本研究表明，对于卵巢储备功能减退的女性，养精种玉汤可通过改善卵母细胞和胚胎质量，提高辅助生殖治疗的效果。在早发性卵巢功能不全的大鼠模型中，该方剂可恢复激素平衡，促进卵泡发育，并调节自噬和脂质代谢。
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本研究表明，对于卵巢储备功能减退的女性，养精种玉汤可通过改善卵母细胞和胚胎质量，提高辅助生殖治疗的效果。在早发性卵巢功能不全的大鼠模型中，该方剂可恢复激素平衡，促进卵泡发育，并调节自噬和脂质代谢。
右归饮（YZD）是一种传统中药复方，被认为可改善卵巢功能和生育结局，但目前尚缺乏标准化的临床证据。本研究评估了YZD在卵巢储备功能减退（DOR）女性接受体外受精/卵胞浆内单精子注射-胚胎移植（IVF/ICSI-ET）治疗中的作用，并在早发性卵巢功能不全（POF）大鼠模型中进行了机制验证。在临床试验中，DOR患者被分为两组，分别接受标准GnRH拮抗剂方案单用或联合YZD治疗。两组间基线特征具有可比性，而YZD组显示出更高的获卵数和优质胚胎数，同时中医证候评分也得到改善。在动物实验中，研究人员建立了POF大鼠模型，经YZD治疗后，大鼠动情周期得以改善，血清雌二醇水平恢复，促卵泡激素水平降低，卵巢组织学表现更健康。透射电镜显示，YZD减少了卵巢细胞中过度的自噬体形成和脂质积聚，提示其可能调控了自噬-脂质代谢轴。综上，这些结果表明YZD可增强DOR女性的卵巢储备功能，促进胚胎发育，可能提高妊娠潜力。该标准化方案为将YZD整合入辅助生殖技术周期提供了可重复的框架，支持其在临床生殖医学中的转化应用潜力。
卵巢储备功能减退（DOR）是一种影响女性生殖健康的临床病症，其特征是卵巢卵泡的数量减少或质量下降1。临床上，该病症表现为窦卵泡计数减少、抗苗勒管激素（AMH）水平降低或促卵泡生成素（FSH）浓度升高2。DOR约占不孕症病例的10%，是成功受孕的主要障碍之一3。在辅助生殖技术（ART）背景下，美国DOR的患病率估计为19%–26%4，且与妊娠率降低、子痫前期发生率升高以及复发性流产风险增加相关5。尽管已有多种治疗手段可供选择，改善DOR患者的ART治疗结局仍是一项重大挑战，凸显了开发新型有效干预措施的迫切需求6。
杨精中育汤（Yangjing Zhongyu Decoction，YZD）是一种经典的多味中药复方制剂，长期以来应用于生殖临床实践7。该方剂被认为可改善内分泌平衡，支持卵巢功能，从而提高体外受精与卵胞浆内单精子注射-胚胎移植（in vitro fertilization and intracytoplasmic sperm injection-embryo transfer，IVF/ICSI-ET）周期的治疗效果8。初步临床数据显示，YZD可改善卵巢反应性，但目前仍缺乏严谨的作用机制及转化研究。YZD在卵巢储备功能减退（DOR）患者中发挥作用的具体生物学通路尚不明确9,10。现有文献表明，中药复方可能通过多种机制影响卵巢微环境，例如调节抗苗勒管激素（AMH）表达、抑制与卵泡闭锁相关的信号通路（如PI3K/AKT/mTOR通路），以及减轻氧化应激损伤。然而，这些机制假说大多为间接推论，尚缺乏实验验证。
本研究通过将临床评估与实验验证相结合，弥补了上述不足。具体而言，我们观察了育龄丹（YZD）对接受辅助生殖技术（ART）的卵巢储备功能减退（DOR）女性患者的作用，并利用雷公藤苷诱导的DOR大鼠模型探讨其潜在作用机制。在动物实验中，我们检测了内分泌指标（雌二醇和促卵泡激素）、窦卵泡数量、卵巢组织中自噬体的形成以及脂质蓄积情况。通过整合临床结果与实验机制数据，本研究为在体外受精/卵胞浆内单精子注射-胚胎移植（IVF/ICSI-ET）周期中规范应用YZD提供了标准化操作方案，并为YZD作为改善DOR患者卵巢储备功能及生殖结局的辅助治疗手段提供了新的证据。本研究的创新之处在于采用双重研究策略——将标准化的临床应用与机制研究相结合，从而推动了YZD在生殖医学领域中的临床转化及其理论体系的完善。
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所有临床操作均按照《赫尔辛基宣言》进行，并经上海长海医院伦理委员会批准（批准号：CHEC2022-156）。所有参与者均签署了书面知情同意书。动物实验经长海医学院伦理委员会批准（批准号：CHEC2022-156），并符合国家实验动物护理标准。
临床特征
患者招募与分组
2022年8月至2023年3月，从海军军医大学第一附属医院生殖医学中心及上海中医药大学附属岳阳医院门诊招募了78名被诊断为肾阴虚10证候并接受辅助生殖技术（ART）治疗的不孕症患者。采用SPSS 23.0软件生成随机数，将受试者随机分为对照组和治疗组，每组各39例。
诊断标准
西医诊断参照美国生殖医学会（ASRM）2020年关于卵巢储备指标的委员会意见11。诊断标准包括：FSH ≥ 10 IU/L，雌二醇 ≥ 80 pg/mL，窦卵泡计数（AFC）< 7，以及抗缪勒管激素（AMH）< 0.5-1.1 ng/mL。肾阴虚证的诊断依据《中医妇科学》12及《中医证候诊断疗效标准》13进行。
纳入与排除标准
纳入标准为计划采用拮抗剂方案进行体外受精/卵胞浆内单精子注射-胚胎移植（IVF/ICSI-ET）；既往卵巢反应不良史（< 5枚获卵数）；年龄20–40岁；同时符合卵巢储备功能减退（DOR）及中医证候诊断标准；并签署知情同意书。排除标准包括子宫内膜病变（息肉、结核、不典型增生、癌症）、子宫畸形、合并其他疾病（糖尿病、系统性红斑狼疮）、近期内使用激素治疗（< 3个月内）、既往盆腔手术史、染色体异常或药物过敏。淘汰标准适用于出现方案偏离、发生不良事件、受试者主动退出，或在入组后2周内自然受孕的情况。
用药方法
两组均在月经第2-3天通过经阴道超声和激素检测进行基线评估。对照组采用拮抗剂方案：使用重组FSH或人绝经期促性腺激素，初始剂量为225 IU/天，肌内注射，持续5天，随后根据卵泡生长情况调整剂量。当主导卵泡直径超过12 mm时，开始皮下注射GnRH拮抗剂（0.125 mg/天），并持续至触发排卵。当≥1个卵泡直径达到18 mm，或≥2个达到17 mm，或≥3个达到16 mm时，使用250 µg重组hCG触发排卵，并在34-36小时后进行卵母细胞采集。
治疗组在相同方案基础上加用养精种玉汤（YZD），每日口服2次（早晨和晚上），每日1剂，从月经周期第2-3天开始至触发日。临床方剂组成包括熟地黄12 g、白芍12 g、山茱萸10 g和当归12 g。
观察指标
临床结局包括年龄、体重指数（BMI，计算公式为体重（kg）/身高²（m²））、不孕持续时间、促卵泡激素（FSH）、促性腺激素使用剂量/使用时间、肾阴虚证评分、窦卵泡数量（通过经阴道超声评估，直径为2-9 mm）、获卵数、第二次减数分裂中期（MII）卵母细胞数（在取卵时鉴定）、受精胚胎数、卵裂数、优质胚胎数（根据标准胚胎实验室标准定义）以及临床妊娠率，临床妊娠定义为妊娠6-7周时超声下可见孕囊。
实验动物
此处，30只SPF级雌性Sprague-Dawley大鼠（8周龄，160–200 g）在受控环境条件下（23 ± 2 °C，40%–45%湿度，12小时光照/黑暗循环）适应性饲养，自由摄食饮水 随意摄取 食物和水
药物制备
YZD由30 g地黄、15 g当归、15 g白芍和15 g山茱萸制备而成。将上述药材加水煎煮，经200目滤网过滤后，在70 °C条件下减压浓缩。低、中、高剂量组的最终药液浓度分别为0.34 g/mL、0.68 g/mL和1.35 g/mL，相当于YZD临床剂量的0.5倍、1.0倍和1.2倍。煎剂储存于4 °C条件下。
建模与分组
通过腹腔注射雷公藤多苷（每日40 mg/kg，连续15天）建立DOR模型。将大鼠随机分为空白组（n = 6）、模型组（n = 6）和YZD治疗组（低、中、高剂量组，每组n = 6）。从雷公藤多苷注射第一天开始，每日进行一次灌胃给药（10 mL/kg体重），持续15天。
阴道细胞学
通过阴道脱落细胞学评估动情周期阶段。每天一次（08:00–10:00）使用无菌棉签采集阴道涂片，溶于30 µL生理盐水中，于光学显微镜下以100倍放大倍数进行观察。观察期持续15个连续日。正常动情周期指数定义为在此期间表现出规律性4–5天动情周期的大鼠所占比例。
激素检测
在15天处理期结束时，于麻醉状态下通过心脏穿刺采集全血，室温静置30分钟使其凝固，随后在4 °C条件下以1000 × g 离心15分钟，分离血清。采用ELISA法按照试剂盒说明书测定E2和FSH水平。
卵巢组织学
在安乐死后立即通过手术切除双侧卵巢获取卵巢组织，用冷生理盐水冲洗以去除血液，随后在4 °C条件下用4%多聚甲醛固定24–48小时。组织经梯度乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，并切成4–5 µm厚的切片。切片经苏木精和伊红染色，再经脱水、透明处理后封片。
统计学分析
数据采用 SPSS 26.0 进行分析。正态分布变量以均值 ± 标准差表示，组间比较采用 t 检验；非正态分布变量以中位数（四分位间距）表示，组间比较采用 Mann-Whitney U 检验。分类变量以百分比表示，组间比较采用卡方检验。当 p < 0.05 时，认为差异具有统计学意义。为保持一致性，所有图表分析均采用相同的统计学方法（不再单独描述 Student's t 检验）。
安全与废物处理
聚甲醛、二甲苯和雷公藤苷在经认证的通风橱中操作，操作时佩戴手套、护目镜和实验服；溢出物和受污染的一次性物品收集至贴有标签的危险废物容器中，并按照机构生物安全标准操作程序进行处理。所有涉及聚甲醛、二甲苯和雷公藤苷的操作均在通风橱中进行，并穿戴适当个人防护装备（手套、实验服、护目镜）。化学废物和动物尸体根据机构生物安全指南进行处置。
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临床特征
研究期间，对照组有3名患者因感染新冠病毒退出，1名因肝功能异常被排除，最终剩余35名患者。治疗组中有4名患者因感染新冠病毒退出，35名患者完成了研究。因此，最终共有70名受试者纳入分析。两组在年龄、体重指数（BMI）、不孕持续时间、基础促卵泡激素（FSH）水平、窦卵泡计数（AFC）以及促性腺激素（Gn）使用时间与剂量方面均无显著差异（p > 0.05），表明两组在基线时具有可比性（表1）。
中医证候评分
治疗前，两组之间的证候评分差异无统计学意义（p > 0.05）。治疗后，治疗组的评分显著...
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本研究探讨了养精种玉汤（YZD）作为辅助生殖技术（ART）中卵巢储备功能减退（DOR）辅助治疗的潜在作用。临床研究结果显示，接受YZD联合标准拮抗剂方案治疗的患者，其获卵数和优质胚胎数均显著增加。尽管两组间的妊娠率差异无统计学意义，但YZD组呈现出有利的趋势。这些结果提示，YZD可能通过改善卵泡质量，从而提高ART的治疗效果。卵巢储备功能是决定女性生育潜力和ART成功率的关键因素。目前已有多种药物策略被用于改善DOR患者的卵母细胞发育潜能，例如生长激素（GH）、脱氢表雄酮（DHEA）和辅酶Q10。然而，这些药物常因疗效有限以及可能引发代谢紊乱或皮肤反应等不良反应而受到限制14,15。相比之下，YZD在临床应用中表现出更佳的疗效且不良反应较少16，这与中医理论中“肾阴亏虚导致生育能力下降”的观点相吻合17。本研究结果证实，YZD可改善肾阴虚相关的临床症状，支持其在DOR患者中的治疗潜力。
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作者声明不存在任何竞争利益。
本研究得到中国国家重点研发计划（项目编号：2018YFC1004900）以及养精种玉汤调控卵泡液微生物代谢产物芥酰胺改善大鼠卵巢功能的作用及机制研究（项目编号：2024QN027）的资助
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| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 离心 | 血清分离（1000 × g，15 分钟，4 ℃） °C) | Eppendorf 5810R | 5811 000.012 |
| 棉签（无菌） | 阴道细胞学样本采集 | 江苏康健医疗器械用品 | KJ-MW-01 |
| E2 ELISA检测试剂盒 | 大鼠血清雌二醇定量检测 | Elabscience Biotechnology Inc. | E-EL-0152 |
| FSH ELISA试剂盒 | 大鼠血清FSH定量检测 | Elabscience Biotechnology Inc. | E-EL-R0391 |
| 乙醇（70%）–100%) | 组织学梯度脱水 | 国药集团化学试剂有限公司，中国 | 100092683 |
| 载玻片 &和盖玻片 | 样品固定 | 中国科泰生物技术有限公司 | 7101/1812 |
| 苏木精 && 伊红 | 组织学染色液 | 碧云天生物技术有限公司，中国 | C0105S |
| 光学显微镜 | 组织学与细胞学观察 | 奥林巴斯（通用名称，无商标） | CX23 |
| 石蜡 | 包埋介质 | Leica Biosystems | 39601095 |
| 4% 多聚甲醛 | 组织制备固定液 | Sigma-Aldrich | P6148 |
| 生理盐水（0.9%） | 阴道涂片制备 | 中国国药集团化学试剂有限公司 | 10019318 |
| 斯普拉格–Dawley大鼠 | 实验动物（雌性，8周龄，160–200 g | 北京维通利华实验动物科技有限公司 | SCXK（北京）2024-0011 |
| SPSS 软件 | 统计分析（版本 26.0） | IBM 公司 | RRID:SCR_002865 |
| 透射电子显微镜 | 超微结构观察 | 日本电子株式会社 | JEM-1400Plus |
| 雷公藤多苷 | DOR 大鼠模型的诱导 | 通用供应商（无商标） | TG-001 |
| 二甲苯 | 组织学透明试剂 | 国药集团化学试剂有限公司，中国 | 10023418 |
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