术前血清肝细胞生长因子与炎症预后评分作为口腔鳞状细胞癌的预后标志物

摘要

本研究旨在探讨术前血清肝细胞生长因子（HGF）和初步探索性炎症预后评分（IBPS）与口腔鳞状细胞癌患者术后总生存期（OS）及无病生存期（DFS）之间的潜在关联。

摘要

口腔鳞状细胞癌（OSCC）是一种侵袭性强的恶性肿瘤，影响患者的预后和生活质量。确定合适的预后指标可能有助于改善临床决策。本研究旨在评估OSCC患者术前血清肝细胞生长因子（HGF）和炎症预后评分（IBPS）与术后病理结果之间的关联。本回顾性研究共纳入158名受试者（2020–2022年），包括A组（健康对照组）79例和B组（OSCC组）79例。检测血清HGF水平和炎症标志物，并计算IBPS。在A组与B组之间进行比较分析，并在B组队列中进行预后分析。采用逻辑回归分析相关因素，通过生存分析和受试者工作特征（ROC）分析评估预后效能。两组基线特征具有可比性（P > 0.05）。B组的HGF水平和IBPS显著高于A组（P < 0.05）。在B组队列中，HGF和IBPS升高与较差的预后相关（HGF OR = 2.010，95% CI：1.046–3.863；IBPS OR = 2.603，95% CI：1.316–5.148，P < 0.05），并伴随不良的术后病理结果。HGF与IBPS联合应用在预后预测中表现出更优的判别能力（AUC = 0.776，P < 0.001）。OSCC患者术前HGF和IBPS异常，且在20个月随访后与术后病理结果相关。这些发现可能为OSCC患者术前风险分层和临床监测的进一步研究提供支持。

引言

口腔鳞状细胞癌（OSCC）是一种常见的头颈部恶性肿瘤，起源于口腔黏膜的上皮细胞。OSCC在全球范围内造成了沉重的疾病负担，严重威胁人类健康。根据相关统计，每年新诊断的OSCC病例数量持续增长，其发病率呈现出一定的地域和人群差异¹。从病理学角度来看，OSCC是一个多因素、多步骤且复杂的过程。大量研究表明，长期不良的生活习惯，如吸烟、酗酒以及人乳头瘤病毒感染，是诱发OSCC的高危因素。这些因素可导致口腔黏膜上皮细胞基因发生突变，破坏细胞增殖、分化和凋亡的正常调控，最终促使癌细胞的形成。在肿瘤演进过程中，癌细胞会持续侵袭周围组织和器官，并通过淋巴管和血管发生远处转移，严重影响患者的预后^2,3。

从临床特征来看，口腔鳞状细胞癌（OSCC）患者的早期症状往往较为隐匿，可能仅表现为口腔黏膜的局部溃疡、硬结或肿块，容易被患者忽视⁴。随着疾病进展，患者可能出现疼痛、出血、吞咽困难和言语障碍等症状，严重影响其生活质量。当疾病进展至晚期时，肿瘤可能侵犯下颌骨、颈部淋巴结等重要结构，导致面部畸形和颈部淋巴结肿大等严重后果⁵。目前，手术切除仍是OSCC治疗的主要手段之一。然而，尽管手术能够切除肉眼可见的肿瘤组织，仍有相当一部分患者在术后出现复发和转移。研究表明，OSCC患者术后5年生存率仅为约60%，其中超过一半的患者在首次手术治疗后2年内复发⁶。肿瘤的复发与转移不仅增加了后续治疗的难度，也显著降低了患者的生存机会。此外，手术给患者带来一系列生理和心理创伤，如面部外观改变以及咀嚼、吞咽功能受损，严重影响其术后的生存质量⁷。因此，对OSCC患者术后病理结果进行准确且具有预测性的评估，对于制定个体化治疗方案、提高患者的生存率和生活质量至关重要。

尽管临床病理分期被广泛应用，但传统参数往往无法充分评估个体患者的术后风险。单个炎症生物标志物或比值（如中性粒细胞-淋巴细胞比值[NLR]、血小板-淋巴细胞比值[PLR]和淋巴细胞-单核细胞比值[LMR]）虽被广泛使用，但缺乏整合的预后信息，且在不同队列中的表现仍不一致。同样，单独使用的血清生物标志物通常预测准确性有限⁸。迄今为止，很少有研究将血清HGF与综合炎症评分相结合以改善口腔鳞状细胞癌（OSCC）的术前风险分层。这构成了当前研究旨在解决的重要知识空白⁹。

肝细胞生长因子（Hepatocyte growth factor, HGF）是一种由728个氨基酸残基组成的糖蛋白，其分子结构包含通过二硫键连接形成异源二聚体的α链和β链¹⁰。作为一种多功能细胞因子，在生理条件下，HGF主要由间充质基质细胞分泌，通过与靶细胞表面的c-Met受体结合，激活PI3K/AKT等多条信号通路，从而在细胞增殖、迁移、侵袭和血管生成过程中发挥重要作用¹¹。近年来，越来越多的研究聚焦于HGF在肿瘤发生和发展中的作用机制。在口腔鳞状细胞癌（OSCC）中，术前血清HGF水平与患者的预后密切相关。相关研究表明，OSCC患者术前血清HGF水平显著高于健康人群，且其水平随肿瘤进展逐渐升高¹²。研究发现，血清HGF水平升高的癌症患者术后复发和转移的风险也显著增加。这可能是因为HGF能够促进癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力，同时诱导肿瘤血管生成，为肿瘤的生长和转移提供必要的营养和氧气^13,14。因此，术前血清HGF水平有望作为OSCC患者术后病理结局的重要预测指标。

炎症在肿瘤的发生、发展和转移过程中发挥着重要作用。炎症预后评分（IBPS）是对机体炎症状态的综合评估，通过整合多种炎症相关因素或细胞计数来预测肿瘤患者的预后¹⁵。目前，IBPS的具体评分组分尚未完全标准化，常见的炎症指标包括中性粒细胞、淋巴细胞、血小板和单核细胞计数及其衍生比值，如中性粒细胞-淋巴细胞比值（NLR）、血小板-淋巴细胞比值（PLR）和淋巴细胞-单核细胞比值（LMR）¹⁶。研究表明，口腔鳞状细胞癌（OSCC）患者肿瘤微环境中存在大量炎性细胞浸润，这些炎性细胞可分泌促进肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭的细胞因子和趋化因子。同时，炎症还能诱导肿瘤血管生成，为肿瘤生长提供必要条件。通过对OSCC患者外周血炎症指标的分析发现，IBPS较高的患者术后复发和转移的风险更高，且总体生存期显著缩短。例如，NLR、PLR和LMR等炎症相关指标已被证实与OSCC患者的预后密切相关。较高的NLR和PLR水平通常提示患者预后较差，而较高的LMR水平则与较好的预后相关¹⁷。因此，IBPS可作为评估OSCC患者术后病理结局的潜在指标，为临床治疗决策提供重要参考。

与传统的临床病理分期、单一炎症比值或孤立的血清生物标志物相比，HGF 和 IBPS 联合检测具有多项潜在优势：其具有微创性、成本效益高、可常规从术前血液检查中获得，并可在手术干预前完成检测。与影像学或组织病理学分期不同，这种联合策略能够实现早期定量风险分层，而不仅依赖主观判断或术后评估^18,19。值得注意的是，全身性感染、慢性炎症性疾病以及某些药物可能改变外周炎症标志物，从而可能影响 IBPS 数值²⁰。该模型旨在对接受手术治疗的口腔鳞状细胞癌（OSCC）患者进行术前风险分层，但在将这些结果外推至其他人群或临床环境时应谨慎对待。

基于上述背景，本研究旨在探讨术前血清HGF水平和IBPS对口腔鳞状细胞癌（OSCC）患者术后病理结局的预后价值。我们假设，术前血清HGF水平升高及IBPS异常与OSCC患者较差的术后病理结局相关；通过检测患者术前血清HGF水平并计算IBPS，可为临床医生提供更准确的预后预测信息，从而指导个体化治疗方案的制定，提高患者的生存率和生活质量。本研究的积极意义在于：一方面，若能证实术前血清HGF水平和IBPS对OSCC患者术后病理结局具有良好的预后价值，将为临床医生提供新的预后评估指标，有助于更全面、准确地评估患者病情，为制定个体化治疗方案提供有力依据；另一方面，通过早期识别高危患者，临床医生可采取更为积极的治疗措施，如加强术后随访、提前实施辅助治疗等，从而降低复发与转移风险，改善患者生存状况。此外，本研究可能为深入探讨OSCC发病机制及治疗靶点提供新的思路与方向，具有重要的理论和临床意义。

方案

本研究遵循《赫尔辛基宣言》及医院伦理准则，并获得江南大学附属无锡第二人民医院及伦理委员会（伦理编号：2024-Y-231）的批准。所有人类生物样本（静脉血及血清分装样本）均严格按照生物安全法规（GB 19489-2008）进行操作。所有实验操作均在生物安全柜中进行，以避免样本污染及人员暴露。使用后的生物样本、污染的移液器吸头及微量离心管的处置均依照医疗废物管理标准执行：样本及污染材料经121 ˚C高压灭菌30分钟，随后移交具备资质的医疗废物处理机构进行集中处理，以确保生物安全。

研究设计
本研究为单中心回顾性队列研究，旨在探讨术前血清HGF水平及自建炎症相关预后评分系统（IBPS）对口腔鳞状细胞癌（OSCC）患者术后病理结局的预后价值。本研究设计遵循《肿瘤标志物预后研究报告建议》（REMARK）指南。研究对象为2020年1月至2022年12月期间于江南大学医学中心无锡市第二人民医院口腔科就诊的人群。共收集170例资料，排除后纳入165例，随访期间失访7例，最终纳入A组（健康对照组，同期因健康体检入院的健康人群）79例和B组（OSCC组，OSCC患者）79例。本研究的流程图见图1。通过医院电子病历系统及体检中心数据库筛选符合条件的研究对象，收集A组（健康对照组）和B组（OSCC组）详细的临床病理资料。在研究期间对B组患者进行术后随访，记录复发、转移及生存情况。仅纳入健康对照组以识别OSCC患者与健康个体之间炎症标志物的差异表达，为自建IBPS评分的截断值设定提供合理依据。基于OSCC患者的术后病理结局，评估IBPS的预后价值并在该患者队列中进行验证。本研究设计通过严格的分组标准、标准化的实验室检测流程以及系统的随访机制，确保了数据的准确性与研究的科学性，为分析HGF水平和IBPS评分在OSCC术后病理结局中的预后价值提供了严谨的研究框架，有望为临床制定个体化预后评估方案和治疗策略提供科学依据。

纳入与排除标准
纳入标准：（1）经诊断为口腔鳞状细胞癌（OSCC）²¹ 的患者；（2）年龄在40至65岁之间；（3）具有完整的临床资料；（4）接受以手术为基础并辅以选择性放疗的综合性序贯治疗方案；（5）患者依从性良好，愿意配合本研究制定的治疗计划；（6）患者整体精神状态良好，身体基本健康，能够如实表达自身症状的主诉，并准确回答医护人员的相关问题；（7）患者及其家属已被告知研究内容并表示同意，且已签署知情同意书。

排除标准：（1）合并除口腔鳞状细胞癌以外的其他恶性肿瘤的患者；（2）合并严重全身性疾病或免疫系统疾病的患者；（3）合并出血性凝血功能障碍，或严重心、肝、肾功能缺陷，严重心血管疾病或其他更严重疾病的患者；（4）合并慢性感染性疾病，或合并其他性传播疾病（如梅毒、淋病等）的患者；（5）合并脑、心、肝、肾功能异常的患者；（6）曾参与过临床药物试验或临床研究的患者；（7）因个人原因要求终止治疗或自动出院的患者；（8）研究医生认为不应纳入的其他情况；（9）影响随访观察指标的其他情形。

分组方法
将研究对象分为两组：A组：健康对照组（n = 79），B组：口腔鳞状细胞癌组（n = 79）。

指标收集
收集两组患者的基本信息。

样本采集
于清晨手术前采集所有受试者的空腹静脉血样本（5 mL），并在运输过程中保持在室温（25 ± 2 ˚C）。采集后30分钟（1,800秒）内处理血液样本。在室温（25 ± 2 ˚C）下以3,000 × g 离心15分钟后，使用无菌聚丙烯微量离心管将上清血清转移至0.5 mL的分装管中。所有分装样本立即置于-80 ˚C超低温冰箱中长期保存，直至进行分析；避免反复冻融（如确有必要，最多允许一次冻融循环）。

血清 HGF 水平
根据制造商说明书，使用商用酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒检测血清 HGF 浓度²²。简言之，将血清样本在 4 ˚C 条件下解冻 30 分钟，以避免蛋白质变性，然后用试剂盒提供的稀释缓冲液按 1:1 比例稀释。向 ELISA 板中加入标准品、对照品及稀释后的血清样本（每孔 100 µL），于 37 ˚C 孵育 60 分钟。用试剂盒提供的洗涤缓冲液洗板 5 次后，加入一抗偶联物，并于 37 ˚C 再次孵育 30 分钟。完成第二轮洗涤后，加入显色底物，在避光条件下于 37 ˚C 孵育 15 分钟，随后用终止液终止反应。在终止反应后 10 分钟内，使用 ELISA 读板仪在 450 nm 处测定吸光度。整个检测过程中实施标准质量控制程序，包括使用试剂盒提供的校准品和对照品。批内变异系数（CV）< 5%，批间 CV < 8%，表明分析性能可靠。

IBPS 计算
使用 XN3000 全自动血细胞分析仪及配套试剂²³对血清样本进行分析。将血清样本在 4 ˚C 条件下解冻 20 分钟，随后于室温（25 ± 2 ˚C）平衡 10 分钟后进行检测。在 25 ± 2 ˚C 条件下进行常规血液检测，获得白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞和血小板计数，然后计算中性粒细胞与淋巴细胞比值（NLR，Neutrophil count/lymphocyte count）和血小板与淋巴细胞比值（PLR，Platelet count/lymphocyte count）。检测仪器在 25 ˚C 下定期校准，血液常规指标的批内变异系数（CV）< 3%，批间 CV < 5%。采用免疫比浊法在全自动生化分析仪上测定血清 CRP 含量。血清样本在 4 ˚C 解冻 20 分钟后，于 37 ˚C 平衡 5 分钟进行检测。反应在 37 ˚C 下进行，孵育时间为 10 分钟，并在 546 nm 波长下连续监测反应过程。仪器操作严格遵循说明书完成检测。CRP 检测的批内 CV < 4%，批间 CV < 6%。根据本研究自制的 IBPS 评分量表进行评分。IBPS 评分系统参考既往炎症预后评分的构建方法，并结合本研究前期实验结果对各指标权重进行调整。NLR 值 ≤3.0 记为 0 分，3.0–5.0 记为 1 分，>5.0 记为 2 分；PLR 值 ≤150 记为 0 分，150–300 记为 1 分，>300 记为 2 分；CRP 含量 ≤50 mg/L 记为 0 分，50–100 mg/L 记为 1 分，>100 mg/L 记为 2 分。总 IBPS 评分 = CRP 评分 + NLR 评分 + PLR 评分。分层标准：≤ 4 分为中低风险，5–6 分为高风险。NLR、PLR 和 CRP 的截断值及评分标准基于既往发表的炎症预后评分，并结合本研究人群的探索性数据分析确定，而非采用约登指数或受试者工作特征曲线分析等统计优化方法。

随访
本研究采用标准化的20个月随访方案，以评估患者的术后结局。随访的起始时间为B组（OSCC组）患者接受手术当天，结束时间为2024年8月31日。随访方式结合了门诊随访和电话随访。每次随访均进行体格检查和影像学检查，以确认是否存在肿瘤复发或转移。主要预后指标为总生存期（OS）和无病生存期（DFS）。OS定义为从手术之日起至因任何原因死亡的时间。DFS定义为从手术之日起至肿瘤复发、进展或因肿瘤相关原因死亡的时间。

样本量计算
本研究使用 G*Power 3.1.9.7 进行样本量估算，以明确 HGF 水平和 IBPS 评分对口腔鳞状细胞癌（OSCC）患者术后病理结局的预后价值。设定检验水准 α 为 0.05（双侧），检验效能为 85%，并根据软件计算，预设炎症因子 AUC 为 0.75。为满足 ROC 曲线分析和多因素回归的统计学要求，每组需纳入 75 例患者。考虑到潜在的失访和数据缺失等不确定性因素，本研究最终将每组样本量确定为 79 例，以确保研究具备足够的统计效能，得出可靠的结论。

统计学分析
采用 SPSS 28.0 统计软件进行数据分析。使用 GraphPad Prism 9.0 绘制生存曲线，使用 Lucidchart 绘制流程图。首先对研究中的数据进行正态性检验。计量资料采用独立样本 t 检验比较 A 组与 B 组之间的基线特征，计数资料采用 χ² 检验。基线特征以计数 [n (%)] 和计量数据（表示为 x ± s）描述。HGF、NLR、PLR 和 CRP 等指标以 x ± s 表示，组间比较亦采用独立样本 t 检验。采用二元 Logistic 回归分析探讨 HGF 水平、IBPS 评分与术后病理结局（因变量，1 = 不良，0 = 良好）之间的关联，回归系数为正值表示指标与不良结局呈正相关。采用 Kaplan-Meier 法绘制 A 组与 B 组的总生存期（OS）和无病生存期（DFS）曲线，并采用 log-rank 检验比较组间生存率的统计学差异。通过受试者工作特征（ROC）曲线及曲线下面积（AUC）分析上述指标对口腔鳞状细胞癌（OSCC）患者的预后价值，以确定最佳截断值、敏感性和特异性。计数资料以 n (%) 表示，A 组与 B 组之间的比较采用 χ² 检验。所有统计检验均为双侧检验，P < 0.05 表示差异具有统计学意义。

结果

诊断分析（OSCC组 vs. 健康对照组）
基本信息
本研究纳入了2020年1月至2022年12月期间在江南大学附属无锡第二人民医院确诊为OSCC的79例患者，同时选取同期来院体检的79名健康个体作为对照组。研究目的在于分析HGF水平和IBPS评分对OSCC患者术后病理结局的预后价值。结果显示（表1），不同预后组之间各项基线特征的差异均无统计学意义（P > 0.05），组间比较针对计量资料采用独立样本t检验，计数资料采用χ²检验。

OSCC 患者的临床特征
本研究纳入了 79 例原发性 OSCC 患者。肿瘤亚部位根据《国际疾病分类》第 11 次修订版（ICD-11）进行编码，并采用国际抗癌联盟（UICC）第 8 版 TNM 分期系统进行分期（表 2）。原发灶分布情况：31 例（39.24%）位于舌部（ICD-11: C01.9，...

讨论

口腔鳞状细胞癌（OSCC）是最常见的口腔癌类型。其病理特征主要由肿瘤细胞的鳞状分化决定。根据与正常鳞状细胞在形态和结构上的相似性，OSCC可分为高分化、中分化和低分化亚型。高分化OSCC的癌细胞在形态上接近正常鳞状细胞，结构相对规则，而低分化肿瘤则表现出异常的细胞形态、结构紊乱以及高度恶性²⁴。OSCC的早期症状常不明显，仅表现为白斑、红斑、溃疡或其他轻微病变。随着疾病进展，患者可能出现局部疼痛、肿块等症状，严重影响口腔功能、营养摄入、言语交流及生活质量。此外，OSCC易发生区域淋巴结转移，甚至向肺、肝等远处器官转移，显著降低患者的生存率^25,26,27。

本研究提出，术前血清HGF联合IBPS可作为口腔鳞状细胞癌（OSCC）患者术后病理结局的一种新型、无创且易于获取的预后模型。术前血清HGF可促进肿瘤增殖、迁移、侵袭及血管生成，而IBPS则全面反映...

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
全自动血液分析仪	Sysmex Corporation	XN3000	RRID: SCR_019145 / 常规血液检测（白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、血小板计数）
ELISA试剂盒	上海秦诚生物科技有限公司	QC-HGF-Hu	RRID: AB_2898765 / 血清HGF浓度测定
GraphPad Prism	GraphPad Software, Inc.	9	RRID: SCR_002798 / 生存曲线绘制
G*Power	Heinrich-Heine-Universität Düsseldorf	3.1.9.7	RRID: SCR_013756 / 样本量估算
CRP免疫比浊测定试剂	上海科瓦生物工程有限公司	BH031M	RRID: AB_2898766 / 血清CRP含量测定
SPSS	IBM Corporation	28	RRID: SCR_002865 / 数据统计分析