疏松合并牙周炎患者（n = 3）和健康对照者（n = 6）的血清样本，用于比较蛋白质组学分析。随后在临床样本和骨质疏松合并牙周炎小鼠模型中对差异表达基因（DEGs）及相关信号通路进行转化验证。为从机制上表征 CD44在骨质疏松条件下探究其在帕金森病（PD）进展中的作用，通过双侧卵巢切除术建立骨质疏松小鼠模型，随后采用结扎法诱导实验性牙周病（PD）。综合评估包括苏木精-伊红染色分析组织形态学改变、利用显微CT检测上颌第一磨牙区域骨微结构变化，以及免疫印迹法检测磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）/Akt信号通路相关组分。同时，结合网络药理学筛选与分子对接模拟，以鉴定活性成分 当归 具有治疗潜力。蛋白质组学分析鉴定出 CST3, A2M, CD44, CDH13, CETP，以及 VWF 作为OP+PD发病机制中潜在的致病介质。在本研究中，基因集富集分析显示，PI3K/Akt信号通路在OP+PD疾病进展中起主要介导作用。基于定量逆转录PCR的验证证实了显著差异 CD44 在临床和实验性OP+PD队列中均出现上调。 在体 通过调节 CD44 抑制显著恢复了骨质疏松小鼠牙周组织的完整性，减少了炎性细胞浸润，并增强了牙槽骨的微观结构，同时伴随PI3K/Akt信号通路的抑制。网络药理学分析揭示染料木黄酮是其中主要的生物活性植物化学成分 当归，其中 CD44 被确定为其核心分子靶点。染料木素改善了骨质疏松合并牙周病小鼠的牙槽骨结构，增加骨体积分数（BV/TV）、骨小梁厚度（Tb.Th）和骨矿物密度（BMD），同时减少骨小梁数量（Tb.N）和骨表面积与骨体积比（BS/BV），表明骨质量更佳，其机制归因于CD44信号轴的抑制。
牙周炎（PD）是一种复杂的混合性微生物疾病，由龈沟内病理性生物膜的沉积引起1。其特征是微生态环境失衡，触发宿主体内一系列病理性炎症级联反应，最终导致牙骨质、牙周膜和牙槽骨（牙周附着系统的组成部分）发生不可逆的进行性损害，可能引起牙齿松动甚至脱落2。为便于比较，研究采用了标准化的统计方法，最新的流行病学数据3表明，全球有超过10.66亿人患有重度牙周炎，年龄标化患病率约为12.5%，在不同国际人群中存在显著差异。
骨质疏松症（OP）是一种全身性骨骼疾病，其特征是骨微结构显著退化和骨量系统性流失4,5。这种结构上的脆弱性显著增加了骨折风险，尤其是在老年人群中。值得注意的是，日本65岁及以上人群的牙周病患病率高于30至64岁的成年人。绝经后女性牙周病发病率较高，且常伴有其他健康问题6,7。研究预测，从2005年到2025年，该疾病的疾病负担将增加超过50%，经济成本预计将从170亿美元上升至250亿美元。这一趋势凸显了牙周病所带来的重大社会经济影响。此外，在患有牙周病和牙龈炎的女性患者中，疾病持续时间及其慢性程度与健康风险的增加之间存在明确的正相关关系8。
既往研究表明，由于骨质疏松症（OP）与牙周病（PD）存在共同的危险因素，例如衰老、吸烟以及钙和维生素D摄入不足，OP可能促进PD的发展，反之亦然。在绝经后女性人群中，严重的骨质疏松可能伴随下颌骨矿物质含量降低，这可能与牙周附着水平不足有关9。已有研究证实，OP相关的骨密度下降可能加速PD引起的牙槽骨吸收，从而有利于牙周致病菌的侵入10。在一系列与年龄和生理变化相关的健康挑战中，随着全球人口老龄化进程的加快以及绝经期女性人数的显著增加，牙周病和骨质疏松症尤为突出。因此，明确相关指标及其相互关系对于疾病的预防、治疗及预后评估具有重要意义。基于上述背景，本研究采用蛋白质组学方法筛选OP合并PD发展过程中的关键蛋白，重点关注CD44介导的PI3K/Akt信号通路，并利用骨质疏松小鼠的实验性牙周病模型，探讨这些关键蛋白的调控作用及可能机制。进一步结合当归（Angelica sinensis）——一种在临床实践中广泛应用的中药，具有抗炎和护骨作用，既往报道可缓解骨质流失并调节骨质疏松症及牙周病中的炎症反应——进行靶向治疗药物的筛选。在网络药理学和分子对接的指导下，确定甘草素（glycitein）为主要的生物活性植物化学成分，是干预OP合并PD的合理候选化合物。
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所有动物实验均按照实验室动物护理和使用的机构指南进行。研究方案已通过动物伦理委员会的审查和批准。所有努力均旨在尽量减少动物的痛苦。
本研究旨在评估CD44介导的PI3K/Akt通路调控在合并骨质疏松症与牙周炎（OP+PD）过程中破骨细胞分化及炎症进展中的作用，并确定当归中的一种生物活性成分甘草素是否能够治疗性地调节这些效应。该研究的理论依据源于越来越多的证据表明，CD44的过表达与OP+PD中的病理性骨吸收及免疫失调相关11,12,13。通过整合蛋白质组学、体内建模和网络药理学方法，本实验方案系统地探究了缓解疾病进展的分子机制及治疗干预策略14。
体内实验的样本量基于既往研究和功效分析确定，每组 n = 6，可确保在不同处理条件下检测到显著差异（P < 0.05）所需的足够统计功效。染料木黄酮以50 mg/kg和100 mg/kg剂量给药，溶于含5% DMSO的橄榄油中，通过每日灌胃给药。小鼠在帕金森病（PD）造模后持续监测8周。诱导牙周炎症的结扎线采用5-0丝线，双侧卵巢切除术在0.3%戊巴比妥钠麻醉（0.5 mL/100 g）下进行15。此外，分子检测（包括RT-qPCR、Western印迹和ELISA）均采用经过验证的实验方案16，组织学评估（如苏木精-伊红（H&E）染色和亚甲蓝染色）也遵循既定的时间流程和染色时长。
所有涉及化学试剂、染色剂和生物样本的实验操作均按照标准生物安全规程进行，以最大限度降低健康风险。对于甲醛、EDTA、亚甲蓝和酸性品红等有害物质，操作时均佩戴个人防护装备（PPE），包括手套、口罩和护目镜。所有废弃物，包括使用过的试剂和被污染的一次性耗材，均收集于指定的生物危害容器中，并依据机构和环境安全规范，通过认证的危险废物处理服务机构进行处置。图1展示了整体实验流程。
临床数据收集
在本研究中，我们系统性地收集并全面分析了三名OP+PD患者和六名对照受试者的基线临床数据及详细的病史资料，包括人口统计学特征、生活方式因素以及解剖学和转移特征。此外，对人乳头瘤病毒（HPV）感染的检测结果（阳性或阴性）进行了严格确认。详细记录了转移病灶的进展阶段或复发模式。在免疫治疗开始的前7天内，系统性地采集并标准化处理了患者的血液样本，包括血常规等生化指标。血常规检测严格按照标准操作流程进行，以准确评估血小板、淋巴细胞和中性粒细胞等关键参数。同时平行测定血清白蛋白水平，并通过定量分析球蛋白浓度指标来评估肝功能。
患者
骨密度评估与受试者分层
我们对腰椎区域和股骨颈的骨密度测量值进行了系统性比较。所有检查均由本部门经验丰富的放射科医生使用精密设备完成，以准确量化骨密度数值。为确保样本采集的标准化，要求受试者在采样前至少禁食 8 小时。通过整合骨密度数据与全面的牙周评估数据，我们将受试者严格分为骨质疏松合并牙周炎（OP+PD）组和健康对照组（HC），并确保两组之间的性别比例完全匹配。性别匹配是指在 OP+PD 组与健康对照组之间女性受试者的分布相等。然而，本研究仅纳入女性受试者，以聚焦于绝经后骨质疏松；因此两组中均无男性受试者。本研究遵循《赫尔辛基宣言》的伦理准则，所有参与者均签署正式的知情同意书，充分保障其权益。
诊断参数
骨质疏松症的定义依据《原发性骨质疏松症诊疗指南（2022年）》17，诊断阈值设定为腰椎（L1-L4）或髋部骨密度T值 ≤ -2.5个标准差（SD）。牙周炎分期遵循2018年牙周疾病世界工作组分类标准18，仅纳入Grade A、Stage II-III的病例。纳入标准：年龄50–65岁的绝经后女性，同时符合上述骨质疏松症（OP）和牙周炎（PD）诊断，无自身免疫性疾病，无恶性肿瘤病史，心肺、肝肾功能正常。排除标准：患者或家属拒绝参与，近6个月内接受过针对骨质疏松症或牙周炎的药物治疗。
血清样本的蛋白质组学分析
收集了三名OP+PD患者和六名对照受试者的血清样本用于蛋白质组学分析。通过标准流程实现蛋白质的相对定量，差异表达蛋白定义为P < 0.05且倍数变化 > 1.5的蛋白19。
基因集富集分析（GSEA）
采用基因集富集分析（GSEA）来鉴定对照组与OP+PD队列之间发生异常调控的关键信号通路。原始转录组数据首先经log2转换，并通过分位数归一化处理以消除批次效应。从分子特征数据库（MSigDB）中筛选出具有多种生物学功能的基因集，使用非参数Wilcoxon秩和检验评估统计学显著性。富集分析结果以标准化富集得分和错误发现率（FDR < 0.25）进行报告。
加权基因共表达网络分析（WGCNA）
采用WGCNA鉴定与OP+PD表型显著相关的基因模块。选择12的软阈值幂次以达到无尺度网络拓扑结构（R2 > 0.85），并使用Pearson相关性分析评估模块特征基因与临床特征之间的关联。对高度相关的模块进行功能富集分析，以揭示相关的生物学通路。
建立卵巢切除诱导的骨质疏松小鼠模型
本研究共涉及116只SPF级雌性小鼠。实验前，动物在温度和湿度受控的环境中饲养，进行为期7天的适应期，在此期间给予标准化啮齿类动物饲料和蒸馏水。所有动物操作程序均严格遵循西安交通大学医学伦理委员会批准的伦理协议（批准号：0609）。本研究注册项目编号为[2024-054]。
双侧卵巢切除术（OVX）手术方案：
通过腹腔注射0.3%戊巴比妥钠（0.5 mL/100 g体重）对小鼠进行麻醉。手术区域背部毛发被剃除，动物置于加热的无菌手术台上，呈仰卧位。使用75%乙醇进行无菌准备后，在肾脂肪垫水平、脊柱旁1 cm处做双侧旁正中切口。外翻卵巢囊，使用5-0丝线在靠近卵巢处结扎输卵管，随后切除双侧卵巢、相关脂肪组织及部分输卵管结构。肌肉筋膜层和皮肤层依次使用4-0可吸收缝线缝合。术后以75%乙醇进行抗感染处理。
假手术对照：
假手术小鼠接受相同的操作步骤，包括卵巢暴露和卵巢周围脂肪组织切除，但不进行卵巢摘除。
术后管理：
使用循环水加热垫促进麻醉后恢复，直至动物完全恢复自主活动。术后72小时内通过皮下注射卡洛芬（5 mg/kg，每日一次）维持镇痛，并在术后48小时内补充青霉素G（50,000 IU/kg）以预防手术部位感染。在为期6周的骨质疏松建模期间，每周监测动物体重，若动物体重减轻超过>20%或出现临床痛苦表现，则予以剔除。
实验性OP+PD动物模型的构建
实验性PD模型是在已建立的OP动物模型基础上构建的。为避免结扎线断裂并确保在磨牙间顺利穿入，采用5-0丝线进行结扎。操作过程中，轻柔牵拉小鼠口角，用镊子夹住结扎线，小心地将其放置于第一和第二磨牙之间的牙颈部区域。操作时保持结扎丝和镊子尖端处于水平位置，以尽量减少对颊黏膜的损伤，从而降低出血或死亡风险。另一只手轻拉结扎线的对侧端，引导其逐渐进入磨牙间的邻间隙。当结扎线正确就位后，用镊子夹住靠近颊侧的一段线，采用相同技术小心地将其穿入第二和第三磨牙之间。轻柔的向下牵引有助于丝线顺利通过。最后，在第二磨牙的中牙颈部区域将结扎线牢固打结。随后让小鼠恢复。
定量反转录聚合酶链式反应（RT-qPCR）
材料表列出了用于靶向炎症、凝血和细胞黏附相关基因（包括 CD44, CDH13, VWF 和 GAPDH）的定量反转录聚合酶链式反应（RT-qPCR）的特异性上游和下游引物序列。表1总结了用于RT-qPCR分析的引物序列。
Western blot 分析
采用 Western blotting 方法系统研究了牙周组织中关键信号通路蛋白的表达特征。使用含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的 RIPA 裂解液对牙周组织进行冻融匀浆，以高效提取总蛋白。经高速离心（12,000 × g，4 °C，10 分钟）分离裂解物后，取上清液利用 BCA 试剂盒精确测定蛋白浓度，为后续实验提供可靠的数据支持。
每个实验组加载30 µg总蛋白，并通过10% SDS-PAGE系统进行分离。分离后的蛋白采用半干法转移至PVDF膜上。为减少背景干扰，膜在室温下用5%脱脂奶粉封闭h。随后，将膜置于4 °C的稳定环境中，以进行后续处理。
随后将膜在 °C 下与特异性一抗（参见材料表）孵育 2 小时。次日，使用 TBST 缓冲液充分洗涤膜，然后在室温下用 1:10,000 稀释的 HRP 标记二抗孵育 1.5 小时。所有免疫检测步骤均严格遵循标准化操作流程，以确保信号通路分析的一致性和有效性20。
通过使用增强型化学发光（ECL）底物捕获信号，并利用高分辨率成像设备精确定位蛋白条带，采用ImageJ软件对条带的光密度值进行定量分析。最终，通过系统比较各组目标蛋白/β-Actin相对于对照组的相对表达水平，准确评估了不同干预条件下PI3K/Akt通路的激活程度及其动态变化。
酶联免疫吸附测定（ELISA）
本研究使用ELISA试剂盒（参见材料表），对血清样本中多种炎症性细胞因子（包括TNF-α、IL-6、IL-1β和IL-4）进行了精确定量。同时检测了TRAP5b、ALP和TGF-β的浓度，以评估破骨细胞活性。将稀释1:10的血清样本加入预先包被捕获抗体的96孔板中，在25 °C孵育2小时，使抗原特异性结合至固定的捕获抗体上。孵育结束后，使用含Tween-20的磷酸盐缓冲液（PBS-T）洗涤三次，去除未结合物质。随后加入生物素标记的检测抗体，在相同温度下孵育1小时。接着加入链霉亲和素-辣根过氧化物酶（streptavidin-HRP）以结合生物素化抗体，并在避光条件下于室温再孵育20分钟。然后加入终止液终止酶促反应，使用酶标仪在450 nm波长下测定吸光度，以确定细胞因子浓度。
苏木精 & 伊红（H&E) 染色
采用标准方法进行H&E 染色法对牙周组织石蜡包埋切片进行染色，以分析其微结构变化。样本制备过程包括：先用 4% 多聚甲醛溶液固定 24 小时，随后经梯度乙醇脱水（70%、80%、95% 和 100%），二甲苯透明处理，最后石蜡包埋并制成 4 µm 厚的切片21脱蜡后，样本经梯度乙醇（100%至70%）复水。染色过程首先用梅氏苏木精染液浸染5分钟，随后用流水冲洗，再在1%酸性乙醇中分化，再次冲洗。然后将切片用0.5%伊红染色10秒，完成染色程序。
染色后，切片再次经梯度乙醇脱水，二甲苯透明，并用封片剂封片。使用配备10倍和40倍物镜的显微镜进行观察，以获取高分辨率图像。组织学分析评估牙周结缔组织的结构完整性、炎性细胞浸润程度以及牙槽骨吸收形态。炎症程度采用改良的Löe-Silness指数进行评分，由两名对样本身份不知情的病理学家通过半定量评分标准独立评估样本，以确保结果的客观性和可重复性22。
亚甲蓝染色
本研究采用亚甲蓝染色法对标准化处理的上颌牙槽骨切片进行染色，以量化骨吸收程度。实验程序首先进行组织固定：牙周组织在10%中性甲醛溶液中固定24小时，随后在10% EDTA（pH 7.4）溶液中脱钙处理21天。脱钙完成后，样本经石蜡包埋并切成4 µm厚的组织切片，随后贴附于硅烷化载玻片上。切片预处理包括二甲苯脱蜡、梯度乙醇水化，并在60 °C水浴中孵育。随后将载玻片置于0.1%亚甲蓝溶液中染色15分钟。
染色后，使用预热至 60 °C 的蒸馏水洗涤切片 1 分钟，以有效去除多余染料，同时不破坏组织结构。随后用 0.1% 酸性品红复染 5 分钟，以增强组织结构间的对比度。该染色方案为牙槽骨吸收的定量分析提供了稳定且可靠的可视化效果23。最后，切片经梯度乙醇脱水、二甲苯透明并封片。染色后的骨组织在明场显微镜下进行分析，并采集高分辨率图像，以精确评估牙槽骨边缘的吸收情况，用于后续形态学评价。
微型计算机断层扫描（Micro-CT）分析
采用Micro-CT扫描评估OP+PD模型小鼠牙槽骨三维微结构的变化，重点针对上颌第一磨牙区域。术后观察8周后，通过吸入CO2的方式人道处死小鼠，该方法适用于保存颌面部结构。随后取上颌标本，并在4 °C条件下用4%多聚甲醛固定48 h24。
采用重建的DICOM图像进行Micro-CT分析，将上颌区域的图像导入软件时需选择对应扫描样本的数据集。通过在矢状面和冠状面上勾勒牙槽骨结构，手动定义感兴趣区（ROI）为上颌第一磨牙牙根近中颊侧的三分之一部分，通常包含约50个连续切片，以完整覆盖该区域。
为将小梁骨与周围软组织及背景分离，采用180–220 mgHA/cm3的密度阈值。随后进行分割，生成仅表示小梁骨的二值化结构。使用软件中的骨形态计量模块进行形态计量分析。相关参数自动计算得出，包括骨体积分数（BV/TV）、小梁厚度（Tb.Th）、小梁数量（Tb.N）、骨表面积与骨体积比（BS/BV）以及骨矿物密度（BMD）。分析完成后，将数值结果导出为电子表格。
这些测量用于评估与骨质疏松合并牙周病（OP+PD）病理状态相关的牙槽骨微结构损伤程度，并评价染料木黄酮在恢复骨质量方面的治疗效果。该方法实现了对牙周骨环境结构完整性的高分辨率、可重复且定量的评估，为治疗效果提供了关键的形态学见解。
网络药理学分析
为系统研究可能调节共病性骨质疏松症与牙周炎（OP+PD）相关关键生物学通路的中药活性成分，本研究采用网络药理学方法对当归（Angelica sinensis）进行分析。该植物因其在传统中医中长期用于治疗骨骼相关疾病及炎症性疾病（包括骨质疏松症和慢性牙龈疾病的相关症状）而被选中。在化合物筛选阶段，通过TCMSP和TCMID数据库获取当归的活性成分[数据库详情移至ToM]，并采用口服生物利用度（OB）≥ 30% 和类药性（DL）≥ 0.18 的标准进行筛选。利用STITCH预测化合物-靶点相互作用，并通过DisGeNET和OMIM进行靶点验证。使用DAVID 2021平台进行通路富集分析，以鉴定所选化合物可能调控的KEGG信号通路。为可视化分子相互作用，基于拓扑学指标（度中心性、介数中心性）构建了"化合物-靶点-通路"网络。分析结果显示，染料木素（glycitein）作为一种天然黄酮类化合物，具有良好的药代动力学特性，并与CD44表现出较强的连接性，提示其在OP+PD中可能具有治疗潜力。然而，染料木素尚未被临床批准用于治疗骨质疏松症或牙周炎；这些发现基于计算机模拟预测，为后续体内验证实验提供了理论框架25。
分子对接验证
CD44（PDB 编号：1UUH）和 PI3K（PDB 编号：4L23）的蛋白质结构取自 RCSB 蛋白质数据库（https://www.rcsb.org）。配体结构（染料木苷、藁本内酯）通过分子力场进行能量最小化优化。对接模拟采用遗传算法进行，参数设置如下：运行次数 100 次，种群大小 150，能量评估次数 25×106 次。结合位点根据晶体结构中配体的坐标定义（CD44：20×20×20 Å3；PI3K：25×25×25 Å3）。对接结果按结合能（ΔG，kcal/mol）排序，并使用根均方偏差（RMSD）阈值 <2.0 Å 验证结果的可重复性。
甘草素在OP+PD小鼠模型中的治疗效果评估
甘草素（纯度≥98%）购自经认证的生化试剂供应商，为分析纯级，用于体内实验，是一种天然异黄酮，已知存在于当归（Angelica sinensis）中，具有抗炎和骨保护作用26。通过双侧卵巢切除术（OVX）和结扎诱导的牙周炎症，在11周龄雌性C57BL/6小鼠中建立骨质疏松性牙周炎模型。小鼠被随机分为四组（每组n = 6）：
假手术组：假手术 + 溶剂（橄榄油中含5%二甲基亚砜[DMSO]，每日口服灌胃）
OP+PD组：疾病模型 + 溶剂
OP+PD + 低剂量染料木黄酮（50 mg/kg）：疾病模型 + 溶剂中的染料木黄酮混悬液
OP+PD + 高剂量染料木黄酮（100 mg/kg）：疾病模型 + 溶剂中的染料木黄酮混悬液
统计学分析
进行了推论性统计检验，并创建了可视化数据图表以生成图形并进行数据可视化。数值数据以均值 ± 标准差（SD）表示。组间比较采用双尾非配对 t 检验，以 &l 0.05 的值视为具有统计学显著性。这些方法确保了数据的稳健性，并提高了后续分析结果的可靠性。
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OP+PD 队列的蛋白质组学分析
对 OP+PD 患者（n=3）和健康对照者（n=6）血清进行定量蛋白质组学分析，鉴定出与疾病发病机制相关的失调蛋白。比较分析显示，在 OP+PD 患者血清中，有九种蛋白表达下调（APOL1、CST3、IGLV3-27、IGHV3-33、PF4、CLEC3B、SRGN、C6、SELL），六种蛋白表达上调（IGLV9-49、A2M、VWF、CETP、CD44、CDH13），相较于对照组（图 2A，B）。加权基因共表达网络分析（WGCNA）界定了与表型相关的转录模块。我们对模块特征基因进行层次聚类，结果显示青色模块（turquoise module）与 OP+PD 表型之间存在强相关性（Pearson 相关系数 r > 0.85）（图 2C–E）。该模块的功能富集分析表明，其在免疫调控（P = 3.2 × 10-5）和细胞...
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本研究提出了一种转化研究框架，结合蛋白质组学分析、基因表达验证、体内动物模型和网络药理学方法，以探讨骨质疏松症与牙周炎（OP+PD）共病的分子机制。核心假设是CD44调控PI3K/Akt信号通路，从而加剧OP+PD状态下的炎症性骨丢失，而来自当归（Angelica sinensis）的黄酮类化合物甘草素可能通过抑制CD44缓解这一过程。该整合策略连接了分子发病机制与中药药理学，为系统性骨骼-炎症性疾病治疗药物的发现建立了平台27,28,29,30。
现有大多数研究仅依赖于骨质疏松症（OP）或牙周病（PD）模型，未能考虑二者之间的协同作用。流行病学证据显示，衰老、雌激素缺乏和炎症性细胞因子过表达等共同危险因素在共存时会加速疾病进展 31,...
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作者声明无利益冲突。
本研究由甘肃省医疗卫生行业科学技术基金（项目编号：GSWSKY2020-77）、甘肃省自然科学基金（项目编号：25JRRA314 和 21JR7RA620）、甘肃省人才计划以及甘肃省人民医院青年孵化研究项目（项目编号：23GSSYF-35）资助。
作者贡献：
Jing Qi 完成了大部分实验工作和数据分析。Yunqing Pang 参与了样本采集、数据整理和统计分析。Yu Wang 协助实验设计并提供了技术支持。Dawei Hou 和 Jing Wang 共同监督了该项目，对稿件的重要知识内容进行了关键性修改，并批准了最终版本。所有作者均阅读并批准了最终稿件。
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| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| ELISA试剂盒 | 上海酶联生物科技股份有限公司 | 炎症细胞因子（TNF-α, IL-6, IL-1β, IL-4, ALP, TRAP5b, TGF-β，VWF，CD44 | |
| RNA提取试剂盒 | 上海叶生生物科技 | 血清RNA提取 | |
| cDNA合成试剂盒 | 上海叶生生物科技 | 高活性逆转录 | |
| qPCR试剂盒 | 上海叶生生物科技 | 定量PCR扩增 | |
| 抗体（一抗/二抗） | Cell Signaling Technology / Abcam / 杭州先利生物科技 / 北京中杉金桥生物技术 | 特异性一抗； β-肌动蛋白内参；山羊抗兔IgG二抗 | |
| 组织学试剂 | 碧云天生物技术 / 上海上上 | 苏木精–伊红和亚甲蓝染色 | |
| 化学发光底物 | 雅肯生物技术 | Western blot 检测 | |
| 微型计算机断层扫描系统 | Scanco Medical AG（Viva CT40） | 高分辨率显微结构分析 | |
| LC-MS/MS 系统 | 赛默飞世尔科技 Q Exactive HF-X | 高分辨率蛋白质组学分析 | |
| 软件：MaxQuant（v2.1.0），Andromeda | 布罗德研究所 | 蛋白质组学数据预处理 | |
| 软件：GSEA（v4.3.2） | 布罗德研究所 | 通路富集分析 | |
| 软件：R（v4.0.3）、WGCNA（v1.73）、pheatmap（v1.0.12） | R 基金会 | 统计计算，网络分析，聚类分析，热图 | |
| 软件：AutoDock 4.2，AutoDockTools 1.5.7 | 斯克里普斯研究所 | 分子对接与网格定义 | |
| 软件：Open Babel 3.1.1 | Open Babel 项目 | 配体结构优化 | |
| 软件：PyMOL 2.5.2 | 施ödinger, LLC | 分子对接可视化 |
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