本研究旨在探讨急性力竭性运动导致的肌腱-骨连接处超微结构变化及其作用机制。急性力竭性运动可在肌腱-骨连接处诱发微损伤，并短暂激活内质网应激及其介导的凋亡信号通路。然而，这些微损伤和内质网应激在运动后可逐渐恢复。
需要JoVE订阅才能观看此内容。 请登录或开始免费试用
本研究旨在探讨急性力竭性运动导致的肌腱-骨连接处超微结构变化及其作用机制。急性力竭性运动可在肌腱-骨连接处诱发微损伤，并短暂激活内质网应激及其介导的凋亡信号通路。然而，这些微损伤和内质网应激在运动后可逐渐恢复。
运动引起的肌腱-骨连接处（附着点）微损伤可能导致肌腱病。研究急性力竭性运动后附着点内部的超微结构变化及其机制，有助于加深对肌腱病的理解，并为临床治疗提供指导。本研究将36只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为两组：对照组和力竭性运动组。力竭性运动组根据运动后时间进一步细分为五个亚组：0 h、6 h、12 h、24 h和48 h。采用苏木精-伊红染色和电子显微镜技术观察跟腱-骨连接处的组织变化。通过免疫组织化学（IHC）方法定量检测附着点处内质网应激（ERS）相关蛋白GRP78、CHOP和Caspase-12的表达水平。急性力竭性运动后，进行力竭运动的大鼠肌腱-骨连接处出现显著的结构改变。软骨细胞和胶原纤维表现出明显的超微结构变化，提示存在内质网应激。ERS相关蛋白水平在运动后立即升高，并在6 h达到峰值；随后在12 h开始下降，至48 h恢复至基线水平。综上所述，急性力竭性运动可在大鼠肌腱-骨连接处诱发微损伤及内质网应激，但未导致不可逆损伤。及时治疗和修复这些微损伤可防止过度损伤及肌腱病的发生。
跟腱病是一种由踝关节频繁过度使用损伤引起的常见临床病症。该疾病以肌腱肿胀、疼痛和功能障碍为特征。在老年人和运动员中更为常见，尤其是跑步者和跳跃者。跟腱病可分为非插入性跟腱病和插入性跟腱病。非插入性跟腱病影响肌腱在骨性附着点上方2至6厘米的区域，而插入性跟腱病则影响肌腱与骨骼的连接处1。此外，非插入性跟腱病多见于超重、年长且活动较少的人群，而插入性跟腱病则更倾向于发生在活动量较大的人群中1。
肌腱-骨连接处是指肌腱插入骨骼的部位，其组织结构从肌腱组织逐渐过渡到骨组织，包括未钙化的纤维软骨和钙化的纤维软骨2。这种过渡实现了由柔软且富有弹性的肌腱组织向坚硬骨组织的转变。从工程学角度来看，该区域起到锚定点的作用，传递肌肉力量以促进关节运动3,4。因此，该区域是应力集中的部位，在运动中常因过度使用而发生损伤。
临床研究主要集中在非插入性肌腱病，而对肌腱-骨连接处的插入性肌腱病关注较少2。研究表明，过度使用负荷会导致肌腱内胶原结构紊乱和断裂、脂肪组织浸润以及新生血管形成。同时还会引起未钙化和钙化纤维软骨区域的纤维软骨细胞增生、软....
访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。
所有动物实验均按照四川中医药高等专科学校科学技术部门制定的实验动物伦理标准进行（批准号：2023DS01）。所用试剂和设备列于材料表中。
1. 实验设计与操作步骤
访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。
如图2A所示，在对照组中，肌腱-骨连接处的软骨细胞和胶原纤维细胞排列规则，纤维软骨与矿化纤维软骨之间存在一条平滑的蓝色分界线，称为潮线（黄色箭头）。在力竭运动组中，肌腱-骨连接处发生了超微结构改变，表现为软骨细胞增多（绿色圆圈）、胶原纤维变薄和断裂（蓝色箭头），以及潮线的形态改变，呈现为抬高或不规则的蓝色线条，形似“火焰”或闭合环状结构（红色箭头）。这些变化在运动后0 h和6 h最为明显（图2B、C）。然而，在恢复期（运动后12 h、24 h和48 h）这些超微结构改变逐渐恢复（图2D-F）。
如图所示 图3A 和 .......
访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。
肌腱-骨连接处，也称为附着点或附着部位，允许肌腱插入骨骼，是韧带和肌腱附着于骨骼时应力集中的部位4。作为锚定点，它促进踝关节运动，将小腿肌肉收缩产生的力传递至足部的韧带和肌腱，并参与踝关节和足部的运动2。肌腱-骨连接处由四个连续区域组成：肌腱、纤维软骨、矿化纤维软骨和骨骼2,3。在纤维软骨向矿化纤维软骨过渡的区域，存在一条被称为潮线（tidemark）的蓝色线条4,11,12,13。过度使用损伤、反复的机械刺激以及累积性微损伤可损害肌腱-骨连接处，导致附着点病（enthesopathies）。在附着点病中，潮线明显上移，变得隆起且不规则；肌腱纤维发生扭曲，软骨细胞积聚，细胞.......
访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。
作者无任何利益冲突需要披露。
作者谨此衷心感谢自然科学基金（项目编号：23ZRYB03）、研究与创新团队项目（TD-2022-04）、四川中医药高等专科学校临床医学科教创新团队，以及四川省中医药管理局资助的2025年研究项目（25MSZX329）所提供的支持。
....访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 2% 多聚甲醛-2.5% 戊二醛溶液 | 中国MKBio | MM1515 | 电子显微镜扫描 |
| 抗Caspase-12抗体 | 杭州华安生物技术有限公司 | HA500144 | 免疫组织化学检测 |
| 抗CHOP抗体 | 杭州华安生物技术有限公司 | ET1703-05 | 免疫组织化学检测 |
| 抗GRP78抗体 | 杭州华安生物技术有限公司 | ER1706-50 | 免疫组织化学检测 |
| 生物显微镜检查 | Motic Industrial Group Co., Ltd. 中国 | BA210Digital | 用于肌腱-骨连接组织学的生物显微镜检查 免疫组织化学检测 |
| CD-斯普拉-道利大鼠 | 北京维通利华实验动物技术有限公司 | SCXK2021-0007 CD | |
| 柠檬酸缓冲液抗原修复溶液 | 中杉金桥-生物，中国 | ZLI-9065 | 免疫组织化学检测 |
| DAB | 中杉金桥-生物，中国 | ZLI-9018 | 免疫组织化学检测 |
| EDTA | 国药集团化学试剂有限公司 | 10009717 | 苏木精-伊红染色 |
| Epox 812 | 国药集团化学试剂有限公司 | XW00000020 | 电子显微镜扫描 |
| 乙醇 | 国药集团化学试剂有限公司 | 10009218 | 苏木精-伊红染色 |
| GraphPad Prism 8 | GraphPad Software, Inc. | GraphPad Prism 8 | 统计分析 |
| H2O2 | 国药集团化学试剂有限公司 | 011092708 | 免疫组织化学检测 |
| Image-Pro Plus 6.0 | Media Cybernetics Co., Ltd. USA | Image-Pro Plus 6.0 | 免疫组织化学检测 |
| 多聚甲醛 | 国药集团化学试剂有限公司 | 20230408 | 苏木精-伊红染色 免疫组织化学检测 |
| PBS | 中杉金桥-生物，中国 | ZLI-9062 | 电子显微镜扫描 |
| 透射电子显微镜 | 日本电子光学实验室有限公司 | JEM-1400Flash，日本 | 电子显微镜扫描 |
| 大鼠跑步机 &和小鼠 | BioMed Easy Technologies Co., Ltd 中国 | SA101 | 在跑步机上进行力竭性运动 |
| 二甲苯 | 国药集团化学试剂有限公司 | 10023418 | 苏木精-伊红染色 |
访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。