本研究评估血清基质金属蛋白酶-12（MMP-12）和肿瘤钙黏蛋白-13（CDH13）作为肺癌的互补生物标志物。这些标志物与分子亚型、治疗反应及生存率相关，支持其在肺癌亚型分类、治疗分层和预后评估中的潜在应用。
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本研究评估血清基质金属蛋白酶-12（MMP-12）和肿瘤钙黏蛋白-13（CDH13）作为肺癌的互补生物标志物。这些标志物与分子亚型、治疗反应及生存率相关，支持其在肺癌亚型分类、治疗分层和预后评估中的潜在应用。
肺癌仍然是全球癌症相关死亡的主要原因，这在很大程度上归因于其生物学异质性、频繁的晚期诊断以及全面分子检测的局限性。单一生物标志物通常不足以指导临床决策，凸显了对能够整合全身和肿瘤特异性生物学信息的互补性且临床可行的指标的需求。在这项单中心队列研究中，共纳入262例肺癌患者。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清基质金属蛋白酶-12（MMP-12）水平，并通过免疫组织化学（IHC）结合经验证的免疫反应评分（IRS）评估肿瘤中钙黏蛋白-13（CDH13）的表达。分子亚型信息来自常规临床检测，使用多变量逻辑回归和Cox回归模型评估其与治疗反应及生存结局的关联。MMP-12与CDH13在不同分子亚型中的分布呈相反趋势（P < 0.001），表皮生长因子受体（EGFR）/间变性淋巴瘤激酶（ALK）改变的肿瘤表现为较低的MMP-12和较高的CDH13，而KRAS突变型及野生型肿瘤则呈现相反模式。程序性死亡配体1（PD-L1）表达水平较高始终与MMP-12升高和CDH13降低相关（所有P < 0.05）。MMP-12水平升高独立地与较低的客观缓解率（ORR）（校正后比值比[OR] = 0.662，P < 0.001）以及较差的生存结局相关（无进展生存期[PFS]风险比[HR] = 1.382；总生存期[OS] HR = 1.421；两者P < 0.001）；而CDH13水平较高则预测更好的治疗反应（校正后OR = 1.201，P < 0.001）和更优的生存结局（PFS HR = 0.884；OS HR = 0.862；两者P < 0.001）。联合的高MMP-12/低CDH13特征可识别出预后显著更差的一组患者（PFS HR = 2.281；OS HR = 2.506；P < 0.001）。这些发现表明，血清MMP-12和肿瘤CDH13可能作为肺癌分子分型、治疗分层和预后评估的互补性生物标志物。
肺癌仍然是全球主要的健康负担，2022年全球新发病例近250万例，死亡病例约180万例1。尽管在筛查、影像学和系统性治疗方面取得了显著进展，但由于肺癌具有高度的生物学异质性，且常在晚期才被诊断，许多患者的生存期仍然有限2,3,4,5。因此，精准肿瘤学已成为当代肺癌诊疗的核心，尤其是在非小细胞肺癌（NSCLC）中，可靶向的驱动基因变异定义了具有不同自然病程和治疗敏感性的分子亚型6。临床实践指南推荐对晚期疾病进行广泛的分子谱检测，包括EGFR、ALK、KRAS、ROS1、BRAF、MET外显子14跳跃突变、RET、ERBB2（HER2）以及NTRK融合，同时评估PD-L1等免疫生物标志物7,8,9,10。这些进展已显著改善了特定人群的预后，但也带来了新的临床瓶颈。组织样本可能不足以完成全面检测，检测周转时间可能延迟治疗决策，且不同医疗....
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所有操作均符合机构和国家规定，并经邢台市人民医院伦理委员会批准（编号：2024-124）。由于使用的是常规收集的临床数据和剩余样本，因此豁免了书面知情同意的要求。所有数据在分析前均已匿名化处理。
研究设计、实施地点及总体示意图
本研究为一项单中心观察性队列研究，旨在评估血清MMP-12和肿瘤CDH13在肺癌分子分型及个体化治疗中的临床意义，分别及其联合应用的价值。研究在邢台市人民医院开展。纳入2021年1月至2022年6月期间收治的符合条件的患者，共连续入组262例符合预先设定的纳入和排除标准的患者。
整体研究流程如图1所示。该示意图展示了从患者识别到分析的完整过程，包括患者筛选与入组、基于常规临床检测获得的基线临床病理学特征和分子谱分析、治疗前血清的采集与处理、用于CDH13免疫组织化学的肿瘤组织制备、血清MMP-12的定量检测、CDH13免疫反应评分、一线治疗的分类及后续治疗路径，以及包括治疗反应、无进展生存期和总生存期在内的纵向结局评估。该示意图区分了诊断与分子分型分析和治疗与结局分析，并标明了生物样本采集、分子检测结果生成、治疗启动以及随访评估的时间点。
受试者筛选、入组标准及临床数据提取
在预设的入组时间段....
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队列构建与分子亚型分布
总体研究流程见图1。共纳入262例连续的肺癌患者，并根据临床上具有重要意义的分子亚型分为四类：EGFR（n = 92）、ALK（n = 48）、KRAS（n = 54）和野生型（n = 68）。各亚型之间的基线临床病理特征存在差异（表1）。携带EGFR和ALK变异的患者平均年龄低于KRAS和野生型组患者（P = 0.006）；而男性性别和吸烟暴露在KRAS和野生型肺癌中明显更为常见（两者均P < 0.001）。晚期（III–IV期）疾病在整体队列中占主导地位，但在KRAS和野生型患者中更为普遍（P = 0.021）。高PD-L1表达（TPS ≥ 50%）在KRAS和野生型肿瘤中也更常见（两组均约半数患者），而EGFR和ALK驱动的肿瘤中则较少见（P < 0.001）。
血清MMP-12和肿瘤CDH13在分子与免疫分层中的分布<.......
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本研究评估了血清MMP-12与肿瘤CDH13作为整合生物标志物在支持肺癌分子亚型临床解读及治疗分层中的互补作用。该核心假设源于这两种生物标志物的生物学功能互补性：MMP-12是一种循环蛋白酶，反映免疫-间质重塑和肿瘤侵袭性；CDH13则是一种组织源性肿瘤抑制因子，与表观遗传调控和上皮可塑性相关26,27,28,29,30。通过整合系统性与局部肿瘤生物学信息，我们旨在解决精准肿瘤学中若干尚未满足的关键需求，包括组织样本稀缺、分子检测结果延迟以及单一生物标志物预测能力不足等问题，同时提供可扩展且符合临床应用的检测方法，以补充现有的基因组和免疫标志物（如EGFR、ALK和PD-L1）。该策略符合当前日益形成的共识，即需要多维度生物标志物组合来全面捕捉肿瘤内在因素与微环境因素之间的复杂相互作用，从而影响治疗反应和临床结局。.......
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作者声明不存在利益冲突。
我们衷心感谢邢台市人民医院的医护人员在患者招募、临床数据收集和生物样本处理方面所提供的支持。本研究由邢台市重点研发计划项目（编号：2024ZC116）资助。
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| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 抗体，抗CDH13（T-钙黏蛋白） | Abcam，英国剑桥 | ab15126 | 免疫组织化学一抗；已验证适用于石蜡包埋组织 |
| 高速冷冻离心机 | Eppendorf，德国汉堡 | 5424 R | 用于血清分离和样品澄清 |
| DAB底物试剂盒 | 中杉金桥，中国北京 | ZLI-9017 | 用于免疫组织化学的显色检测 |
| ELISA酶标仪 | BioTek Instruments，美国维努斯基 | ELx800 | 用于在450 nm波长下读取吸光度，并进行参比校正 |
| 中性缓冲福尔马林（10%） | 国药集团化学试剂有限公司，中国上海 | 10009218 | 用于活检及手术组织标本的固定 |
| 苏木精-伊红染色试剂盒 | 索莱宝，中国北京 | G1120 | 用于免疫组织化学切片的复染及质量控制 |
| 人MMP-12 ELISA试剂盒 | Abcam，英国剑桥 | ab246533 | 用于血清基质金属蛋白酶-12的定量检测 |
| 明场显微镜 | 尼康，日本东京 | Eclipse E200 | 用于CDH13免疫染色结果的评估与评分 |
| 切片机 | 徕卡生物系统，德国韦茨拉尔 | RM2235 | 用于对石蜡包埋组织进行3–4 µm厚度切片 |
| 封片介质 | 索莱宝，中国北京 | S2100 | 用于免疫组织化学染色后切片的永久封片 |
| 石蜡包埋工作站 | 徕卡生物系统，德国韦茨拉尔 | EG1150 | 用于石蜡包埋组织块的制备 |
| 磷酸盐缓冲液（PBS） | Gibco，赛默飞世尔科技，美国 | 10010023 | 用于免疫组织化学染色过程中的洗涤步骤 |
| 聚合物检测系统 | 迈新生物，中国福州 | DAB-0031 | 免疫组织化学二抗检测试剂盒 |
| R统计软件 | 统计计算基金会，奥地利维也纳 | 版本 4.3.0 | 用于统计分析与建模 |
| 血清分离管 | BD Vacutainer，美国富兰克林湖 | 367988 | 用于外周静脉血采集 |
| SPSS统计软件 | IBM公司，美国阿蒙克 | 版本 26.0 | 用于连续型和分类数据的统计分析 |
| 冻存管 | 康宁公司，美国康宁 | 430488 | 低吸附冻存管，用于血清样本分装 |
| 水浴锅（用于抗原修复） | Grant Instruments，英国剑桥 | JBN26 | 在抗原修复过程中维持恒定温度 |
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