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该方案由萨尔瓦多·苏比兰国家医学与营养科学研究所（INCMNSZ）人类生物医学研究机构委员会（CIIBH）批准（参考号1734）。所有参与者在纳入本研究前均已提供知情同意。
研究设计与人群
这是一项随机、安慰剂对照、双盲临床试验，随访期为5周。INCMNSZ的工作人员被邀请参与研究，纳入了2011至2012年间接受并签署知情同意书、年龄介于20至50岁、未接受抗菌治疗且未接受抗菌治疗的健康志愿者。研究对象被1：1随机分配至共生胶组，服用10.32克龙舌兰菊粉作为益生元，×4×109 CFU/g乳酸 杆 菌NCFM和4109 CFU/g乳 歧杆菌 Bi07，分装4包，服用5周，1周内每日两次200毫克利福昔明。安慰剂凝胶组接受4包15克安慰剂凝胶，表现和感觉特征与合成凝胶相同，持续5周，第一周每天两次200毫克利福昔明（见图1）。
临床评估
在两个研究组中，症状和粪便外观均使用布里斯托尔量表进行评估。还测量了体重、身高和体质指数（BMI）。使用日记评估合成生元凝胶、安慰剂凝胶和利福昔明的摄入情况，并记录与凝胶摄入相关的副作用是否存在。
纤维消耗
两组均通过食物日记和每周24小时回忆进行纤维摄入评估。
治疗依从性
通过计算利福昔明剂量及每位参与者摄入的合成生物和安慰剂凝胶袋数来评估利福昔明和凝胶的依从性。通过聚合酶链式反应（PCR）检测出乳 酸杆 菌和乳双 歧杆 菌的存在。
粪便的微生物学评估
在第0次就诊及每周5次就诊（每组6次）时，通过平板计数法评估了120份粪便样本中乳酸杆菌、双歧杆菌和肠杆菌的数量。该方法通过将稀释样品置于专用固体培养基10上，测量菌落形成单元（CFU）。每次就诊开始时采集粪便样本。
为了鉴定微生物，粪便样本被收集并储存在BBL管中。PBG小瓶用于防腐无氧细菌，粪便样本则被放入含有冷冻凝胶包的泡沫冷却器中，以保持低温后再进入实验室处理。取下共胚培养用PBG小瓶的盖子，并用拭子采集粪便样本，确保拭子与样本共浸。随后，应用器被放入装有固体培养基的管内。
厌氧细菌称量小瓶，并用勺子收集5–10克粪便。粪便随后与小瓶内内容物混合并密封。样本处理时，称重装有样本的小瓶和无菌的Stomacher袋。样本被倒入袋中，离心60秒，然后加入4.5毫升0.1%肽水。随后，将500微升样品转移到小瓶中并进行漩涡以均匀化混合物。在每块板上分别接种100微升样本后，分别在特定选择培养基上接种100微升，分别是针对乳酸杆菌的Man Rogosa Sharpe培养基和含有半胱氨酸+环己酰胺的DP Berens培养基（用于消除不需要的菌群），用于处理双歧杆菌，稀释度最高为8（稀释因子0.1 mL）。对于肠杆菌，使用麦康基培养基，稀释度为5–8（稀释因子0.1毫升），分离并定量细菌菌落11。每种介质粉末溶解于纯净蒸馏水中，溶液加热至沸腾以确保完全溶解，并在121°C的高压灭菌器中消毒15分钟。混合物冷却至46.5°C进行倒板技术，每块平板重复倒入含有15–20毫升培养基的无菌培养皿中，并让平板固化。接种样本在37°C的CO2浓缩气氛中，厌氧GasPak系统中孵育，以维持24至48小时的厌氧环境。形成殖民单位（CFU）用笔标记并数了12个。采用了以下公式：
CFU/mL = （菌落数×总稀释因子）/培养皿体积（mL）
乳酸杆菌和双歧杆菌形态特征的鉴定
革兰染色用于鉴定标本的形态特征。每种菌株的细菌菌落样本被放置在显微镜载玻片上，用晶紫染色1分钟，然后用蒸馏水冲洗。先用碘溶液浸泡1分钟，然后用蒸馏水冲洗。使用酒精-丙酮溶液作为脱色剂，浸泡10秒，并用蒸馏水冲洗。最后，将沙弗宁作为对染剂涂抹1分钟，并用蒸馏水冲洗。显微镜载玻片在使用浸油和100倍物镜的光学显微镜下观察。
总体定量采用传统聚合酶链式反应（PCR）对每组五名受试者随机抽取的粪便样本，共计5周内采集60个样本。培养基中的分离物被处理以提取遗传物质。PCR使用通用细菌引物进行扩增16S rRNA基因13的片段。PCR产物经过纯化和测序。这些序列经过验证并提交至GenBank数据库，以确认从粪便样本中分离出的乳酸杆菌和双歧杆菌株。
统计分析
数据以绝对频率和相对频率或中位数（第25至第75页）表示。症状的累计严重程度通过李克特评分（轻度1;中度2;严重3）确定。组间比较采用Wilcoxon秩和检验和卡方或Fisher精确检验进行。在第0至第5周之间进行了组内比较，采用Friedman检验及Durbin-Conover多重比较。统计显著性设定为P < 0.05。