本文介绍了一种利用琼脂稀释法评估磷霉素与头孢曲松、美罗培南和庆大霉素联用对耐碳青霉烯类大肠杆菌（Escherichia coli）分离株协同活性的实验方案。结果显示，磷霉素与美罗培南和庆大霉素联用时具有协同作用，而与头孢曲松联用则未观察到协同作用。
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本文介绍了一种利用琼脂稀释法评估磷霉素与头孢曲松、美罗培南和庆大霉素联用对耐碳青霉烯类大肠杆菌（Escherichia coli）分离株协同活性的实验方案。结果显示，磷霉素与美罗培南和庆大霉素联用时具有协同作用，而与头孢曲松联用则未观察到协同作用。
由于针对碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌的治疗选择有限，联合治疗方案的重要性日益凸显。本研究旨在调查磷霉素耐药率，并评估磷霉素与美罗培南、庆大霉素及头孢曲松联合使用时对碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌的体外协同作用。 大肠杆菌 分离株。60株碳青霉烯类耐药 E. coli 从迪克大学医学院附属医院临床科室和重症监护病房患者获取的各种临床样本（尿液、血液、引流液、伤口、脑脊液、气管吸出物）中分离的菌株被纳入本研究。采用自动化微生物鉴定系统进行菌种鉴定。使用厄他培南、亚胺培南和美罗培南通过纸片扩散法进行抗生素药敏试验并确认碳青霉烯类耐药性。通过琼脂稀释法评估磷霉素耐药性及抗生素间的相互作用。此外，采用基于琼脂稀释法的方案，在连续两倍浓度梯度下评估抗生素联合作用，并计算部分抑菌浓度指数（FICI）以判定协同作用、无关作用或拮抗作用。磷霉素耐药率为76.6%，美罗培南为61.6%，庆大霉素为85.0%，头孢曲松为98.3%。在磷霉素–美罗培南组合中，35%的分离株观察到协同作用；在磷霉素–庆大霉素组合中为33.4%；在磷霉素–头孢曲松组合中为1.7%。仅在磷霉素–美罗培南组合中检测到一株出现拮抗作用。磷霉素与美罗培南及庆大霉素的联合在体外对耐碳青霉烯类大肠杆菌（E. coli）显示出协同活性。尚需进一步的体外研究以验证这些结果。
肠杆菌目（Enterobacterales）包含一组高度多样的革兰氏阴性杆菌，其中许多具有重要的临床意义1。在这些细菌中，Escherichia coli 是临床微生物学实验室中最常分离到的菌种，广泛与几乎所有器官系统的感染相关，包括尿路感染、伤口感染、免疫功能低下患者的肺炎、胃肠炎以及新生儿脑膜炎。它也是革兰氏阴性败血症和内毒素介导的感染性休克的主要病因之一。除了在人类医学中的重要性外，E. coli 也是一种重要的兽医病原体，可在多种动物物种（包括马类）中引起呼吸道和全身性感染，从而拓展了E. coli致病性在人类与动物宿主间的宿主范围视角2,3,4。
产超广谱β-内酰胺酶（ESBL）的肠杆菌目细菌，尤其是大肠杆菌（E. coli）和肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae），与病死率升高、住院时间延长以及医疗成本增加密切相关。抗生素的广泛使用是导致这些细菌产生多重耐药（MDR）的主要驱动因素1。其耐药机制包括碳青霉烯酶的产生、ESBLs、氨基糖苷类修饰酶（AMEs）、导致喹诺酮类耐药的基因突变，以及孔蛋白和外排系统的变化。在大肠杆菌和肺炎克雷伯菌中，耐药性主要由质粒介导，有利于基因的水平转移。动物源性大肠杆菌（包括牛源分离株）中此类耐药特征的报道也日益增多，支....
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本研究已获得迪克勒大学医学院非干预性临床研究伦理委员会的批准（决议编号：100，日期：2021年01月01日）。
以下方案描述了一种标准化的琼脂稀释棋盘法，用于评估磷霉素联合用药对碳青霉烯类耐药大肠埃希菌（E. coli）分离株的协同作用。
分离株的收集
在2021年2月15日至2021年12月15日期间，共纳入60株耐碳青霉烯类大肠杆菌（E. coli），这些菌株分离自迪克勒大学医学院附属医院住院患者的多种临床标本（包括尿液、血液、穿刺液、伤口、脑脊液和经气管吸出物）。菌种鉴定采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF）系统进行。若同一患者分离出多个菌株，则仅纳入首个分离株。门诊诊所的样本以及住院时间少于48小时的患者样本均被排除。在研究期间内，所有符合预设纳入标准的耐碳青霉烯类大肠杆菌分离株均被连续纳入；因此，样本量由符合条件的可用分离株总数决定，未进行事先的样本量计算。使用E. coli ATCC 13846和E. coli ATCC 25922作为质控菌株。质控菌株与临床分离株在相同的琼脂稀释条件下平行检测。所有实验均由两名独立观察者进行评估。质控菌株在所有实验中均表现出预期的生长抑制模式，未发现超出范围或无效的结果。
涉及临床分离物的所有操作均在生物安全二级（BSL-2）条件下进行。操作时穿戴适当个人防护装备（实验服、手套和眼部防....
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本研究共纳入60株耐碳青霉烯类的大肠埃希菌分离株。所有分离株均来自迪克勒大学医学院附属医院重症监护病房或临床科室的住院患者。成人患者占病例的83.3%，儿童患者占16.7%（表8和表9）。80%（n = 48）的分离株表现为多重耐药。
表8：分布情况 E. coli 按住院地点和年龄对分离株进行分类。 ICU = 重症监护室。 请点击此处下载此表格。
表9：按样本类型分布的E. coli分离株。 CSF = 脑脊液；ETA = 气管内吸出物。
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作者声明不存在利益冲突。
本研究由迪克大学科学研究项目协调单位（DÜBAP）资助，项目编号为 SBE.21.004。
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