本研究建立了一种新方法 体内 慢性中度肾功能不全合并心房颤动的比格犬模型 通过 经导管肾动脉栓塞联合快速心房起搏可严重损害左心房内皮功能，通过炎症反应及肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS）介导的途径增强促凝活性，增加血栓形成风险。
需要JoVE订阅才能观看此内容。 请登录或开始免费试用
研究文章
* These authors contributed equally
本研究建立了一种新方法 体内 慢性中度肾功能不全合并心房颤动的比格犬模型 通过 经导管肾动脉栓塞联合快速心房起搏可严重损害左心房内皮功能，通过炎症反应及肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS）介导的途径增强促凝活性，增加血栓形成风险。
心房颤动（AF）与肾功能不全（RI）的共存是一种临床表现复杂的高发疾病现象。本研究探讨了慢性中度肾功能不全合并心房颤动对比格犬左心房内皮功能的影响。通过使用明胶海绵颗粒经导管栓塞左侧肾动脉主干以诱导慢性肾功能不全，并维持动物3个月，以建立慢性肾实质损伤模型。随后通过持续快速心房起搏（基础起搏周期长度为60 ms，电压为舒张期起搏阈值的4倍，持续180分钟）诱导心房颤动。采用苏木精-伊红染色评估组织学改变。利用酶联免疫吸附测定、实时定量聚合酶链反应及蛋白质印迹法检测血浆和心脏组织中与内皮功能、凝血、纤溶、炎症及肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS）活性相关的指标。结果显示，成功建立了中度肾功能不全的慢性肾损伤模型，表现为血浆肌酐和尿素氮水平显著升高，肌酐清除率降低。合并肾功能不全与心房颤动的比格犬左心房内皮功能显著受损，同时伴有促凝作用增强和纤溶功能下降。在肾功能不全手术或心房颤动诱导后，炎症标志物水平升高，而在RI+AF联合组中进一步升高。此外，肾功能不全后肾素和醛固酮水平升高，提示RAAS活性增强，而在合并心房颤动后该活性进一步增加。综上所述，本研究成功建立了比格犬慢性中度肾功能不全合并心房颤动的in vivo动物模型，证实该两种病理状态的共存显著干扰左心房内皮功能，并增加血栓形成风险。
心房颤动（AF）是最常见的持续性心律失常类型，与不良临床结局密切相关。由于AF具有全身性病理生理特征，这种心律失常常与多种共病发生复杂的病理生理交互作用，包括认知功能下降、抑郁以及系统性栓塞1。慢性肾脏病（CKD）已被确认为AF发生以及血栓栓塞事件发生的独立危险因素。约15%至20%的CKD患者伴有AF，而在接受肾脏替代治疗的患者中，AF的发生率则介于15%至40%之间2。同时，约30%至60%的AF患者合并存在轻至中度肾功能不全（RI）3。因此，AF与RI的共存已成为患者群体中一种高发的复杂临床现象。AF与RI之间的双向关系显著增加了AF的发生风险，同时也加剧了肾功能损害的进展，最终导致更差的临床结局4。
既往研究中，大鼠常被用于建立肾功能不全（RI）模型；然而，由于其心脏体积较小，不适合进行心脏电生理实验。相比之下，犬常被用于中大型动物的肾功能不全模型研究，其中肾切除术是主要的建模方法5。然而，该方法的建模成功率有限。更重要的是，由于肾切除术并不能直接引起肾实质损伤，因此难以有效模拟肾功能不全的病理过程。因此，建立一种同时具备肾功能不全和心房颤动（AF）的合适动物模型至关重要。值得注意的是，Liang Z 等人通过使用明胶海绵颗粒对左侧肾脏肾动脉的小分支进行栓塞，成功在比格犬中建立了轻度肾功能不全模型，并观察到与之相关的心房颤动6；然而，两周的观察期通常被认为不足以模拟临床慢性肾脏病（CKD），因为慢性肾病的典型特征，如肾小球硬化和肾小管间质纤维化，需要在动物模型中经过较长时间的持续性肾实质损伤才能充分发展7,8。这凸显了建立一种具有更长观察周期的慢性模型的必要性，以更真实地再现临床慢性肾脏病的渐进性发展过程。
因此，本研究旨在通过在比格犬中实施左肾动脉主干的经导管栓塞术，并维持动物3个月以形成稳定的慢性肾病病理状态，建立一种慢性中度肾功能不全（RI）合并心房颤动（AF）的动物模型。此外，我们探讨了在此类病理条件下左心房内皮功能障碍的发生机制，验证了慢性中度RI与AF联合作用会通过增强炎症反应和肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS）的激活，协同损害左心房内皮功能，从而导致血栓形成风险高于单一疾病状态的假设。这些发现可能有助于进一步理解慢性RI合并AF的病理机制，并为今后研究抗凝治疗在AF合并RI患者中的潜在获益奠定基础。
访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。
本研究严格遵循美国国立卫生研究院（NIH）《实验动物护理和使用指南》中的建议（出版号：85-23，1996年修订版）进行。研究方案经北京安贞医院机构动物护理与使用委员会批准（批准号：81700293）。本机构的动物护理与使用委员会对研究方案进行了审查并批准。所有操作均尽可能减轻动物痛苦，并尽量减少实验所用动物数量。所用试剂和设备列于材料表中。
1. 动物模型与实验设计
2. 肾动脉栓塞术诱导慢性中度肾功能不全
一根5F多功能导管 通过动脉鞘管引入，并在……下推进 在C臂X线透视引导下进入腹主动脉。行左侧肾动脉选择性插管，并进行基线肾动脉血管造影 通过以3 mL/s的速度注射5–8 mL非离子型碘造影剂，以显示完整的肾动脉树。通过血管造影图像上清晰显示左侧肾动脉及其分支，确认导管成功定位。
随后，通过使用导管栓塞左侧肾动脉主干来诱导肾梗死 可吸收明胶海绵颗粒（50 mg直径）。将约50 mg明胶海绵颗粒与造影剂和生理盐水按1:1比例混合，配制成总体积约为2–3 mL的混悬液。在持续透视监测下，通过导管以手动方式缓慢注射该栓塞混悬液，注射时间约为2–3分钟。通过重复进行左肾动脉血管造影确认栓塞成功，结果显示被栓塞的分支远端动脉无显影。血管造影确认后，拔除导管和鞘管，采用6-0聚丙烯缝线缝合股动脉。手术切口分层闭合，动物在密切监测下恢复。
对于对照组和AF组（假手术），进行相同的导管插入操作，并在肾动脉血管造影后，通过多用途导管向左侧肾动脉注入等量（2–3 mL）的生理盐水。
3. 快速心房起搏诱导心房颤动
RI 手术（或假手术）三个月后，在 AF 组和 RI+AF 组中诱导心房颤动（AF）。共在 12 只比格犬中诱导 AF（AF 组 n = 6，RI+AF 组 n = 6）。按照上述方法重新麻醉并建立血管通路后，穿刺右股静脉以插入导管。在透视引导下送入一根 6F 四极电极导管（见材料表），并将其置于右心房侧壁。 通过心内通道记录到特征性心房电图，显示清晰、尖锐的心房偏转波，从而确认导管位置正确。 舒张期起搏阈值通过将刺激器输出电压从5 V开始以0.1 V为步长逐步降低，直至观察到心房夺获消失；能够稳定实现1:1心房夺获的最低电压即记录为舒张期起搏阈值。快速心房起搏（基础周长，60 ms， 对应起搏频率为1000次/分钟；输出脉冲宽度为2 ms；电压为舒张期起搏阈值的4倍 通常对应于2–4 V的电压通过心脏刺激器持续施加180分钟 以诱导房颤，如先前所述9. 通过体表心电图出现持续的不规则R-R间期以及心内电图显示快速、紊乱的心房电位，且在短暂停止起搏后持续至少1分钟，确认房颤（AF）成功诱导。所有12只比格犬（100%）在完成起搏方案后均达到持续性房颤。起搏停止后，持续性房颤的平均持续时间为3–8分钟，随后自发转复为窦性心律。
需要注意的是，与用于评估心房颤动（AF）易感性的短阵快速起搏方案（通常为3–10秒的脉冲刺激）不同，本研究中采用的持续180分钟快速心房起搏方法专门用于模拟持续性心房颤动，并诱导早期分子重构。该方案在犬类心房颤动研究中已有充分建立并得到广泛验证9,10。
4. 实验设计与分组
实验动物被随机分为四组（每组 n = 6）：对照组、RI 组、AF 组以及 RI 联合 AF（RI+AF）组。RI 组和 RI+AF 组的比格犬在基线时接受 RI 栓塞操作，而对照组和 AF 组的比格犬则在肾动脉内接受假性生理盐水注射。三个月后，按照上述方法在 AF 组和 RI+AF 组中诱导 AF。整个实验设计和时间线的示意图见图 1。
5. 肌酐清除率测定
采用30分钟内源性肌酐清除率法测定肌酐清除率（CCr）11简而言之，在麻醉后，于无菌条件下将 Foley 导尿管插入膀胱，并完全排空膀胱。随后开始 30 分钟尿液收集期，在此期间收集全部尿液排出量 通过 将导管接入已校准的收集容器。30分钟收集期结束时，再次排空膀胱以确保尿液完全回收。同时，从颈静脉采集中期血样用于血浆肌酐浓度测定。肌酐清除率（CCr）按标准公式计算：CCr（mL/min/kg）=（尿肌酐浓度 × 尿液体积）/（血浆肌酐浓度 × 收集时间），并按体重进行标准化。
6. 组织和血液样本采集
在基线期和安乐死前，通过颈静脉采集血液样本，分别收集至含EDTA抗凝剂的采血管和普通血清分离管中11最终，所有比格犬均通过静脉注射150 mg/kg的致死剂量戊巴比妥钠实施安乐死。 在麻醉恢复前采集肾脏用于组织学检查。 心脏被取出后，仔细分离左心耳（LAA），在切除后5分钟内用液氮速冻，并于−80 °C保存，直至进行分子分析。选择LAA作为组织分析部位，因为它是心房颤动患者血栓形成最常见的部位，因此是评估内皮功能和血栓风险最具临床相关性的解剖位置。
7. 组织学观察
肾脏组织用10%中性缓冲多聚甲醛固定24 h，经梯度乙醇脱水（70%、80%、90%、95%和100%乙醇，每级1 h），二甲苯透明（换液两次，每次30 min），石蜡包埋后使用旋转式切片机切成5 µm厚切片。随后切片行苏木精-伊红（HE）染色，以观察组织病理学变化。 具体步骤如下：切片经二甲苯脱蜡（两次，每次10分钟），通过梯度乙醇溶液水化，苏木精溶液染色5分钟，1%盐酸乙醇分化30秒，流水冲洗10分钟，伊红溶液复染2分钟，脱水，透明，中性树胶封片。切片在光学显微镜下以100×和400×放大倍数进行观察。
8. 酶联免疫吸附测定（ELISA）
血液样本在 4 °C 条件下以 3000 × g 离心 20 分钟，然后收集上清液（血浆），并储存在 −80 °C 直至分析。使用市售 ELISA 试剂盒，根据制造商说明书检测血浆中肌酐、尿素氮、血管性血友病因子（vWF）、血栓调节蛋白（TM）、非对称二甲基精氨酸（ADMA）、一氧化氮（NO）、纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）、组织型纤溶酶原激活物（t-PA）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、高敏 C 反应蛋白（hs-CRP）、白细胞介素-6（IL-6）、肾素和醛固酮（ALD）的水平。简言之，将 100 µL 血浆样本或标准品加入抗体包被的 96 孔微孔板中，在 37 °C 孵育 2 小时，用洗涤缓冲液洗涤 4 次，再在 37 °C 与生物素化检测抗体孵育 1 小时，再次洗涤后，在 37 °C 与链霉亲和素-HRP 结合物孵育 30 分钟，随后在避光条件下加入 TMB 底物显色 15–20 分钟。反应通过加入 50 µL 终止液终止，并使用酶标仪在 450 nm 处测定吸光度。所有样本均设复孔检测。
9. 定量实时荧光 PCR（qRT-PCR）
从组织中提取总RNA 使用TRIzol试剂提取LAA组织中的RNA，随后检测RNA的纯度和浓度 使用分光光度计测定260/280 nm吸光度比值（可接受范围为1.8–2.0）。 总共使用 PrimeScript RT 试剂盒将 1 µg 的 RNA 逆转录为互补 DNA（cDNA）。 反转录反应在37 °C下进行15分钟，随后在85 °C下失活5秒。然后使用SYBR Green Master Mix在PCR系统上进行定量实时PCR。热循环程序包括：95 °C预变性5分钟，随后进行40个循环，每个循环为95 °C变性10秒，60 °C退火/延伸30秒。每个延伸步骤结束时，通过SYBR Green通道检测荧光信号。阈值循环（Ct）值由仪器软件自动确定。mRNA水平的倍数变化采用2⁻ΔΔCt法计算。−ΔΔCt 方法。β-actin 作为内参对照。 所有样品均设三个重复。
10. 蛋白质印迹法
采用放射免疫沉淀法（RIPA）裂解缓冲液从LAA组织中提取总蛋白 （由50 mM Tris-HCl（pH 7.4）、150 mM NaCl、1% NP-40、0.5% 脱氧胆酸钠、0.1% SDS 组成，并添加蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物；见材料表）。组织在冰上匀浆后，于12,000 × g 在 4 °C 下孵育 15 分钟，收集上清液。使用 BCA 蛋白质定量试剂盒测定蛋白浓度。随后，取等量蛋白 （每泳道30 µg）经12% SDS-PAGE分离 80 V 电泳 30 分钟（浓缩胶），随后 120 V 电泳约 60 分钟（分离胶），然后转移至聚偏二氟乙烯（PVDF）膜 在转移缓冲液（25 mM Tris，192 mM 甘氨酸，20% 甲醇）中，300 mA 恒流条件下转移 90 分钟。使用 5% 脱脂牛奶封闭膜 在室温下用 TBST（含 0.1% Tween-20 的 Tris 缓冲盐水）溶解 2 小时，然后与一抗孵育 （抗体来源、货号及稀释比例见材料表）于4 °C孵育过夜。次日，将膜用TBST洗涤三次（每次10分钟），随后与相应的HRP标记二抗孵育 （参见 材料表 室温下孵育2小时. 经过额外三次 TBST 洗涤（每次 10 分钟）后，使用增强型化学发光（ECL）显影印迹 使用化学发光成像系统进行试剂盒检测。 甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）作为内参对照。 使用 ImageJ 软件进行密度测定分析，相对蛋白表达水平以 GAPDH 为内参进行归一化。所检测蛋白的近似分子量如下：vWF（约 260 kDa）、TM（约 60 kDa）、内皮型一氧化氮合酶（eNOS，约 130 kDa）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS，约 130 kDa）、纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1，约 45 kDa）、组织型纤溶酶原激活物（t-PA，约 70 kDa）和 GAPDH（约 36 kDa）。完整的未经裁剪的 Western 印迹图像见于 补充图1 和 补充图2.
11. 统计分析
所有数值均使用统计与绘图软件进行分析，并以均值 ± 标准差（SD）表示。在进行参数分析前，采用Shapiro-Wilk检验评估数据分布的正态性。方差齐性通过Levene检验进行评估。对于满足正态性和方差齐性假设的数据，采用单因素方差分析（one-way ANOVA）进行差异比较，并进一步使用Dunnett事后检验与对照组进行多重比较。对于不满足正态性假设的数据，则采用非参数的Kruskal-Wallis检验，并随后使用Dunn事后检验。本研究中，所有变量均满足正态性与方差齐性的假设，因此全程采用参数分析方法。在分析软件中，将数据输入分组数据表格，从“列分析”菜单中选择单因素方差分析（one-way ANOVA），选择Dunnett检验进行事后比较，显著性阈值设定为 p < 0.05。
访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。
慢性中度肾功能不全与心房颤动的动物模型
实验设计与时间线的示意图如下所示 图1经导管栓塞术前后左侧肾动脉血管造影的代表性图像，如图所示 图2A，B 结果显示，经导管栓塞后，小肾动脉分支成功闭塞，再次血管造影显示远端动脉无显影。肾去神经术（RI）术后三个月，比格犬被实施安乐死，肾脏被取出并拍照。观察发现，与右侧肾脏相比，左侧肾脏明显缩小，并出现多灶性、不规则的苍白区域。图 2C，D）。组织学检查 通过 HE染色显示，与对照组相比，RI组的肾小球严重受损，提示RI手术后大部分肾单位功能丧失（图2E，F。同时，如图所示 表1各组间基线血浆肌酐和尿素氮水平无显著差异。然...
访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。
本研究建立了一种中度肾功能不全（RI）合并心房颤动（AF）的体内动物模型，并探讨了在此类病理条件下左心房内皮功能障碍的发病机制。本研究的主要发现如下：首先，在比格犬中通过栓塞左主肾动脉3个月成功诱导了中度肾功能不全；其次，比格犬的心房颤动模型被有效建立；第三，在同时患有肾功能不全和心房颤动的动物中，左心房内皮功能显著受损，伴有促凝作用增强和纤溶活性降低，可能导致血栓形成风险增加；第四，慢性中度肾功能不全与心房颤动的共存与显著增强的炎症反应及肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS）活性升高密切相关。
评估合并心房颤动（AF）的肾功能不全（RI）患者发生血栓和出血的风险是临床实践中一个关键课题。近期研究也强调了肾功能与心房颤动之间复杂的相互作用，影响血栓栓塞事件的发生12。缺乏合适的RI动物模型一直是限制该领域基础研究的瓶颈。据我们所知，在本研究之前，尚未有报道建立适用于慢性中度RI合并AF的合适大动物模型。既往研究广泛采用大鼠5/6肾切除术作为RI的经典模型；然而，该方法术后死亡率高，并发症严重（如感染），限制了其应用...
访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。
作者声明无竞争利益。
本工作得到非传染性慢性疾病-国家科技重大专项（编号：2024ZD052500、2024ZD0521504）、国家自然科学基金（资助号：81700293 和 81970272）以及北京安贞医院高水平研究基金（资助项目编号：2025AZB5005）的支持。
访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 6-0 聚丙烯缝合线 | Ethicon (Johnson & Johnson) | 8706H | 用于股动脉修复 |
| 5F 多功能导管 | Cordis (Cardinal Health) | 521-550S | 用于肾动脉插管和栓塞 |
| 6F 四极电极导管 | St. Jude Medical | 401443 | 用于右心房起搏 |
| 6F 血管导入鞘 | Terumo | RS*A60K10SQ | 用于股动脉通路 |
| ABI 7500 实时荧光定量 PCR 系统 | Applied Biosystems (Thermo Fisher Scientific) | 4351105 | 用于 qRT-PCR 的热循环和荧光检测 |
| 可吸收明胶海绵颗粒（50 mg 直径） | 金陵制药 | — | 用于经导管肾动脉栓塞；用对比剂与生理盐水（1:1）配制成混悬液 |
| ADMA ELISA 试剂盒（犬用） | Cusabio | CSB-E09297c | 用于血浆不对称二甲基精氨酸测定 |
| 醛固酮 ELISA 试剂盒（犬用） | Cusabio | CSB-E08014c | 用于血浆醛固酮测定 |
| BCA 蛋白定量试剂盒 | Thermo Fisher Scientific | 23225 | 用于蛋白质浓度定量 |
| 比格犬（雄性，4–5 岁，10–12 kg） | 上海交通大学农业实验动物场有限公司 | — | 健康雄性比格犬；在标准条件下单笼饲养 |
| C 型臂 X 线透视系统 | GE Healthcare | OEC 9900 Elite | 用于导管插入术和血管造影过程中的透视引导 |
| 化学发光成像系统 | Bio-Rad | ChemiDoc XRS+ | 用于 Western 印迹条带可视化 |
| 肌酐 ELISA 试剂盒（犬用） | 南京建成生物工程研究所 | C011-2-1 | 用于血浆肌酐测定 |
| 带气囊的气管插管（内径 7.0–8.0 mm） | Covidien (Medtronic) | 86449 | 用于气管插管和机械通气 |
| DF-5A 心脏刺激器 | 苏州东方电子技术研究所 | DF-5A | 用于快速心房起搏；设置参数：基本周期长度 60 ms，脉宽 2 ms，电压为阈值的 4×倍 |
| ECL Western 印迹底物 | Thermo Fisher Scientific | 32106 | 增强型化学发光检测试剂盒，用于印迹显影 |
| EDTA 抗凝管 | BD Vacutainer | 367835 | 用于血液采集（血浆分离） |
| eNOS 一抗（兔源） | Cell Signaling Technology | 32027 | 稀释比例 1:1000；用于 Western 印迹（约 130 kDa） |
| 伊红 Y 溶液（水溶液） | Solarbio | G1100 | 用于 H&E 复染（2 分钟） |
| 导尿管（Foley 尿管，8 Fr） | C.R. Bard | 0165SI08 | 用于肌酐清除率（CCr）测定期间的定时尿液收集 |
| GAPDH 一抗（兔源） | Cell Signaling Technology | 5174 | 稀释比例 1:1000；作为 Western 印迹内参（约 36 kDa） |
| GraphPad Prism（版本 8.0） | GraphPad Software | — | https://www.graphpad.com；用于统计分析（单因素方差分析，Dunnett 检验） |
| 苏木精溶液（Harris 法） | Solarbio | G1140 | 用于 H&E 核染色（5 分钟） |
| 肝素钠注射液（未分级） | 常州千红生化制药 | H32022088 | 4000 IU 溶于 10 mL 生理盐水中；用于导管插入术期间抗凝 |
| HRP 标记山羊抗小鼠 IgG 二抗 | Cell Signaling Technology | 7076 | 稀释比例 1:5000；用于 Western 印迹 |
| HRP 标记山羊抗兔 IgG 二抗 | Cell Signaling Technology | 7074 | 稀释比例 1:5000；用于 Western 印迹 |
| hs-CRP ELISA 试剂盒（犬用） | Cusabio | CSB-E08557c | 用于血浆高敏 C 反应蛋白测定 |
| IL-6 ELISA 试剂盒（犬用） | R&D Systems | CA6000 | 用于血浆白细胞介素-6 测定 |
| ImageJ 软件（版本 1.53） | 美国国立卫生研究院 | — | https://imagej.nih.gov/ij/；用于 Western 印迹密度分析 |
| iNOS 一抗（兔源） | Abcam | ab178945 | 稀释比例 1:1000；用于 Western 印迹（约 130 kDa） |
| 乳酸林格液 | Baxter | 2B2324 | 静脉输液；操作期间以 5–10 mL/kg/h 速率输注 |
| 光学显微镜 | Olympus | BX53 | 用于 HE 染色肾组织切片的组织学检查 |
| 机械呼吸机（兽用） | Midmark | Matrx Model 3000 | 潮气量 15 mL/kg；呼吸频率 12–15 次/分钟 |
| 酶标仪 | BioTek | Synergy HTX | 用于 ELISA 在 450 nm 处的吸光度测定 |
| 中性缓冲甲醛（10%） | Solarbio | P1110 | 用于肾组织固定（24 小时） |
| NO ELISA 试剂盒（犬用） | 南京建成生物工程研究所 | A012-1-2 | 用于血浆一氧化氮测定 |
| 非离子型碘化对比剂（碘海醇） | GE Healthcare | Omnipaque 350 | 每次注射 5–8 mL，流速 3 mL/s，用于肾动脉血管造影 |
| PAI-1 ELISA 试剂盒（犬用） | Cusabio | CSB-E13043c | 用于血浆纤溶酶原激活物抑制剂-1 测定 |
| PAI-1 一抗（兔源） | Abcam | ab66705 | 稀释比例 1:1000；用于 Western 印迹（约 45 kDa） |
| 石蜡 | Leica Biosystems | 39601006 | 用于组织包埋 |
| PrimeScript RT 试剂盒 | Takara Bio | RR037A | 用于 RNA 逆转录为 cDNA |
| 蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合液 | Thermo Fisher Scientific | 78440 | 加入 RIPA 缓冲液中用于蛋白提取 |
| 脉搏血氧仪（兽用） | Nonin Medical | 9847V | 用于操作期间持续监测 SpO2 |
| PVDF 膜（0.45 μm） | Millipore | IPVH00010 | 用于 Western 印迹中的蛋白转膜 |
| 肾素 ELISA 试剂盒（犬用） | Cusabio | CSB-E08700c | 用于血浆肾素测定 |
| RIPA 裂解缓冲液 | Beyotime | P0013B | 含 50 mM Tris-HCl（pH 7.4）、150 mM NaCl、1% NP-40、0.5% 脱氧胆酸钠、0.1% SDS |
| 旋转式切片机 | Leica Biosystems | RM2235 | 用于切割 5 μm 厚的石蜡切片 |
| SDS-PAGE 凝胶制备试剂盒（12%） | Beyotime | P0012A | 用于蛋白质电泳分离 |
| 血清分离管 | BD Vacutainer | 367986 | 用于血液采集（血清分离） |
| 戊巴比妥钠 | Sigma-Aldrich | P3761 | 麻醉：静脉诱导剂量 20 mg/kg；安乐死剂量 150 mg/kg 静脉注射 |
| 分光光度计（NanoDrop） | Thermo Fisher Scientific | ND-2000 | 用于 RNA 纯度和浓度评估（A260/A280） |
| SYBR Green PCR 主混合液 | Applied Biosystems (Thermo Fisher Scientific) | 4309155 | 用于定量实时 PCR |
| 三导联心电监护仪 | Philips | IntelliVue MX40 | 用于持续心率和心律监测 |
| TM（血栓调节蛋白）ELISA 试剂盒（犬用） | Cusabio | CSB-E12913c | 用于血浆血栓调节蛋白测定 |
| TM 一抗（兔源） | Abcam | ab230010 | 稀释比例 1:1000；用于 Western 印迹（约 60 kDa） |
| TNF-α ELISA 试剂盒（犬用） | R&D Systems | CATA00 | 用于血浆肿瘤坏死因子-α 测定 |
| t-PA ELISA 试剂盒（犬用） | Cusabio | CSB-E08438c | 用于血浆组织型纤溶酶原激活物测定 |
| t-PA 一抗（兔源） | Abcam | ab157469 | 稀释比例 1:1000；用于 Western 印迹（约 70 kDa） |
| TRIzol 试剂 | Invitrogen (Thermo Fisher Scientific) | 15596026 | 用于从左心耳组织中提取总 RNA |
| 配备 3.5 MHz 相控阵探头的超声系统 | Philips | EPIQ 7C | 用于术前经胸超声心动图检查 |
| 尿素氮 ELISA 试剂盒（犬用） | 南京建成生物工程研究所 | C013-2-1 | 用于血浆尿素氮测定 |
| vWF ELISA 试剂盒（犬用） | Cusabio | CSB-E08437c | 用于血浆血管性血友病因子测定 |
| vWF 一抗（兔源） | Abcam | ab6994 | 稀释比例 1:1000；用于 Western 印迹（约 260 kDa） |