生成具有明确刚度的聚丙烯酰胺和硅基胞外基质底物，用于细胞生物学应用

摘要

尽管细胞外基质（ECM）刚性是细胞行为的关键调控因子，但其潜在的感应和转导机制仍不明确。为此，我们提供了构建具有可调节刚度的聚丙烯酰胺和硅基基底的方案，以推进对细胞-ECM串扰的理解。

摘要

细胞外基质（ECM）是细胞行为的关键调节因子，其刚性是控制细胞信号传导、形态和命运的关键机械线索。然而，对刚度依赖细胞反应的实验研究通常受限于具有精确可调机械性能的可重复性、经济性和可获取的培养平台的可用性。该协议描述了基于聚丙烯酰胺（PA）和硅基的方法，用于制造具有可调刚度的ECM基底。该程序概述了底物准备、表面功能化及ECM蛋白结合，以确保细胞在生理相关刚度范围内的一致性粘附。基于PA的底物兼容下游生化检测，包括蛋白质和RNA提取，以及高分辨率荧光成像。硅基底物优化用于全内反射荧光（TIRF）显微镜，使细胞-ECM相互作用在基底膜上得以可视化。此外，软底物可以适应支持位于一致成像平面内的球状培养物，从而促进图像采集的一致性。这些方法为系统性探究ECM刚度如何调控细胞过程提供了坚实、经济且可重复的平台，推动了对细胞-ECM在生理和疾病环境中交互作用机制的理解。

引言

细胞外基质（ECM）是一个基本的结构和生化支架，定义了组织的机械性质并支持其生物功能。例如，肺部和动脉等弹性组织富含胶原蛋白和弹性蛋白的ECM，提供呼吸过程中反复拉伸-后坐力所需的机械弹性。相比之下，中枢神经系统含有富含糖胺聚糖的ECM，创造了一个高度顺应的环境，优化了神经元分化和信号传导¹。在身体不同组织中，组织僵硬度跨越了几个数量级，从大脑和肺部等软组织的数百帕斯卡，到肌腱和骨骼的巨帕和十帕斯卡硬度，^2,3。这些机械差异不仅是结构上的，还在调控细胞行为中起着关键^作用。例如，间充质干细胞经历刚度依赖的谱系指定，在软底物上采用神经元命运，在中间底物上采用肌生成命运，在坚硬底物上采用骨生成命运。ECM刚度的病理性变化还能驱动异常细胞反应，并促进疾病的发生和进展 ^7,8,9。同样，细胞周围ECM性质的变化也会影响细胞器功能和各种细胞行为（^10,11）。尽管ECM在引导信号传导、细胞器功能和疾病发病机制方面被公认为重要，但细胞感知并将ECM线索转化为生化信号的机制仍未完全明了。

对细胞-ECM串扰的理解部分受限于有限的实验平台，这些平台能够精确控制ECM特性，同时完全兼容标准生化检测和成像流程。此外，研究细胞-ECM相互作用常被视为技术挑战，因为它需要跨学科的材料科学、细胞生物学和生物工程专业知识。该方法旨在通过提供逐步生成具有明确机械性能的PA和硅基ECM基底的方案，解决这些挑战，这些材料可在大多数湿实验室环境中轻松制备。

具有可调刚性的PA水凝胶是机械生物学的主打;然而，其实用性常受ECM共轭试剂成本高昂、表面功能化不一致以及与大规模生化工作流程兼容性差所限制。此外，针对不同刚度基底的样品采集和成像的实用且标准化的方法尚未成熟。这些瓶颈可以通过我们描述的PA凝胶平台解决，该平台具有四大关键创新特点：（i）大幅降低成本，（ii）可重复的功能化化学，（iii）通过可重复使用的硬件实现可扩展生产，以及（iv）与许多传统细胞生物学和生化检测的无缝集成。该方法利用不同比例的丙烯酰胺和双丙烯酰胺生成具有不同机械性能的水凝胶 （见表1）。PA凝胶是惰性的，无法直接与ECM蛋白结合。因此，采用紫外线启动的自由基聚合反应，将由二甲基丙烷四丙烯酸酯、丙烯酸 N-羟琥酰亚胺酯（NHS-丙烯酸酯）和双丙烯酰胺组成的薄交联网络，结合到PA凝胶表面 （见图1）。该网络为ECM蛋白形成了双作用粘附面：NHS丙烯酸酯为ECM蛋白提供稳定的共价锚定，而四丙烯酸酯则促进均匀的ECM蛋白吸附¹²。此外，我们还提供了方法，展示了如何以兼容下游细胞生物学分析（如西部墨迹法和逆转录定量聚合酶链反应RT-qPCR）的方式，从这些底物中采集蛋白质和核酸（如RNA）。此外，所产生的顺应PA底物还支持球状体形成，并将球体置于一致的焦平面内，从而实现对三维细胞行为的系统分析¹³。

相比之下，PA水凝胶的光学限制限制了其在先进成像技术中的应用，特别是全内反射荧光（TIRF）显微镜¹⁴。为解决这一限制，我们开发了机械可调硅基ECM基板，专为TIRF成像优化。这些材料具有与玻璃高度匹配的折射率，同时在宽范围内保持可调刚性（见图2A）。在ECM共轭前，会在表玻璃上涂覆一层不同比例的硅胶胶层（见图2B和表2）。然而，硅胶本身的疏水性和化学惰性排除了直接的ECM共轭。因此，我们实施了表面修饰策略，使ECM配体能够实现共价连接。氧等离子体处理将羟基引入硅胶表面（图2C）。随后，（3-氨基丙基）三氧基硅烷（APTES）将这些羟基转化为活性胺。1-乙基-3-（3-二甲氨基丙基）盐酸羧二亚胺（EDC）是一种零长的羂亚亚胺交联剂，随后促进凝胶表面胺基与ECM蛋白上羧基之间形成共价酰胺键。

这些ECM平台共同提供了成本效益高、可重复且可扩展的系统，用于探测依赖于ECM的信令机制。其灵活性使得与生化检测、高分辨率成像和高通量工作流程无缝集成，能够研究ECM刚性如何影响细胞行为并驱动疾病进展。

方案

1. 基于PA的ECM水凝胶生成

1. PA凝胶附着玻璃表面的功能化
   注意：所有步骤均在轨道震动器室温下执行。每一步之间用高质量的水彻底冲洗。
   1. 用10%漂白剂在耐化学洗涤器皿（例如聚苯乙烯）中清洗玻璃表面3小时。使用足够的体积完全覆盖玻璃，确保没有气泡或干燥区域。
      注意：漂白剂是一种高度腐蚀性和反应性强的化学物质。遵循制造商的安全说明。
   2. 将盖片浸泡在0.2米盐酸（HCl）中，并用摇床轻轻搅拌，孵育16小时。
      注意：盐酸具有高度腐蚀性，可能导致皮肤灼伤。穿戴合适的个人防护装备。
   3. 加入0.1 M NaOH，孵育1小时。
      注意：氧化钠溶液具有腐蚀性，可能导致皮肤灼伤。穿戴合适的个人防护装备。
   4. 将盖套在0.5%APTES含量的高品质水中孵育30分钟。
      注意：APTES有毒。在排风柜里与APTES合作，配备合适的个人防护装备。
   5. 用大量水冲洗盖套，去除残留的APTES。
      注意：洗涤不完全会导致APTES与戊二醛发生反应，产生白色沉淀，从而影响玻璃表面的活化。
   6. 将盖层浸入0.5%戊二醛PBS中孵育1小时。
      注意：戊二醛有毒。在排气柜中使用戊二醛，配合适当的个人防护装备。
   7. 将套片用吸水材料（如纸巾）晾干一夜。将套套放入干净密封的容器中保存，直到使用。
2. PA水凝胶溶液的制备与凝胶铸造
   注意：获得符合指定弹性模量的水凝胶所需的配方见 表1。不同实验应用的推荐凝胶体积和玻璃尺寸见 表3。
   1. 将PA水凝胶成分混合在1.7毫升微离心管中，排除过硫酸铵（APS）和四甲基二胺（TEMED）。
      注意：不要制备大量，因为高刚度的凝胶聚合迅速，可能在铸造完成前硬化。
   2. 在真空腔体内以25 mmHg进行30分钟的除气，使用PA凝胶混合物、APS和TEMED管。
   3. 用棉签在防水盖套上涂防水涂层来准备疏水性上盖套。确保封面套片无污渍，以保持凝胶聚合的一致性。
   4. 将APS和TEMED加入脱气溶液中，然后轻轻移液器将混合物移液到活性盖片上。
   5. 将疏水盖片覆盖在溶液上，形成均匀薄的水凝胶层。让凝胶在室温下聚合35分钟。确保盖片之间没有气泡，溶液也不会溢出边缘。
      注意：请遵循凝胶铸造推荐的体积以确保厚度适中;过薄的凝胶使细胞能够感知下面的玻璃¹⁵。在拆解凝胶夹层之前，检查微离心管内残留的混合物以确认聚合。
   6. 将水凝胶夹层浸入PBS中分离层。确保水凝胶保持附着在激活的底部盖片上，疏水的顶盖套片能轻松脱落。
3. 利用ECM配体功能化水凝胶
   注意：本节所有步骤必须在生物安全柜内的无菌条件下完成。
   1. 将水凝胶浸入70%乙醇中进行灭菌，然后转移到带有无菌PBS的组织培养塑料器皿中。
      注意：不要长时间将水凝胶浸泡在乙醇中，因为这会使凝胶脱水并影响ECM结合。
   2. 制备由水、乙醇、HEPES和双克里酰胺组成的主混合官能化溶液（见表4）。
      注意：双丙烯酰胺吸入或摄入时有毒。
   3. 制备稀释的紫外光起始剂和四丙烯酸盐溶液。两种试剂均溶解于乙醇中（见表4）。
      注意：每次都进行四丙烯酸连续稀释，因为过量可能导致过度聚合和可见的黑色表面沉积（见 图3A）。
   4. 用分析天平称重所需的NHS丙烯酸盐量。使用前应将NHS-丙烯酸盐重新浸泡在50%乙醇/50%水中。
      注意：过量的NHS-丙烯酸盐会导致可见的黑色表面沉积物形成，并可能导致ECM涂层不均匀（见图3B）。
   5. 在步骤1.3.2中准备的主混合液中加入紫外光光起始剂、四丙烯酸酯和NHS-丙烯酸溶液。抽取PBS并加入主混合液，确保完全覆盖。
   6. 将水凝胶（无组织培养皿盖）暴露在紫外线下400秒（波长小于365纳米的紫外光源）。
      注意：使用紫外线时请佩戴合适的护目镜。
   7. 取出凝胶并放入冰块。抽取功能化溶液，然后用预冷的无菌25 mM HEPES（pH 6.0）洗涤胶三次，再用预冷无菌0.9% NaCl洗三次。
   8. 将水凝胶与选择的ECM配体一起在预冷的无菌100 mM HEPES（pH 8.0）中，含有100 mM NaCl，在轨道摇篮下以4°C的温度在轨道振动器下孵育一夜。
      注意：ECM配体的浓度可由用户自行选择;然而，在同一批次内，保持所有不同刚度底物配体浓度相同的至关重要。
   9. 16小时后仔细抽取ECM配体溶液。用PBS洗涤水凝胶三次，并加入无精华液的基质（或称PBS）以保持水分。在细胞播种前，将凝胶在组织培养箱中孵育一夜以确认无菌性。
      注意：如果存在污染，培养基在37°C的培养基中过夜孵育后，培养基将呈现浑浊。
   10. 立即使用凝胶进行细胞播种，或将其存放在4°C的基础培养基中，保存时间不超过3周。

2. 机械可调硅基ECM基底的生成

1. 用于硅胶涂层的玻璃盖片制备
   1. 用3M氢氧化钠清洗玻璃套20分钟。
   2. 用高质量的水彻底清洗五次，最后吸入水。让烟干，并用氮气喷射去除残留的水滴或杂物。
2. 硅胶凝胶的制备
   1. 根据 表2中指定的重量比，使用分析天平称重两组分硅橡胶弹性体的A和B组分。用剪下的移液器吸取粘稠溶液。
   2. 用移液器尖端彻底混合组分A和组分B，确保完全掺入。
   3. 在真空腔室中以25 mmHg排气10分钟。
3. 凝胶铸注在玻璃封套上
   1. 将覆盖套放在置于脱水机上的橡胶垫上，确保其置中。
      注意：橡胶垫能确保真空密封。如果密封不够，盖片可能会移位并破裂。置中不当可能导致涂层不均匀。
   2. 启动吸尘器以固定盖套。
   3. 在盖片中心加入100微升胶状混合物。以500转/分钟喷涂10秒，随后8000转/分钟60秒。
   4. 将涂层覆盖套在80°C下烘烤2小时。让它冷却到室温。
      注意：使用前应在室温下保存最长一个月。
4. 硅胶凝胶与ECM配体的功能化
   1. 将硅胶涂层的盖片暴露在氧气等离子体下，功率为11瓦，持续5分钟。
      注意：氧等离子体暴露时间较长或功率过高可能导致凝胶开裂。根据所用设备，可能需要测试功率和时间的最佳组合。
   2. 制备含95%乙醇、0.5%APTES和4.5% dH_2O的硅化溶液。
      注意：所有后续步骤均在生物安全柜内的无菌条件下进行。
      注意：APTES有毒。在排风柜里与APTES合作，配备合适的个人防护装备。
   3. 将涂有凝胶的盖层与硅酸化溶液一起孵育10分钟。
   4. 用PBS彻底清洗五次。
   5. 制备含有100 μg/mL EDC和所选ECM的ECM溶液，浓度为PBS。
      注意：EDC在溶液中不稳定且对湿度敏感。使用前应新鲜处理，密封在凉爽干燥、避免潮湿和阳光直射的地方保存。
      注意：EDC如果吞下有害，吸入则有毒。穿戴合适的个人防护装备，并在排风柜内工作。
   6. 将盖层浸液与ECM溶液在37°C下孵育1小时，或在4°C过夜。
   7. 用PBS清洗封面五次。用基底冲洗后加入细胞。
      注意：最佳细胞密度取决于具体细胞系和实验目标（例如形态学的亚汇合层或细胞间粘附的单层）。例如，成纤维细胞常采用0.1 x 10⁶ cells/² 的密度，以在48小时内实现50%的汇聚度。

3. 准备用于免疫染色和成像的ECM底物

1. 基于PA基底物的免疫染色与成像
   注意：18毫米PA水凝胶通常提供足够的可成像区域进行定量分析。用于成像应用时，将水凝胶铸造，并在由15毫升管制成的“橙色腔体”中进行免疫染色。只要保持结构完整性，橙色腔体可重复使用多次凝胶铸造和染色。
   1. 用18毫米外径和14毫米内孔冲子，用聚碳酸酯薄膜和硅橡胶薄膜冲孔，准备垫片和垫片。
   2. 用剪刀在15毫升离心机管盖中央切开一个开口，形成一个用于凝胶铸造和染色的腔室。
   3. 看到离心管在14毫升处。用手术刀修剪不平整的边缘，并锉刀盖边，确保能装进标准的12孔板。
   4. 组装水凝胶-盖层夹层（如第1节所述），将间隔环放置在激活的盖层上。
   5. 胶体完全聚合后拆解三明治。
   6. 对18毫米水凝胶进行灭菌，并将其转移到带有无菌PBS的12孔组织培养板上。
   7. 按照第1节描述执行ECM配体功能化。
   8. 种子细胞，并用4%甲醛固定。
      注意：避免使用含酒精的定画剂，因为它们会使凝胶脱水并损害结构完整性。
      注意：甲醛有毒，必须始终在排气柜内使用。
   9. （可选）将样品重新组装到离心管盖腔体内。用硅胶垫圈密封膛室。
      注意：染色前使用PBS进行漏水测试数小时。虽然这种方法看起来更为繁琐，但它促进了均匀的染色并减少抗体消耗。
   10. 按照用户偏好的方案进行免疫荧光染色。
   11. 染色后，将样本储存在补充50%甘油的PBS中。尽快成像样本。
       注意：避免使用易硬化的标准装载介质，因为它们可能随着时间推移开裂水凝胶并损坏样品。荧光强度随时间减弱;为最佳信号质量，需在一周内完成图像。
   12. 在组织培养皿的玻璃底表面滴一小滴PBS（或装载介质）。小心地将染色的水凝胶倒置在滴液上，使细胞面向盖玻，然后进行成像。
2. 硅基ECM基板上的免疫染色与成像
   1. 用4%甲醛定色样品，并直接在玻璃底盘上染色，采用标准免疫荧光法。避免使用含酒精的定画剂，因为它们会破坏ECM基底。
   2. 直接使用传统荧光显微镜成像样品。

4. 从ECM底物上板的细胞中采集蛋白质和RNA

1. 使用产钳，小心取出培养皿中的凝胶，浸入无菌PBS中以冲洗残留培养基和血清。
   注意：请轻柔使用封套，因为它们非常脆弱，容易断裂。
2. 用低绒毛湿巾轻轻拍打水凝胶边缘，去除多余的PBS。
3. 在组织培养皿的盖子上加入适当体积的RNA提取缓冲液。
   注意：基于酚-鸟嘌呤的试剂与从PA凝胶中提取RNA是兼容的。根据实验需求，可以使用蛋白质裂解缓冲液。在裂解缓冲液培养后，用显微镜观察样本，以确保细胞完全破坏。
4. 将盖膜（凝胶面朝下）放在溶解液上。小心地多次提起和放下水凝胶，以确保所有细胞均匀裂解。
5. 轻轻刮除凝胶表面以释放裂解液。
   注意：不要使用商业塑料电池刮刀，因为硬塑料可能会损坏软水凝胶，并用凝胶块污染裂解液。用于制作垫片的软塑料（见步骤3.1.1）适合此目的，且可重新利用用于定制刮刀。
6. 将RNA或蛋白质裂解液储存在-80°C，等待采用传统生化方法进一步加工或立即使用。

5. 单平面球体培养的生成

1. 将75 Pa PA水凝胶装在18毫米的盖层玻片上，并用基底膜提取物（BME）或其他合适的ECM配体功能化表面，以促进细胞附着。
2. 将细胞以所需密度将细胞撒在ECM涂层的水凝胶或硅胶上。
3. 2小时后，轻轻取出未连接的细胞，并加入一层稀释于预冷基础培养基中的生物医学（BME）覆盖层。
   注意：生物医学工程在升温时会聚合。移液前先预冷。所采用的BME比例取决于最终三维支架所需的机械完整性和稳定性。
4. 在37°C的组织培养箱中培养培养1.5小时，以便进行生物生物医学（BME）聚合。
5. 轻轻加入细胞培养基，完全覆盖3D凝胶。
6. 保持培养物在标准条件下。细胞将随着时间继续生长并自我组装成三维球体，直到达到预期的实验终点。

结果

使用 表1 中配方生成的PA凝胶刚度通过电变仪进行了实验测试。选定了标称刚度值为0.4 kPa、6 kPa和60 kPa的凝胶，涵盖三个数量级。测量的刚度值为400 Pa凝胶的363±76 Pa，6 kPa凝胶的6.41±0.50 kPa，60 kPa凝胶的36 ± 8 kPa（见图4A）。为评估PA凝胶的ECM均匀附着情况，荧光标记的纤内凝蛋白接合于凝胶表面。每个凝胶拍摄了五个随机视场，并量化了平均荧光强度。涂覆0.4 kPa和6 kPa的荧光标记纤维联素凝胶相比未标记纤联素的凝胶，其荧光强度更高。每种凝胶的五个不同区域的荧光强度一致，表明表面共轭均匀（见图4B）。

为评估细胞对底物硬度的反应，A549肺腺癌细胞在纤维神经内分泌素涂层的PA凝胶上培养，硬度范围为0.4 kPa（正常）至13.8 kPa（病理性）。这些数值分别被选为代表健康和病理性硬化的纤维化肺组织，¹⁶

讨论

上述ECM制造协议提供了可重复、可扩展且经济高效的工作流程，且大多数实验室都能轻松实现。尽管传统的玻璃和塑料培养器皿方便且能快速收集数据，但合成底物无法复制生理相关组织的刚性。其他机械可调底物如聚二甲基硅氧烷（PDMS）或明胶甲基丙烯酰（GelMA）更容易制造，但通常无法达到亚千帕级的刚度值，限制了其在脑部和肺部等软组织建模的适用性^19,20。相比之下，PA水凝胶和硅胶的刚度值涵盖了广泛的组织力学，支持简单的配体共轭，同时仍兼容多种基于细胞的检测方法。此外，该方法比目前昂贵但方便的Sulfo-SANPAH方法更便宜。

虽然这些仿ECM支架能够精确控制ECM刚度，但仍存在若干重要限制。首先，PA基和硅基底物均不可降解，无法重现体内发生的动态ECM重塑 。 由于细胞-ECM串扰高度依赖于这种重塑，这些系统的静态特性可能影响某些信号通路，解读结果时应予以考虑。此外，原生ECM高度异质化;...

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
(3-氨基丙基)三乙氧基硅烷 (APTES)	919-30-2	-	Thermo Fisher Scientific
1.7 mL 微离心管	-	LMCT1.7B	FroggaBio
12孔组织培养处理板	-	83.3921	Sarstedt
15 mL 离心管（用于橙色室）	-	CLS430790	Corning
2-羟基-4'-(2-羟乙氧基)-2-甲基丙氧基二苯甲酮（Irgacure）	106797-53-9	-	Thermo Fisher Scientific
2% 丙烯酰胺溶液	110-26-9	-	Bio-Rad
3-(3-二甲氨基丙基)-1-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）	25952-53-8	-	Chem Impex International
4',6-二氨基-2-苯基吲哚二盐酸盐	28718-90-3	-	Sigma
4',6-二氨基-2-苯基吲哚二盐酸盐（DAPI）	-	D1306	Invitrogen
40% 丙烯酰胺溶液	01/06/1979	-	Bio-Rad
50% 戊二醛	111-30-8	-	Thermo Fisher Scientific
6厘米组织培养处理皿	-	83.3901	Sarstedt
A549细胞	-	CCL-185	ATCC
丙烯酸N-羟基琥珀酰亚胺酯	38862-24-7	-	Thermo Fisher Scientific
Alexa Fluor 488山羊抗兔抗体	-	A11008	Invitrogen
Alexa Fluor 594 NHS酯（三（三乙基铵盐））	-	A37572	Invitrogen
过硫酸铵	7727-54-0	-	Bio-Rad
透明抗冲击聚碳酸酯薄膜（0.005英寸；垫片）	-	85585K72	McMaster-Carr
CY 52-276硅胶，A和B组分	2624028	-	Dow
Dulbecco's改良鹰氏培养基（DMEM）	-	11995-065	Thermo Fisher Scientific
无水乙醇	64-17-5	-	Greenfield Canada
Fast SYBR Green Master Mix	-	4385612	Thermo Fisher Scientific
胎牛血清	-	A52567-01	Thermo Fisher Scientific
纤连蛋白	-	356008	Corning
甲醛（16%）	-	28908	Thermo Fisher Scientific
HEPES	7365-45-9	-	BioShop
高温硅胶橡胶片（0.020英寸；垫片）	-	86435K452	McMaster-Carr
盐酸	7647-01-0	-	BioShop
大孔空心打孔工具套装	-	66000	Mayhew Pro
Matrigel	-	356234	Corning
培养基储存玻璃瓶，250毫升	-	CLS1395250	Corning
培养基储存玻璃瓶，500毫升	-	CLS1395500	Corning
MicroAmp Fast Optical 96孔反应板	-	4346906	Thermo Fisher Scientific
显微镜载玻片盖玻片，18毫米直径	-	72222-01	Electron Microscopy Sciences
显微镜载玻片盖玻片，50毫米直径	-	1.84E+16	eBay
PBS（1倍）	-	14190144	Thermo Fisher Scientific
PBS（10倍）	-	70011044	Thermo Fisher Scientific
球蛋白	17466-45-4	-	Biotium
磷酸化FAK（Tyr397）抗体	-	85567	Cell Signaling Technology
磷酸化MLC（Ser19）抗体	-	3671	Cell Signaling Technology
等离子体清洁器	-	PDC-32G	Harrick Plasma
qPCR引物（正向和反向）	-	N/A	Integrated DNA Technologies
qScript cDNA合成工具包	-	95047	QuantaBio
Rain-X	-	-	Rain-X
螺旋盖管，锥底，15毫升	-	62.554.101	Sarstedt
螺旋盖管，锥底，50毫升	-	62.547.205	Sarstedt
10毫升生物学量筒	-	170356N	Thermo Fisher Scientific
25毫升生物学量筒	-	170357N	Thermo Fisher Scientific
5毫升生物学量筒	-	170355N	Thermo Fisher Scientific
50毫升生物学量筒	-	170358N	Thermo Fisher Scientific
氢氧化钠	1310-73-2	-	BioShop
SYPRO Ruby蛋白质凝胶染色	-	S12000	Invitrogen
TEMED	110-18-9	-	Bio-Rad
TRIzol试剂	-	15596026	Thermo Fisher Scientific
UV室	-	165-5031