本研究探讨了Calceolarioside A在胶质瘤中的治疗潜力，证实其可通过抑制PI3K/Akt信号通路并促进Nrf2降解，从而诱导铁死亡并抑制肿瘤进展 体外 和 体内.
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本研究探讨了Calceolarioside A在胶质瘤中的治疗潜力，证实其可通过抑制PI3K/Akt信号通路并促进Nrf2降解，从而诱导铁死亡并抑制肿瘤进展 体外 和 体内.
本方案展示了用于研究Calceolarioside A（CaA）对胶质瘤模型中铁死亡诱导作用及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/核因子红系2相关因子2（Nrf2）通路调控作用的实验流程。实验包括在U251和U87人胶质瘤细胞系中进行的一系列基于细胞的检测，以评估CaA处理后的细胞活力、增殖能力及化学敏感性。通过检测活性氧（ROS）、谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）和不稳定铁水平，以及通过Western blot检测铁死亡相关蛋白（如谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）、半胱氨酸/谷氨酸反向转运蛋白亚基（xCT）和铁蛋白）的表达，来评估与铁死亡相关的改变。为评估通路的参与情况，本方案详细描述了用于检测Nrf2表达及其泛素化的qRT-PCR、Western blot和基于免疫共沉淀的实验方法。还包括Nrf2过表达实验，以验证其在铁死亡调控中的作用。此外，本方案展示了小鼠异种移植模型的应用，即将U87细胞皮下接种后，通过腹腔注射给予CaA，以评估体内肿瘤生长情况及毒性。通过对主要器官进行组织学分析，评估系统的安全性。同时，采用分子对接方法预测CaA与PI3K p110α亚基（PIK3CA）之间的直接结合。上述实验步骤共同构建了一个可重复的研究框架，用于探究铁死亡机制及天然化合物在胶质瘤研究中的治疗潜力。
胶质瘤，尤其是高级别的胶质母细胞瘤，是脑肿瘤中最致命的类型之一，其特征为增殖迅速、治疗抵抗性强以及预后不良1。近年来，多种抗胶质瘤药物已被探索，包括替莫唑胺等传统化疗药物以及姜黄素2、白藜芦醇3和表没食子儿茶素没食子酸酯4等多种天然化合物。这些药物通过多种机制发挥作用，包括诱导细胞凋亡、抑制血管生成以及调节氧化应激通路。然而，许多此类化合物仍存在生物利用度低或作用机制表征不完整等局限性。这凸显了建立全面方法学的重要性，不仅需确认抗肿瘤活性，还需系统解析其潜在的药理机制。建立此类机制性研究流程，对于加速新型抗胶质瘤化合物从发现到临床前验证的开发进程尤为关键。
为支持这一目标，越来越多的研究目前将先进的计算工具与实验技术相结合，以提高对作用机制的解析能力5,6。基于结构的药物设计和人工智能（AI）模型——如 AlphaFold3 和分子对接——正以前所未有的速度和准确性促进有前景的药物-靶点相互作用的发现7,8。这些工具通过在实验室验证前预测结合亲和力并识别潜在的分子靶点，从而对实验方法形成有力补充。与此同时，基于通路的功能性检测、活细胞成像以及高分辨率蛋白质组学技术的发展，使研究人员能够从多个调控层面评估新化合物对细胞的影响，包括氧化应激反应、信号转导级联以及铁死亡等细胞死亡方式9,10,11。
在参与胶质瘤生物学的信号通路中，磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）通路和核因子红系2相关因子2（Nrf2）通路因其在肿瘤生长、氧化还原稳态及治疗耐药性中的作用而备受关注12,13。PI3K/Akt信号通路促进胶质瘤细胞的存活、增殖和代谢适应，而Nrf2则作为抗氧化反应的主要调控因子，抑制铁死亡（ferroptosis）的发生14。这些通路的持续活化有助于肿瘤逃避治疗，使其成为药物干预的理想靶点15。传统的通路检测方法包括利用Western blot检测总蛋白及其磷酸化蛋白水平，以及采用qRT-PCR分析基因表达。然而，对Nrf2信号通路的深入研究还需额外的实验手段，以评估蛋白稳定性、核转位以及泛素化等翻译后修饰。这些多层面的检测策略对于理解特定化合物如何干扰或增强氧化还原调控及铁死亡控制至关重要。
Calceolarioside A（CaA）是一种羟基肉桂酸衍生物，可通过同时抑制PI3K/Akt信号通路并促进Nrf2的蛋白酶体降解，从而增强细胞铁死亡敏感性，具有双重作用机制。相较于作用于抗氧化防御下游的现有化合物（如erastin或RSL3），这种双靶向策略可能在可重复性和机制深度方面更具优势。本实验方案提供了一套整合性研究方法，用于探究CaA的药理作用机制，包括采用分子对接技术鉴定PI3K结合位点，利用免疫印迹和免疫共沉淀检测Nrf2的表达及其泛素化水平，以及检测铁死亡相关标志物，如活性氧（ROS）、谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）。此外，通过异种移植小鼠模型评估CaA的治疗效果及系统性安全性。该综合实验流程为研究抗肿瘤药物的作用机制提供了可重复且信息丰富的平台，尤其强调信号通路调控与细胞死亡调控的整合分析。
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细胞培养与处理
小鼠HT22神经元细胞及人胶质瘤U87和U251细胞系在添加了10%胎牛血清和4 mM L-谷氨酰胺的杜氏改良伊格尔培养基（Dulbecco's Modified Eagle Medium）中培养，培养条件为37 °C、5% CO₂的湿润环境。为确保实验的一致性，所有细胞处理步骤均进行了标准化，并在此描述。本部分概述了各处理组所采用的具体条件及其相应的下游检测方法。
CaA处理：
HT22细胞用不同浓度的CaA（0、0.1、0.5、1、10、50、100、250和500 µM）处理72小时。U87和U251胶质瘤细胞在大多数实验中用5、20或50 µM的CaA处理24小时，或在时间过程研究中用50 µM的CaA分别处理0、6、12或18小时。这些处理用于以下分析：胱氨酸/谷氨酸逆向转运体亚基（xCT）、谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）、铁蛋白（FTH1）、谷氨酰胺酶以及PI3K/Akt/雷帕霉素靶蛋白（mTOR）/真核起始因子4B（EIF4B）（总蛋白及磷酸化水平）的蛋白质印迹分析；Nrf2和Kelch样ECH相关蛋白1（Keap1）的实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测；使用2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯（DCFH-DA）检测活性氧（ROS）；谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）的定量；基于FerroOrange的Fe2+检测；5-乙炔基-2′-脱氧尿苷（EdU）增殖实验；克隆形成实验；3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）细胞活力检测。
Liproxstatin-1 (Lip1) 共同处理：
在加入 50 µM CaA 前，细胞先用 50 nM Lip1 预处理 2 小时。这些条件用于 MTT 实验（0、24、48、72 小时）；集落形成实验；EdU 实验；Annexin V/PI 凋亡实验（有或无 20 nM 顺铂）。
MG132 共同处理：
细胞单独使用 10 µM MG132 或联合 50 µM CaA 处理 24 小时。用于蛋白质印迹检测 Nrf2 蛋白的稳定性（总蛋白和核蛋白）；以及用于免疫共沉淀（IP）实验检测 Nrf2 和 Keap1 的泛素化水平。
顺铂联合处理：
细胞单独用 20 nM 顺铂或与 20 µM CaA 联合处理 24 小时。这些处理用于 Annexin V/碘化丙啶（PI）细胞凋亡检测。
Nrf2 过表达：
使用转染试剂将细胞转染2.5 µg Nrf2 过表达质粒或空载体，持续18小时，随后用50 µM CaA处理24小时。该条件用于xCT、GPX4、FTH1和谷氨酰胺酶的蛋白质印迹分析，以及活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）检测和FerroOrange染色检测细胞内铁含量。
工作流程图（补充图 S1）总结了上述实验条件及相应的分析方法。该图以可视化方式将每种处理方案与其特定的下游检测方法相对应，以提高清晰度和可重复性。
评估细胞活力
采用常规的 MTT 比色法评估细胞活力，方法如前所述16。将 HT22、U251 和 U87 细胞接种至 96 孔培养板中，过夜培养以使细胞贴壁。完成处理后，向每孔加入 15 µL MTT 溶液，并在 37 °C 下孵育 4 小时。随后弃去培养基，每孔加入 150 µL 二甲基亚砜（DMSO）以溶解生成的甲臜结晶。使用酶标仪在 490 nm 处测定吸光度。吸光度值越高，表明细胞活力越强；吸光度降低则提示存在细胞毒性效应。
EdU 掺入实验
为评估 DNA 合成和细胞增殖，采用 EdU 成像试剂盒进行 EdU 掺入实验，方法如前所述17。简言之，将 U251 和 U87 胶质瘤细胞接种于 24 孔板中。处理后，细胞与 EdU（终浓度为 10 µM）共同孵育，并继续培养 24 小时。孵育结束后，使用 4% 多聚甲醛固定细胞，随后用 0.5% Triton X-100 进行透化处理，并根据试剂盒说明书进行染色。通过荧光显微镜定量 EdU 阳性细胞（增殖细胞）的百分比，并以总 4′,6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）染色的细胞核数进行归一化处理。
克隆形成实验
进行克隆形成实验时，将U251和U87胶质瘤细胞以低密度（每皿500个细胞）接种于3.5 cm培养皿中。处理后，更换为新鲜的无药物培养基，继续培养14天以促进克隆形成，每三天更换一次培养基。形成的克隆随后用4%多聚甲醛固定，0.1%结晶紫染色，并在显微镜下人工计数。直径超过75 µm的细胞簇被计为克隆。每个实验均设三个重复，并独立重复三次。本实验遵循公认的评估长期增殖能力的实验方案18。克隆应呈现为致密的圆形细胞簇；克隆数量减少或体积变小提示增殖能力下降。
评估细胞凋亡
按照先前所述方法，使用 FITC-Annexin V 凋亡检测试剂盒评估细胞凋亡16。U87 和 U251 胶质瘤细胞用 20 nM 顺铂处理，同时加入或不加入 20 µM CaA，处理 24 小时后进行染色。在涉及铁死亡抑制的实验中，细胞先用 50 nM Lip1 预处理 2 小时，随后与 20 µM CaA 和 20 nM 顺铂共同处理额外 24 小时。经过指定处理后，细胞被收集（300 × g，5 分钟），并根据制造商说明书用 Annexin V-FITC 和 PI 染色。染色后，样品通过流式细胞仪进行检测。数据采集使用 FL1（FITC）和 FL2（PI）通道，并设置补偿以最小化光谱重叠。随后计算 Annexin V 阳性细胞的比例，以确定凋亡程度。
Western blot 分析
Western blotting 按照既定的实验流程进行19,20。简言之，在指定处理后，使用含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的 RIPA 缓冲液裂解细胞，并通过 Bradford 法测定蛋白浓度。在评估 Nrf2 亚细胞分布的实验中，根据制造商说明书，使用商用核蛋白提取试剂盒提取核蛋白和胞质蛋白。
每个样品取总共 40 µg 蛋白质，在 10% SDS-PAGE 凝胶上进行分离，随后转移至 PVDF 膜上。用含 0.1% Tween-20 的 PBS（PBST）配制的 5% 脱脂牛奶在室温下封闭膜 1 小时，然后在 4 °C 下与一抗孵育过夜。洗涤后，在 37 °C 下加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗（1:5,000）孵育 1 小时，使用增强型化学发光（ECL）系统检测信号。
使用甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）作为上样对照，检测了xCT、谷氨酰胺酶、GPX4和FTH1的表达水平。磷酸化蛋白（p-PI3K、p-Akt、p-mTOR和p-EIF4B）的定量以其对应的总蛋白水平为参照，而总蛋白则以GAPDH进行归一化。核内Nrf2的表达水平则以Lamin B为参照进行归一化。预期结果包括在CaA处理的细胞中，Nrf2以及p-PI3K/Akt/mTOR/EIF4B呈剂量和时间依赖性降低，同时铁死亡相关标志物表达下调。
进行泛素化检测时，细胞用MG132（10 µM）处理，同时或不同时加入CaA（50 µM），处理时间为24小时。裂解细胞后，使用抗Nrf2或抗Keap1抗体对蛋白复合物进行免疫沉淀；以正常兔IgG作为阴性对照。随后用抗泛素抗体探测免疫沉淀物以检测泛素化形式，同时检测总裂解物中的Nrf2和Kelch样ECH相关蛋白1（Keap1）水平，以确认上样量。
RNA提取与定量实时聚合酶链式反应（qRT-PCR）
RNA 提取和 qRT-PCR 按照标准方案进行21简而言之，U87和U251胶质瘤细胞在有或无50 µM CaA的条件下处理不同时间（6 h和18 h）。提取总RNA并通过逆转录反应合成cDNA。使用SYBR Green qPCR Master Mix在实时PCR平台上进行定量实时荧光PCR（qRT-PCR）。采用2-ΔΔCt法计算基因的相对表达量。所用Nrf2、Keap1及内参基因GAPDH的引物序列如下：
Nrf2 正向引物，5′-CACATCCAGTCAGAAACCAGTGG-3′；
Nrf2 反向引物，5′-GGAATGTCTGCGCCAAAAGCTG-3′
Keap1 正向引物，5′-CAACTTCGCTGAGCAGATTGGC-3′；
Keap1 反向引物，5′-TGATGAGGGTCACCAGTTGGCA-3′
GAPDH 上游引物，5′-CGGAGTCAACGGATTTGGTCG-3′；
GAPDH 下游引物，5′-AGCCTTCTACATGGTGGTGAAGAC-3′
Nrf2 转导
采用基于脂质的转染试剂，将 U251 和 U87 胶质瘤细胞瞬时转染 Nrf2 过表达质粒或相应的空载对照质粒；该操作基于常规的瞬时转染方法22。简言之，将细胞以每孔 3 × 10⁵ 个细胞的密度接种于 6 孔板中，过夜培养，使转染时细胞融合度达到约 70–80%。每孔中，将 2.5 µg 质粒 DNA 溶于 125 µL 低血清培养基中，并与 5 µL 转染试剂混合；另取 3.75 µL 转染试剂溶于另外 125 µL 低血清培养基中。将稀释后的 DNA 溶液与转染试剂溶液混合，轻轻混匀，在室温下孵育 10–15 分钟，以形成转染复合物。将所得的转染复合物（总体积 250 µL）逐滴加入含细胞的新鲜完全培养基的各孔中。
在37 °C的CO₂培养箱中孵育18小时后，将转染培养基更换为新鲜的培养基。随后对细胞进行后续实验，包括蛋白质印迹、活性氧分析、MDA/GSH定量以及铁积累研究。本方案遵循广泛认可的瞬时基因表达操作流程，可在转染后24–48小时内实现稳定的Nrf2表达。
细胞内铁含量的测定
使用荧光探针FerroOrange检测细胞内Fe2+水平。简言之，将U251和U87胶质瘤细胞接种于24孔板中，并用不同浓度的CaA（5、20和50 µM）处理。为评估Nrf2过表达对铁死亡的影响，将U87和U251细胞转染Nrf2表达质粒或空载体。18小时后更换培养基，并用50 µM CaA处理细胞24小时。随后，将细胞置于无血清培养基中，加入1 µM FerroOrange，在37 °C孵育30分钟后再进行分析。孵育结束后，洗涤细胞，并使用TRITC滤光片组（激发波长约543 nm，发射波长560–600 nm）在荧光显微镜下观察，橙色荧光强度增加表明细胞质中可螯合态Fe2+水平升高。该方法改编自已建立的基于荧光探针的铁检测方法23。
谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）的测定
根据标准化评估方案测定细胞内GSH和MDA水平，以评估氧化应激状态24。简言之，将U251和U87胶质瘤细胞接种于24孔板中，并用不同浓度的CaA（5、20和50 µM）处理。为评估Nrf2过表达对铁死亡的影响，将U87和U251细胞转染Nrf2表达质粒或空载体。18小时后，更换培养基，并用50 µM CaA处理细胞24小时。随后，用RIPA裂解液裂解细胞，并使用BCA蛋白定量试剂盒测定总蛋白浓度。然后按照试剂盒制造商的说明书，采用商用检测试剂盒分析GSH和MDA含量。
活性氧检测
根据既定方案，采用荧光探针 DCFH-DA 检测细胞内活性氧（ROS）的生成25。简言之，将 U251 和 U87 胶质瘤细胞接种于 24 孔板中，并用不同浓度的 CaA（5、20 和 50 µM）处理。为评估 Nrf2 过表达对铁死亡的影响，将 U87 和 U251 细胞转染 Nrf2 表达质粒或空载体。18 小时后，更换培养基，并用 50 µM CaA 处理细胞 24 小时。随后，加入 5 µM DCFH-DA，在 37 °C 孵育 1 小时，接着用 PBS 洗涤以去除未结合的染料。使用配备 FITC 滤光片（激发波长 488 nm，发射波长 525 nm）的倒置荧光显微镜观察荧光信号，并采集图像用于分析。绿色荧光强度的增加表明细胞内 ROS 水平升高。
动物实验
所有动物实验均严格遵循美国国立卫生研究院《实验动物护理和使用指南》中的建议进行。实验方案经潍坊市人民医院机构动物护理与使用委员会批准，批准编号为[2025SDL579]。为建立胶质瘤异种移植模型，将2 × 106个U87细胞重悬于0.2 mL磷酸盐缓冲液（PBS）中，并接种于4周龄雄性BALB/c裸鼠左侧 flank 皮下。让肿瘤生长7天后，将小鼠随机分为三组（每组n = 8）：未处理对照组、CaA处理组（2.5 mg/kg）以及CaA（2.5 mg/kg）联合Lip1（10 mg/kg）处理组。治疗通过每日腹腔注射给药，连续进行14天。每3天使用游标卡尺测量肿瘤尺寸，并采用公式计算肿瘤体积：体积 = （长度 × 宽度²）/ 2。第21天时，处死所有小鼠，切除肿瘤并拍照，用于后续分析。
RNA测序与KEGG通路分析
通过RNA测序分析CaA暴露后转录水平的变化。测序前，使用微量紫外-可见光分光光度计和基于毛细管的电泳系统确认RNA完整性。使用HISAT2将高质量测序读段比对至人类参考基因组（GRCh38），并以FPKM值量化基因表达水平。采用DESeq2鉴定差异表达基因（FDR < 0.05，|log₂FC| ≥ 1），并通过KEGG通路分析评估功能富集情况（校正后P值 < 0.05）。
分子对接分析
采用分子对接方法预测CaA与PI3K/Akt信号通路之间的相互作用。人源PI3K催化亚基p110α（PIK3CA）的晶体结构取自蛋白质数据库（PDB ID: 8BFU）。CaA的结构从PubChem获取，并使用分子建模软件进行能量最小化处理。利用分子对接预处理软件，从PIK3CA结构中移除所有水分子和非必需配体，并添加氢原子。在PIK3CA活性位点周围（基于已知结合位点坐标）定义对接网格，随后使用对接算法进行对接计算。根据结合亲和力（kcal/mol）筛选出得分最高的CaA结合构象，并分析其关键相互作用。通过分子可视化软件及二维相互作用图谱工具，对蛋白-配体相互作用（如氢键和疏水接触）进行可视化展示。
安全与废物处理
所有涉及化学试剂（如DMSO、荧光染料（DCFH-DA、FerroOrange）和固定剂）的实验均在通风橱中进行，并佩戴适当个人防护装备（PPE），包括手套和护目镜。由于DMSO和荧光探针可穿透皮肤并具有潜在细胞毒性，操作时需格外小心。受污染的材料，包括移液器吸头、培养板和手套，均应丢弃至指定的危险废物容器中。动物组织和尸体被视为生物危害性废物，须根据机构生物安全规定及当地环境指南进行焚烧或高压灭菌处理。
统计学分析
所有结果均以均值 ± 标准差（SD）表示。两组之间的差异采用双尾 Student t 检验进行评估。对于涉及多组的分析，则采用单因素方差分析（ANOVA），随后进行适当的事后比较（如 Tukey 检验）。以 p 值小于 0.05 作为具有统计学意义的判断标准。
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U251和U87细胞的增殖抑制及化疗敏感性增强 体外 由 CaA
图1A 展示了CaA的结构。我们首先采用MTT法评估了CaA对正常小鼠HT22神经元细胞以及人胶质瘤U251和U87细胞的细胞毒性作用。与未处理组（0 µM CaA）相比，在72 h内，CaA在浓度低于100 µM时对HT22细胞活力的影响极小图1B）。然而，用 250 µM 和 500 µM CaA 处理 72 小时后，HT22 细胞活力分别降低了约 40% 和 60%（图1B）。与未经处理的对照组细胞（0 µM CaA）相比，CaA处理72小时后，U251和U87胶质瘤细胞的增殖受到显著抑制，且呈剂量依赖性。在20 µM和50 µM浓度下，CaA使U87细胞的存活率分别降低了41.10%和59.99%，使U251细胞的存活率分别降低了33.98%和46.34%（图1C）。类...
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环阿屯醇（CaA）通过独特地调控两条关键的生存通路——PI3K/Akt/mTOR 通路和 Nrf2-铁死亡防御机制，在胶质母细胞瘤中表现出显著的抗肿瘤效应。PI3K/Akt 通路在多形性胶质母细胞瘤（GBM）中常呈过度激活状态（在约 88–90% 的病例中发生改变），这通常由 PTEN 缺失或受体酪氨酸激酶（RTK）激活所致，进而驱动肿瘤增殖并产生治疗耐药性26。然而，单独靶向该通路在 GBM 中诱导的凋亡作用有限，因为肿瘤常通过细胞静止或代偿机制逃逸 PI3K 抑制26。在此背景下，CaA 的双重作用具有新颖性：它通过直接结合 PIK3CA 抑制 PI3K/Akt 信号通路，不仅抑制了关键的促生长通路，还促进了 Nrf2 的降解——Nrf2 是抗氧化基因和抗铁死亡基因表达的主调控因子27。这种多靶点机制使 CaA 能够同时瓦解 GBM 的两大主要防御系统——致癌信号传导和氧化还原稳态，从而引发强烈的铁死亡。据我们所知，CaA 是首个被报道可在胶质母细胞瘤中协同下调 PI3K/Akt/mTOR ...
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作者声明无任何利益冲突。
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| Agilent 2100 Bioanalyzer | 基于毛细管的电泳系统 | ||
| Annexin V-FITC 凋亡检测试剂盒 | Roche Diagnostics | 11858777001 | N/A |
| AutoDock Tools 1.5.7 (AutoDock Vina) | 分子对接准备软件（对接算法） | ||
| Calceolarioside A (CaA) | Sigma-Aldrich | SMB00246 | N/A |
| Chem3D | 分子建模软件 | ||
| cDNA 合成试剂盒 | Vazyme Biotech | R223 | N/A |
| DCFH-DA | Sigma-Aldrich | D6883 | N/A |
| DMEM | Thermo Fisher Scientific | 11965092 | N/A |
| DMSO | Merck | D8418 | N/A |
| FerroOrange 探针 | Dojindo | F374 | N/A |
| 胎牛血清 (FBS) | Sigma-Aldrich | F2442 | N/A |
| 流式细胞仪 | BD Biosciences | FACSAriaIII 流式细胞仪 | 用于分析 Annexin V 染色细胞的仪器 |
| 荧光显微镜 | Olympus | IX73 | 用于观察 FerroOrange 和 DCFH-DA 荧光的仪器 |
| FTH1 抗体 | Abcam | ab75973 | AB_1310150 |
| GAPDH 抗体 | Abcam | ab8245 | AB_2107448 |
| GLS 抗体 | Abcam | ab93434 | AB_10563527 |
| GPX4 抗体 | Abcam | ab125066 | AB_10972289 |
| HT22 小鼠神经元细胞系 | AddexBio | C0011008 | CVCL_0321 |
| jetPRIME 转染试剂 | Polyplus-transfection | 114-07 | 基于聚合物的转染试剂 |
| Keap1 抗体 | Abcam | ab139729 | AB_2732852 |
| L-谷氨酰胺 (200 mM) | Thermo Fisher Scientific | 25030081 | N/A |
| LigPlot+ | 二维相互作用图谱工具 | ||
| Lipofectamine 3000 | Thermo Fisher Scientific | 基于脂质的转染试剂 | |
| Liproxstatin-1 | Selleck | S7699 | N/A |
| MG132 | Selleck | S2619 | N/A |
| 酶标仪 | Thermo Fisher Scientific | H1M | 用于 MTT 实验中吸光度测定（490 nm）的仪器 |
| MTT | Sigma-Aldrich | M5655 | N/A |
| NanoDrop | 微量紫外-可见分光光度计 | ||
| Nrf2 抗体 | Abcam | ab62352 | AB_945626 |
| 裸鼠 BALB/c 小鼠 | Vital River, 中国 | N/A | IMSR_CRL:028 |
| OptiMeM 低血清培养基 | |||
| PyMOL | 分子可视化软件 | ||
| QuantStudio 5 实时荧光定量 PCR 系统 | |||
| SYBR Green Master Mix | Vazyme Biotech | Q711 | N/A |
| TRIzol 试剂 | Thermo Fisher | 15596026 | N/A |
| U251 人胶质瘤细胞系 | CLS Cell Lines Service | 300385 | CVCL_0021 |
| U87 人胶质瘤细胞系 | ATCC | HTB-14 | CVCL_0022 |
| 泛素抗体 | Abcam | ab7780 | AB_306981 |
| xCT/SLC7A11 抗体 | Abcam | ab175186 | AB_2715513 |
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This corrects the article 10.3791/69643