体内共聚焦显微镜在干眼病诊断与管理中的应用：聚焦成像方案与解读

摘要

本文演示了操作方法及其效果 体内 共聚焦显微镜在干眼病诊断与治疗中的应用及疗效研究 体内 共聚焦显微镜，为未来的研究提供基础。

摘要

体内共聚焦显微镜（IVCM）因其无创性和高分辨率而受到广泛关注。该技术能够在细胞水平上对多种与干眼病（DED）相关的 ocular 表面结构进行体内观察和客观定量分析，包括角膜、结膜、睑缘、睑板腺以及毛囊蠕形螨（Demodex）等寄生虫。这一能力有助于眼科医生识别 DED 的特定病因和亚型，从而实现精准诊断、靶向治疗及预后评估。然而，目前仍缺乏标准化的 IVCM 操作与报告规范。熟练掌握眼科专业知识和操作技术对于有效使用该设备并生成高质量报告至关重要。本文详细阐述了针对干眼病患者的 IVCM 检查操作步骤及关键细节，是 JoVE 首个关于 DED 的逐步 IVCM 操作规程。本规程旨在为临床医生提供参考，帮助其避免操作中的低效问题，并持续获取高质量的角膜及眼表图像，以指导临床管理。

引言

由于当地医疗资源有限或患者经济负担较重，干眼症（DED）的临床诊断往往仅关注基本方面（例如裂隙灯显微镜下的观察、主诉眼部干涩和瘙痒）甚至单一指标（例如侵入性泪膜破裂时间、泪液分泌试验或蠕形螨感染）。共聚焦显微镜（IVCM）的应用尚未普及，更不用说其操作流程的标准化。然而，对于配备IVCM设备的眼科机构，作者建议首次就诊患者应接受全面的显微镜检查，以避免漏诊，检查应包括角膜、结膜及睑缘。对于诊断不明确的干眼症病例或需要检测蠕形螨的情况，IVCM尤其适用于提供明确诊断依据。

干眼症（DED）被定义为一种由泪液质量或数量异常以及泪膜稳定性下降引起的慢性眼表疾病。在干眼研讨会II（DEWS II）中，DED被分为五种类型：水样缺乏型干眼（ADE）、蒸发过强型干眼（EDE）、混合型干眼（MDE）、干眼倾向以及临床前期干眼状态¹。Ralene 等人总结了共聚焦显微镜（IVCM）在不同类型干眼中的重要临床应用，包括2017年至2022年期间发表的文献²。近期研究表明，炎症在DED的发病机制中起着关键作用^3,4。特别是树突状细胞（DCs）的密度可能是与全身免疫介导过程相关的DED的良好指标⁵。

方案

检查程序已获得汉口爱尔眼科医院伦理委员会的批准，并已从所有患者处获得知情同意。

注意：患者入选标准包括主诉眼睛干涩、瘙痒的患者，以及前来进行常规眼部检查的个体。患者排除标准包括角膜穿孔或即将发生角膜穿孔的患者、对局部眼用麻醉剂过敏者、年龄过小（例如小于3岁）或过大而无法配合者、睑裂过窄无法容纳眼睑撑开器者、孕妇，以及其他原因无法配合的个体。简要的工作流程图见图2。详细操作步骤如下。

1. 检查前准备

1. 材料准备：共聚焦显微镜（IVCM）设备、角膜接触帽、眼科表面麻醉剂、耦合剂、医用棉签、眼睑撑开器、酒精棉球、酒精容器、抗炎眼药水（图3）。
2. 了解IVCM设备的关键组件（海德堡视网膜断层扫描仪角膜模块（HRT-RCM）），包括调焦旋钮、监控摄像头、注视引导灯、下颌托、前额托、左右眼切换按钮、用于三轴移动HRT-RCM的旋转旋钮、图像采集按钮和脚踏开关，以及配备专用IVCM软件的计算机，并使用耦合凝胶准备IVCM设备。
3. 检查者准备：佩戴口罩，并使用酒精凝胶消毒双手或佩戴一次性手套。
4. 设备消毒：使用酒精棉签擦拭设备的前额托和下颌托。
5. 操作说明：向患者简要说明该检查无痛，以缓解其....

结果

所有IVCM显微图像的采集分辨率为384像素 × 384像素，观察视野为400 µm × 400 µm。当设备正确“归零”后，图像中仅可能出现以下三种情况：i）无任何图像（实验失败）：中心光学区未与目标组织接触。ii）仅出现部分图像（图7）或其他异常情况（图8）（实验失败）：中心光学区与目标组织接触不完全或松动。iii）图像清晰且完整（实验成功）：中心光学区与目标组织实现完全贴合（图9至图17）。因此，关键挑战并不在于区分成功与失败的图像，而在于根据操作要求，确保设备的中心光学区与目标组织之间实现正确的对位和充分接触（图7和图8）。以下提供的图像包括正常的 ocular 表面结构（图9至

讨论

使用关键词进行 PubMed 文献检索 "体内 共聚焦显微镜" 和 "干眼症" （检索于2025年6月）得出 > 300篇出版物。值得注意的是，自2021年以来，每年的发表数量已稳定在每年约40篇论文。IVCM在眼表疾病中的更广泛应用已产生 > 过去二十年（2004–2024年）已有2,000项研究。在临床方面，活体共聚焦显微镜（IVCM）彻底改变了眼表疾病在细胞水平的评估。该技术能够检测亚临床疾病表现，有助于更早诊断和精准干预，这与上述后两类干眼病（DED）高度契合。此外，基于IVCM指导的治疗方案可在客观病情改善时实现循证的药物减量或停药，从而减轻治疗负担及相关社会经济影响。例如，针对睑板腺开口及腺泡阻塞的睑板腺疏通治疗图14 和 图15），针对毛囊蠕形螨感染的抗螨治疗（图14 和 图16），针对炎性细胞增多的抗炎治疗（

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
吸收性棉球	JIAN QI, 中国	http://www.hnjianqi.com	用于制备酒精棉球，小型
酒精凝胶	Li Kang, 上海, 中国	31107904	免冲洗手部消毒凝胶，500ml
卡波姆眼用凝胶	Vidisic, 德国	8187195	无菌眼科凝胶，用作耦合剂，10g
角膜接触帽（TomoCap）	Heidelberg, 德国	18829	光学介质，用于无菌接触角膜
眼睑拉钩	Asicon, 中国	6102A	用于撑开眼睛
Heidelberg Eye Explorer 软件	Heidelberg, 德国	Version 1.5.2.0	IVCM 设备配套软件
IVCM 设备	Heidelberg, 德国	HRT-?,08398	检查用主要设备
医用棉签	Esound Med, 中国	www.e-soundmed.com	用于清洁患者眼部及辅助撑开眼睛，10cm
75% 医用酒精	HUICHANG, 中国	www.huichang888.cn	用于制备酒精棉球，75%±5%，500ml
0.4% 盐酸奥布卡因滴眼液	Santen, 日本	http://www.santen.co.jp	眼科表面麻醉剂，0.4% (0.5ml: 2mg)
妥布霉素滴眼液	TOBREX, 比利时	8453824	抗炎滴眼液，0.3% (5ml: 15mg)