受体中的血管重建，包括肝上腔静脉（SHIVC）、门静脉和肝下腔静脉（IHIVC），是小鼠原位肝移植成功的关键步骤。本文提供了在小鼠肝移植模型中进行SHIVC和IHIVC重建的缝合技术及操作要点。
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本文内容
摘要
摘要
利用动物模型开展的转化研究对于解决器官移植中的临床问题至关重要。尽管小鼠原位肝移植（LT）是研究肝再生机制、缺血-再灌注损伤以及LT术后免疫反应的有效工具，但该手术的技术难题限制了其广泛应用。成功实施小鼠原位肝移植的关键在于受体的血管重建，包括肝上段下腔静脉（SHIVC）、门静脉（PV）和肝下段下腔静脉（IHIVC）。除了上述血管重建本身的技术难度外，无肝期必须控制在20分钟以内，这进一步增加了手术挑战性。虽然可采用套管法进行门静脉重建，但在无肝期内重建肝上段下腔静脉则需要一种安全且快速的缝合技术。对于肝下段下腔静脉的重建，套管法和缝合法均可应用，但缝合法在供体手术及离体准备阶段所需时间更短，且能维持比套管法更大的血管管腔。本文旨在提供采用缝合技术进行SHIVC和IHIVC重建的操作指南，以促进小鼠原位肝移植的顺利实施。
引言
随着外科技术、免疫抑制药物和重症监护医学的进步，器官移植已成为终末期器官疾病的标准治疗方法。目前，肝移植（LT）是治疗终末期肝病和某些肝恶性肿瘤的唯一根治性手段。利用动物模型开展的转化研究对于解决肝移植中的临床问题至关重要。由于小鼠模型中存在多种基因修饰动物，小鼠原位肝移植是研究肝再生、缺血-再灌注损伤以及肝移植后免疫反应机制的重要工具1。然而，由于该手术技术难度较高，限制了其可行性，目前开展此类模型研究的科研团队仍然有限2,3,4,5,6,7,8,9,10。
小鼠原位肝移植（LT）最早由Qian等人于1991年首次报道2。该手术方法借鉴了大鼠原位肝移植技术，主要包括三个步骤：供体手术....
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方案
所有动物实验均经京都大学动物实验委员会批准，并依照京都大学动物保护指南进行。小鼠手术在通过异氟烷吸入实施的全身麻醉下进行。麻醉诱导时，蒸发器设定为3%异氟烷，氧气流速为1 L/min。开腹后，将异氟烷浓度降低至1%以维持麻醉状态。本方案中使用的显微外科器械，包括我们先前发表的血管重建方案13中所用的器械，均列于材料表中。进行小鼠原位肝移植13需使用显微镜。使用加热垫以维持小鼠体温13。
1. 动物
- 使用体重为25-30 g的小鼠。
注意：尽管可使用体重为20-35 g的小鼠，但约25 g的小鼠适合作为供体和受体。由于年龄和肝脂肪变性会影响肝移植（LT）的结果，应根据实验目的选择合适的小鼠。
2. 供体肝脏中肝内肝静脉的解剖
- 从周围组织中分离下腔静脉（IHIVC）。如有需要，使用电凝闭合腰静脉。
- 清除 IHIVC 上的脂肪，暴露血管壁。
- 在右肾动脉和右肾静脉上方解剖 IHIVC（图 1）。
注意....
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结果
当使用无延长冷缺血时间的正常肝脏移植物成功完成血管重建时，小鼠受体通常在30分钟内从麻醉中恢复。该手术的操作成功率若超过>90%，可视为技术娴熟。我们分析了一名外科医生在肝移植术后恢复率（从麻醉中恢复）、无肝期（从门静脉夹闭至开放血流）以及总再灌注时间（从门静脉夹闭至肝后下腔静脉血流开放）方面的学习曲线。结果显示，需完成60余例手术方可获得满意的术后恢复率，而需80余例手术才能将无肝期稳定控制在20分钟以内，并将总再灌注时间维持在约30分钟（图3A−C）。
随后，我们评估了两位技术娴熟的外科医生采用缝合技术和套管技术进行下腔静脉（IHIVC）重建的手术效果。采用缝合技术的IHIVC直径显著大于采用套管技术的直径（图4A）。此外，在IHIVC重建过程中，缝合技术与套管技术的总再灌注时间相当（图4B）。相比之下，在供体手术操作时间和离体.......
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讨论
本文记录了在小鼠原位肝移植中使用缝合技术重建下腔静脉（SHIVC）和肝上下腔静脉（IHIVC）的详细操作方法。血管重建，尤其是SHIVC吻合，需要在无肝期进行缝合操作，是成功实施小鼠肝移植的关键技术。除了安全可靠的缝合技术外，快速缝合也十分必要，以确保无肝期控制在20分钟以内，从而在小鼠原位肝移植中获得可重复的实验结果2,7,11。
将手术台逆时针旋转90°（左利手术者可顺时针旋转）有助于为前壁缝合提供充足的操作空间。或者，术者也可选择不旋转手术台，从前方向后方直接缝合前壁。由于两种方法的缝合时间无差异，术者可根据自身技术熟练程度和个人习惯选择任一方法。
袖套法和缝合法均可用于重建下腔静脉（IHIVC）5,11,
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披露
作者声明无利益冲突。
致谢
本工作由日本促进科学协会（资助编号：24K19356）提供支持。
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材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 10-0 微型缝合线 | AROSurgical Instruments Corporation | T4A10N07 | |
| 16 G 静脉导管 | TERUMO | SR-FF2032 | IHIVC 套管 |
| 20 G 静脉导管 | TERUMO | SR-FF1651 | PV 套管 |
| 8-0 编织丝线 | Natsume Seisakusho | CR9-80B2 | 8-0 丝线 |
| Belzer UW 冷保存液 | Astellas | 器官保存液 | |
| 小动脉夹 | B BRAUN | FB329R | 小动脉夹 |
| 小动脉夹 | Natsume Seisakusho | C-42-S-2 | 用于 SHIVC 阻断 |
| C57BL/6 小鼠 | Oriental Bio Service | ||
| 镊子 | Fine Science Tools | 11231-30 | |
| 异氟烷吸入溶液 | Viatris | 麻醉剂 | |
| 微钝头尖端 0.1 mm × 0.06 mm | Fine Science Tools | 11253-20 | 直型显微镊 |
| 显微剪刀 | Muranaka Medical Instruments | 451-609-13 | |
| 显微止血夹 | Fine Science Tools | 18055-03 | 用于 IHIVC 阻断 |
| 显微止血夹 | Fine Science Tools | 18055-04 | 用于 PV 阻断 |
| 带锁显微止血夹施加器 | Fine Science Tools | 18056-14 | 血管夹施加器 |
| 显微止血夹 | Fine Science Tools | 18055-4 | 血管夹 |
| 显微缝合镊 | Aesculap | FD281R | |
| 显微止血夹施加器 | Fine Science Tools | 18056-14 | |
| 持针器 | Aesculap | FD231R | |
| 11 号备用刀片 | FEATHER Safety Razor | 11 | 刀片 |
| 眼科剪，圆柄 | B BRAUN | FD103R | 显微剪刀 |
| 塑料矩形容器 | Daiso | 长 10 cm，宽 15 cm，高 6 cm | |
| SuperGrip 尖端 | Fine Science Tools | 00649-11 | 弯型显微镊 |
| SZX7 | Olympus | SZX7 | 显微镜 |
| Vannas 剪刀 | World Precision Instruments | 501232 | |
| 血管夹 | BEAR Medic Corporation | TKF-1-30 | 用于肝移植物的 IHIVC 阻断 |
参考文献
- Yokota, S., Yoshida, O., Ono, Y., Geller, D. A., Thomson, A. W. Liver transplantation in the mouse: Insights into liver immunobiology, tissue injury, and allograft tolerance. Liver Transpl. 22 (4), 536-546 (2016).
- Qian, S. G., Fung, J. J., Demetris, A. V., Ildstad, S. T., Starzl, T. E.
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