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本研究按照PRILE指南（补充文件1）进行和报告，整体实验工作流程总结于PRILE流程图（补充文件2）。
样本选择
注意： 拔除的人类牙齿可能构成生物危害。所有样本应使用适当的个人防护装备（PPE），包括手套、口罩和防护眼镜。按照机构和地方法规，将所有生物废弃物置于指定的生物危害容器中。
该研究方案已获得当地机构审查委员会（MIU-IRB-2122）批准。基于Baranwal等人 （8 ）的G*功率（v3.1.9.7）进行的检验力分析确定，每组12个样本量可提供80%的检验力，基于效应值为0.586的显著差异。从Misr国际大学口腔颌面外科采集了24根新鲜拔除的单根永久下颌前磨牙（Vertucci I类），根部直且成熟。这些牙齿是出于与本研究无关的正畸或牙周原因被拔除的。拔牙后立即使用牙周刮牙器去除粘附的软组织或牙结石，并在流水下清洗牙齿。为确保消毒和保持水分，样本被保存在0.1%百里醇溶液中，温度为4°C，直到使用。牙齿在8倍放大镜下进行检查;有骨折、既往根管治疗、钙化或吸收性病变的患者被排除在研究之外。
样品制备
注意：处理所有牙髓锉、针头和钻石片时，请使用合适的锐器容器。
牙冠通过高速金刚石片水冷去除，以标准化根长。工作长度（WL）通过插入一个10号K銼，直到在顶孔可见，然后减去1毫米确定。运河预先用HyFlex EDM滑道文件（10/.05）在400× 克下进行扩口。仪器安装使用HyFlex EDM OneFile（25/可变锥度）完成，达到全光谱。
最终灌注方案采用17%EDTA，后加2.6%NaOCl。
注意：按照实验室安全标准，将化学灌溉废物丢弃在适当标记的化学废物容器中。每个溶液通过配备20号、0.02锥度银镍激活器尖端的超声单元进行超声激活30秒。尖端位于WL前方2毫米处，以中功率（约45 kHz）在被动超声波灌溉（PUI）模式下工作，确保尖端自由振动且不会与管道壁壁紧密接触。
闭合协议
样本通过Microsoft Excel生成的计算机序列随机分配到两组（n=12组），以确保分布无偏。
- SC集团：运河被纸尖干了。NeoSealer Flo通过制造商的管内尖端注入管道的冠状三分之一区域，随后一层25号HyFlex EDM主锥覆盖一层薄密封剂，缓慢地嵌入WL。
- CLC组：将0.02锥度的主锥浸入密封剂并安装到WL上。一个25号的指扩张器插入到距离WL不到1毫米的位置，以在侧面创造空间。辅助锥体（细至细）涂覆密封剂，并用同一扩散器横向压实，直到通道充满。
入口被卡维特封闭。通过数字口内传感器和65 kV、7 mA的X射线单元进行放射摄影验证，确认了闭合质量和空洞缺失。从两种正交角度（口舌和近侧远端）拍摄了X光片，以确保对填充密度的三维评估。这些图像在2倍放大镜下进行了分析。样品在37°C、100%湿度下保存14天，以确保密封剂完全固化。
再治疗
重新处理是通过ProTaper通用重处理文件（D1、D2和D3;瑞士巴莱格的登茨普利西罗纳）。在去除大部分填充材料后，使用ProTaper Next銼刀X2（尺寸25，锥度0.06）和X3（尺寸30，锥度0.07）进一步放大，压力为500× 克 ，扭矩2.0牛刻米。每根銼间用30号侧通针进行5.25%NaOCl灌溉。
再治疗的临床终点定义为X3锉刀达到完整工作长度，且在8倍放大镜下检查锉刀槽无可见填充物残留物的时刻。该标准代表了该手术的标准化临床“终点”。然而，这并不意味着完全消除管内所有填充物，因为显微镜残留物常常存在于牙本质不规则处，并在立体显微镜评估阶段被量化。
手术复处理时间以分钟和秒计，使用数字秒表记录。计时间隔从第一个再处理锉刀（D1）接触冠状胶的那一刻开始，并在灌溉、更换锉刀和清洗笛子时暂停，以确保仅捕捉到仪器的活跃时间。当最终顶端銼（X3）达到既定工作长度时，时间结束。
立体显微镜评估
每个根部通过在颊面和舌面上利用水冷的金刚石盘在颊面和舌面开凿两条浅沟（约0.5毫米深）来进行纵向劈裂。然后用无菌凿子的刀片插入沟槽，用木槌轻敲，将根部劈开。每半部均以8倍放大拍摄。图片被导入到 ImageJ。为了确保测量标准化，软件的测量刻度首先进行了校准。通过选择“直线”工具在拍摄的物理尺上画线，然后打开“设置比例”对话框输入已知距离（1毫米），将像素转换为毫米（毫米2毫米）来实现。接着，使用“多边形选择”工具手动描绘根管总空间的精确周长，以计算根管总面积。随后，同一工具被用来追踪所有可见的残留海豹和古塔胶岛屿的边界，以计算它们的总总面积。剩余填料的百分比通过将残留物总面积除以运河空间总面积，再乘以100计算得出。
根据Sherif等人9，基于以下评分系统评估了三个根级——冠状根、中根和顶根的残余物。鉴于立体显微镜分析的局限性，未尝试区分古塔胶和封口剂;因此，所有残留的碎屑统称为“残余填充材料”。
统计分析：
所有分析均使用本研究生成的完整原始数据集（补充文件3）。序数数据以频率和百分比值表示。数值数据以均值和标准差值的形式呈现。使用Shapiro-Wilk检验检验数据的正态性，结果发现数据不呈正态分布。在每个根三分之一的组间比较中，采用了Mann-Whitney U检验。在组内三个根级（冠状、中和顶端）进行比较时，采用了Kruskal-Wallis检验，随后进行了Dunn的事后检验以进行两两比较，发现显著差异。为考虑多重剖面比较并降低I型错误风险，采用了Bonferroni修正，相应调整显著水平。显著水平设定为 P < 0.05。统计分析使用R统计分析软件4.3.1版（Windows版）进行（材料表）。