在细胞通道中分离并表征牙髓干细胞来源的外泌体

摘要

该协议提出了一套标准化的工作流程，用于分离和表征跨通道的牙髓干细胞（DPSC）来源外泌体，从而实现再生应用中外泌体质量和功能活性的可重复评估。

摘要

牙髓干细胞（DPSC）是间充质干细胞的一种可获得且临床相关性的来源，其衍生的外泌体已成为组织工程和再生医学中无细胞应用的有前景的生物活性囊泡。然而，用于分离和功能验证DPSC衍生外泌体的可重复且标准化的方法仍然有限，尤其是在细胞扩容过程中引入的变异性方面。本文介绍了一套全面、标准化、基于试剂盒的工作流程，用于从DPSC调制培养基中分离和纯化外泌体，且该流程与常规实验室操作兼容。该方法能够稳定回收完整囊泡，适用于形态学、分子和功能特征分析，采用常用技术。外泌体身份基于形态、大小分布和标志物表达评估，生物活性则通过定义的体外抗炎检测法进行评估。为研究传代相关效应，利用该功能读数比较不同DPSC传代的外泌体，为评估细胞扩增期间的一致性提供了实用框架。通过将分离、纯化、表征和功能验证整合为一个工作流程，该协议为生成功能验证的DPSC衍生外泌体提供了一种可重复且可扩展的方法，用于生物材料研究和再生应用。

引言

源自间充质干细胞的外泌体是细胞间通信的重要介导者，并在组织工程和再生医学领域展现出显著的治疗潜力。外泌体是直径30–150纳米的囊泡，能够传递生物活性分子，并调控受体细胞的多种功能，如增殖、分化和^{免疫反应1,2}。在各种间充质干细胞（MSC）来源中，牙髓干细胞（DPSC）因其易于获取、强健的增殖能力、低肿瘤风险以及极小的伦理问题而备受关注 ^3,4,5。由DPSCs衍生的外泌体（DPSC-Exos）含有丰富的功能性物质，包括蛋白质、mRNA和微小RNA，使其能够保留许多亲本细胞的生物学特性。以往研究表明，DPSC-Exos可以促进血管生成、神经修复、骨骼再生和抗炎反应。除了在组织工程中的作用外，外泌体也越来越被认可为肿瘤发生和癌症治疗中的重要调控因子，它们参与肿瘤微环境重塑、药物耐药性和免疫逃脱^6。MSC来源的外泌体，包括DPSCs的外泌体，具有固有的肿瘤归巢能力和免疫调节特性，使其成为下一代靶向抗癌药物递送或无细胞免疫治疗药物的有前景载体。通过绕过细胞疗法的若干限制，DPSC-Exos已成为再生应用中有前景的无细胞生物活性成分（7,8,9,10,11,12）。

尽管有这些优势，DPSC-Exo研究转化为可重复的实验或临床应用仍具挑战。一个主要限制是缺乏统一且标准化的外泌体分离和纯化协议。目前使用的方法包括超量离心¹³、超滤、沉淀、尺寸排除色谱和免疫亲和力捕捉^14,15。在这些方法中，聚合物沉淀具有实用优势，包括高通量、兼容广泛样品体积和操作简便，适合样本量大或放大需求^16、17、18的研究。文献中广泛记录了不同分离方法的比较分析，特别是蛋白质产量和颗粒与蛋白质比的相关^研究。然而，DPSC转代号对衍生外泌体特性和生物活性的影响尚未得到充分关注，这在DPSC-外泌体生产的标准化和质量控制中存在重要空白。

为解决这些技术限制，本研究提出了一套标准化的基于试剂盒的方案，用于从DPSC调控培养基中分离和纯化外泌体。除了物理和分子表征外，该方案还包含功能性测定，以评估来自不同DPSC通道的外泌体抗炎活性，从而对传代依赖性外泌体质量和功能的一致性进行比较评估。该工作流程设计为在配备标准细胞培养和分子生物学设施的实验室中实现。它依赖市售套件以减少实验间的变异性，并可灵活扩展以满足不同的实验需求。为了最大限度减少供体间的变异性，DPSCs从单个牙齿中分离，并独立扩增，而非多个供体混合。该方案对于寻求生成功能验证的DPSC衍生外泌体的研究人员尤为有用，用于后续应用，包括伤口愈合、骨组织工程和免疫调节研究，因为批次间一致性至关重要。总体而言，它为生产用于组织工程和再生医学研究的DPSC衍生外泌体提供了一个实用且标准化的框架。

方案

本研究依据赫尔辛基宣言原则进行，并获得机构伦理委员会批准。根据机构伦理指南（协议编号）在宁波口腔医院采集的废弃第三磨牙或正畸前磨牙组织（协议编号）NBKQYY2025LS-04;批准日期：2025年5月30日）。根据机构伦理指南，在宁波大学附属人民医院泌尿科常规包皮手术中采集了人类皮肤组织（方案编号2024104;批准日期：2024年10月30日）。在采样前，所有捐献者或其法定监护人均已获得书面知情同意。

1. 牙髓干细胞衍生外泌体的分离

1. DPSC的分离、培养与鉴定
   1. 样本采集与运输
      1. 从18至25岁的供体中采集完整的人类第三磨牙，或在正畸拔除后12至16岁的供体中采集完整的人类第三磨牙。
      2. 立即将拔除的牙齿放入预冷却的磷酸盐缓冲生理盐水（PBS），并补充100 U/mL青霉素-G和100 μg/mL链霉素。
      3. 将样品以4°C温度运送到实验室，并在提取后6小时内进行处理。
   2. 牙髓暴露与组织解离
      1. 浸泡在70%乙醇中30秒;用含3%P/S（每次30秒）的1×PBS洗三次。使用无菌剪刀或手术刀，小心清除牙齿表面残留的牙龈和牙周组织。
      2. 用无菌纱布包裹牙齿，然后用消毒锤子小心敲开牙冠，露出牙髓腔。
      3. 轻轻将牙髓组织从牙本质中分离，使用无菌手术刀片将其切碎成小块（<1 mm³）。
      4. 将组织片段转移到一个1.5毫升离心管，内含2.5 mg/mL分散酶II和2.5 mg/mL胶原酶I型消化液。
      5. 将混合物在37°C培养箱中孵育30–45分钟，轻轻搅拌。
         注意： 酶消化的持续时间根据牙髓组织的体积和均质程度确定。
   3. 消化终止与原发细胞培养
      1. 通过添加等量的Dulbecco改良鹰培养基（DMEM），并补充10%胎儿牛血清（FBS），阻止酶促消化。
      2. 将细胞悬浮液置于200× 克 离心5分钟，以沉淀细胞和组织碎片。
      3. 丢弃上清液，将沉淀重新悬浮于1毫升全培养基中（α-MEM含20% FBS、100 U/mL青霉素和100 μg/mL链霉素）。
      4. 将悬浮的细胞和外植株播种到60毫米的培养皿中，并加入完整的培养基至最终5毫升的体积。
      5. 在含5%二氧化碳的加湿环境中，37°C孵育细胞。
   4. 细胞维持与亚培养
      1. 每2-3天更换培养基。
      2. 每天监测细胞。
         注意：原发DPSC通常会从组织外植迁移，并在7至14天内达到80–90%的汇合度。
      3. 亚培养时，当细胞达到80–90%汇聚度时，使用0.05%的胰蛋白酶-乙二胺四乙酸（EDTA）分离细胞。
         注意：胰蛋白酶是一种刺激物。请佩戴适当的个人防护装备，包括手套和安全眼镜。
      4. 使用全培养基（含20% FBS）的传代细胞，比例为1：3。
      5. 在第2、4和6段使用DPSC进行所有下游外泌体分离和功能检测。
   5. 通过流式细胞术对DPSCs的表征
      1. 使用0.05%胰蛋白酶-EDTA在所需通道处分离DPSCs，用完整培养基中和，并收集细胞悬浮液。
      2. 在室温下用300× 克 离心5分钟，然后丢弃上清液。将细胞沉淀重新悬浮在PBS中并计数细胞数量。将细胞密度调整为约1×^{10 6} 细胞/mL。
      3. 将100微升细胞悬浮液注入每个流式细胞管。在4°C黑暗下，将细胞与针对CD44、CD90、CD105、CD45、CD19和CD14的氟色素结合抗体培养30分钟。
      4. 在每个管子中加入1毫升PBS，然后用300× 克 离心5分钟清洗细胞。小心丢弃上清液，将细胞沉淀重新悬浮在300–500微升PBS中进行分析。
      5. 为每种荧光色素添加相应浓度的适当同型对照抗体，以便背景校正和门控。
      6. 使用配备相应激光和滤光片的流式细胞仪分析样本，以适应所选荧光染色剂。每个样本至少采集10,000个事件。
      7. 使用流式细胞术软件进行数据分析。首先，基于前向散射（FSC）和侧向散射（SSC）进行可行的门控，以排除碎片。然后用单层门板去除双层。
      8. 通过比较荧光强度与相应的同型对照来确定标记物表达，以确定阳性和阴性群体。
2. DPSC-Exos的分离与纯化
   1. 调制培养基
      1. 在10厘米的培养皿中培养DPSCs，直到达到70–80%的汇合度。
      2. 取出用过的培养基，然后用预热的PBS轻柔洗涤细胞单层两次。
      3. 加入10毫升全培养基，补充10%外泌体耗尽的FBS。
      4. 在37°C下进一步培养，直到细胞汇聚度达到90–100%（通常超过24小时）。
   2. 调制培养基的收集
      注意： 后续步骤保持冰敷或4摄氏度。
      1. 将调制介质转移到离心管上。
      2. 将培养基在4°C和3000× 克 离心10分钟，以去除细胞和大颗粒。
      3. 小心地将上清液转移到新的离心管中，同时不扰动沉淀。
      4. 将上清液在4°C和10,000 × g 离心10分钟，以沉淀出更小颗粒和凋亡性物体。
      5. 将上清液通过0.22微米注射器滤网过滤到干净的50毫升离心管中。
      6. 立即处理澄清培养基进行外泌体分离，或分量保存，并保存于-80°C。
         注意：澄清后的培养基可在-80°C下保存数月。避免反复的冻融循环。
   3. 通过聚合物沉淀分离外泌体
      1. 如果澄清过的培养基是冷冻的，可以用冰解冻。
      2. 在冰上无菌管中，将培养基与外泌体浓度溶液以4：1的体积比（例如，20毫升培养基：5毫升溶液）混合。将混合物涡旋1分钟以确保均匀。
      3. 将混合物保持在4°C不动状态，保持16–18小时，以便外星体沉淀。
         注意：孵化时间可以适当延长以增加产量，但不应超过24小时。
      4. 将混合物在4°C和10,000 × g 下离心75–80分钟，以沉淀外泌体。小心地抽取并丢弃上清液，同时不扰动沉淀。
      5. 再次以4°C和10,000 × g 离心管，循环2分钟。用移液器去除残留的上清液。
      6. 将外泌体沉淀液置于1倍PBS中（使用200微升PBS每20毫升调质培养基）。
      7. 将悬浮液转移到新的1.5毫升离心管，离心机温度为4°C，温度为12,000 ×克 ，持续2分钟，保留上清液，并富集外泌体颗粒（如有需要重复）。
   4. 外泌体纯化
      1. 将外泌体悬浮液应用于置于收集管中的外泌体净化滤管上。
      2. 在4°C和3000 × g 下离心10分钟。
      3. 收集收集管底部的流动液体。这种液体含有纯化的外泌体。
   5. 纯化外泌体的储存
      1. 将纯化后的外泌体悬浮液分装成适合下游实验的一次性体积。
      2. 将异分液储存在-80°C。
         注意：分租对于避免反复的冻融循环至关重要，因为这会降低外泌体完整性和生物活性。
   6. DPSCs-Exo的特征与鉴定
      1. 通过透射电子显微镜（TEM）进行形态分析，步骤1.2.6.2–1.2.6.6。
      2. 使用移液器抽取10微升已准备好的外泌体悬浮样品，然后滴入预制的对抗膜上。将贴膜/碳涂层铜栅板，薄膜面朝下放置于液滴上，使其自然吸附10–15分钟。
      3. 用滤纸条吸走多余液体，让它短暂自然风干。
      4. 使用移液管，抽取10微升2%磷酸溶液，滴入对抗膜上。将完成吸附步骤的网格倒置，使其薄膜面朝向染色溶液，静置3–5分钟。
      5. 用滤纸条吸走多余液体，让网格在白炽灯下晾干。
      6. 使用透射电子显微镜观察并捕捉图像。
      7. 通过纳米颗粒跟踪分析（NTA）进行尺寸分布和浓度分析，步骤1.2.6.8–1.2.6.12中描述。
      8. 用超纯水冲洗样品腔三次。
      9. 按照制造商说明使用标准100纳米聚苯乙烯珠校准仪器。校准成功后继续测量。
      10. 用1×PBS冲洗样品腔。
      11. 将外泌体样品稀释于1×PBS（1：500稀释），并装入样品室。使用仪器软件实时监测粒子运动。
      12. 获取数据并生成相应的分析报告。
      13. 通过西方印迹分析识别蛋白质标记，步骤1.2.6.14–1.2.6.24中描述。
      14. 使用外泌体特异性蛋白裂解缓冲液采集裂解外泌体样本，并用双辛虫酸（BCA）检测法定量蛋白质浓度。
      15. 准备分辨和堆叠凝胶。每个通道装入等量蛋白质，并在每个凝胶中加入5微升蛋白标记。
      16. 在恒定电压80伏下进行电泳，直到染料前端到达分辨凝胶，然后增加到120伏，继续直到染料前端到达凝胶底部。
      17. 将聚氨基氟乙烯（PVDF）膜切割至合适尺寸，并浸泡在甲醇中5分钟激活。
      18. 制备由25 mM三碱、192 mM甘氨酸和20%（v/v）甲醇（pH = 8.3）组成的转移缓冲液。平衡转移缓冲区内的所有转移成分。
      19. 从阴极到阳极的顺序组装转移夹层：海绵 – 滤纸 – 凝胶 – PVDF膜 – 滤纸 – 海绵。去除所有气泡，并以恒定电流300毫安进行蛋白质转移。
      20. 移植后，用含0.1% Tween20（TBST）的Tris缓冲生理盐水短暂冲洗PVDF膜，并在室温下用5%脱脂牛奶块块，轻轻摇匀1小时。
      21. 将膜与原版抗体（如抗CD63和抗TSG101）一起孵育，这些抗体在5%脱脂牛奶中，在4°C下轻轻摇晃过夜。用TBST清洗膜三次，每次5分钟。
      22. 在室温下与相应的二级抗体一起孵育30分钟，随后用TBST洗涤三次（每次5分钟）。
      23. 制备新鲜的电化学发光（ECL）工作溶液（溶液A和溶液B按1：1比例混合），涂抹在膜上，并使用化学发光成像系统检测信号。

2. 人体原级皮肤表皮角质细胞的分离与培养

1. 样本采集与运输
   1. 在宁波大学附属人民医院，从健康男性捐献者处获取包皮组织样本。
   2. 立即将取出的包皮组织放入4°C的PBS中，并补充100 U/mL青霉素-G和100 μg/mL链霉素。
   3. 将样品以4°C温度运送至实验室，6小时内完成处理。
2. 无菌制备与组织碎片化
   1. 将组织浸入70%乙醇中30秒至3分钟。
      注意：根据组织大小调整浸渍时间以进行初步消毒。
   2. 使用无菌剪刀或手术刀，从洗涤组织样本中剥离并去除皮下脂肪和结缔组织。
   3. 用无菌手术刀片将其切碎成小块（碎片大小<^1毫米3）。
      注意：绞碎3至4个组织样本通常不足15分钟。如果组织看起来干燥，切碎时可以添加少量PBS。
   4. 将切碎后的组织浆液转移到一个50毫升离心管中，管内含有2.5 mg/mL胶原酶I型和2.5 mg/mL分散酶II的消化液。每块绞碎组织加入10–20毫升消化液。
   5. 将混合物置于37°C的孵化器中孵育60分钟。保持轻微搅拌，80× 克，或每20分钟用手剧烈搅动管子。
3. 二次消化与DNase处理
   1. 以1：5体积比向消化混合物中加入0.25%胰蛋白酶-EDTA。在37°C下孵育管25分钟，轻轻搅拌。
      注意：胰蛋白酶是一种刺激物。请佩戴适当的个人防护装备，包括手套和安全眼镜。
   2. 以每毫升总消化体积10微升的比例加入DNase I溶液（10 mg/mL）。在37°C下温和搅拌，孵育5分钟。
4. 消化终止与原发细胞培养
   1. 通过添加等量DMEM并补充10% FBS来阻止酶促消化。
   2. 通过上下移液约20次彻底搓洗混合物，以解离组织碎片。将细胞悬浮液过滤至一个100微米的细胞滤网，进入新的50毫升离心管。
   3. 将细胞悬浮液在200× 克 离心5分钟，沉淀细胞和组织碎片。
   4. 丢弃上清液，将沉淀重新悬浮于1毫升全培养基中（α-MEM含20% FBS、100 U/mL青霉素和100 μg/mL链霉素）。
   5. 将重新浮出的细胞和外植株播种到10厘米的培养皿中，并加入完整培养基至最终6毫升的体积。
   6. 在含5%二氧化碳的加湿环境中，37°C孵育_细胞。
      注意：培养过程中，在角质细胞培养中补充最终浓度为5微M的Y-27632。
5. 细胞维持与亚培养
   1. 每2-3天更换培养基。
   2. 每天监测细胞。
      注意：原发皮肤角质细胞通常会从组织外皮迁移，并在10-14天内达到80-90%的汇合度。
   3. 亚培养时，当细胞融合度达到80–90%时，使用0.05%胰蛋白酶-EDTA分离细胞。
      注意：胰蛋白酶是一种刺激物。请佩戴适当的个人防护装备，包括手套和安全眼镜。

3. 不同通道外泌体抗炎功能的功能验证

1. 细胞播种与制备
   1. 每孔1.5个×10个⁵ 细胞的表皮角质细胞种子，种子为12孔板。向每个孔槽加入1毫升完整培养基，培养细胞24小时。
   2. 当细胞汇聚度达到约70%时，小心吸取培养基，并用预热的1× PBS轻柔清洗细胞单层两次。
2. 炎症刺激与外泌体治疗
   1. 诱导银屑虫状细胞模型，用促炎细胞因子混合物“M5”刺激细胞（含IL-1α、IL-17A、IL-22、Oncostatin M和TNF-α，最终浓度各为10 ng/mL）。
   2. 处理组中，将受刺激细胞与DPSC-Exos共孵（每孔50微克）。
   3. 对于负对照组（NC），添加等量的PBS代替外泌体。
      注意：所有刺激和治疗均在不含Y-27632的培养基中进行，以避免其对炎症信号通路的潜在干扰。
3. 样本采集与qRT-PCR分析（跨通道功能比较）
   1. 处理24小时后采集细胞并提取RNA。
   2. 分析关键炎症标志物IL-23A的表达。
      1. 利用qRT-PCR比较来自不同传代（P2、P4和P6）的外泌体处理组对IL-23A表达的抑制作用，以评估传代依赖性外泌体功能的变化。
      2. 使用以下循环条件进行qRT-PCR：95°C初始变性3分钟，随后95°C变性40次10秒，60°C退火/拉伸30秒。
      3. 对65°C至95°C的熔融曲线进行分析以确认扩增特异性。
         注：引物序列：人类-IL-23A（正向：5'-GAAGAGGAGATGAAGAGAC-3'，反面：5'-TATCCGATCCTAGCAGCTTC-3'）;人类-H36B4（正转：5'-GCAATGTGCCAGTGTGT-3'，反转：5'-GCCTTGACCTTTTCAGCAAG-3'）

结果

牙髓干细胞的鉴定与特征分析
采用上述方案分离的原发牙髓干细胞（DPSC）在体外扩殖过程中表现出稳定生长和典型的间充质形态。如 图1所示，通道2、4和6的DPSC表现出均匀的纺锤形、类纤维细胞群体，无明显形态差异或通道间自发分化的迹象。所有DPSC的通道均在相同条件下培养，以最大限度减少变异性。

为确认扩殖DPSC在后续传代中仍保留间充质干细胞特征，对第6代代细胞进行了流式细胞术分析，作为体外扩殖期间维持干细胞特性的代表性质量控制。这些细胞在间充质干细胞标记CD44、CD90和CD105表达较高，而造血和内皮谱系标记CD45、CD19和CD14则缺乏表达（见图2）。这些结果表明，DPSC在连续传代后保持稳定的间充质干细胞表型，适合下游外泌体生产。

...

讨论

本研究中描述的标准化方案为牙髓干细胞（DPSC）的分离、DPSC衍生的外泌体（DPSC-Exos）的产生以及跨多条细胞通道的功能验证提供了可重复的框架。以下讨论重点介绍了关键的程序性考量、优化策略、方法论局限性以及该工作流程对再生医学研究的更广泛意义。

该方案的可靠性依赖于最早阶段的严格质量控制，从组织采购和处理开始。DPSCs从年轻供体的健康牙髓组织中分离出来，包括成人（18–25岁）的第三磨牙和青少年（12–16岁）的正畸前磨牙。年轻个体的牙髓通常产生具有更高增殖能力和保存性干的细胞，为下游外泌体生成提供一致的生物学基础 ^3,20。在抗生素保护下快速运输和加工进一步降低污染风险，提升培养稳定性。

在DPSC分离中，选择了酶消化而非移植生长法。虽然两种方法都被广泛使用，酶消化能够在更短时间内恢复更大且更均匀的细胞群，这对于涉及多段传代的比较研...

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
0.05% Trypsin-EDTA溶液	Gibco	25300054	由于其消化力，胰蛋白酶被广泛用于细胞分离、常规细胞培养传代和原代组织分离。
100 mm细胞和组织培养皿	Biofil	TCD010100	表面处理/未处理 无菌&非致热性 DNase/RNase-Free
100 nm PS珠	Thermo Fisher	3100A	在进行纳米粒子跟踪分析（NTA）实验之前，必须使用具有精确已知粒径（100 nm）的标准进行仪器校准。
15-mL批量锥形离心管	KIRGEN	KG2611	无菌，无RNase/Dnase和致热性
200目Formvar-碳涂层铜网	中京科学仪器	AZH200	支持外泌体样品用于TEM成像。Formvar-碳涂层增强样品粘附和导电性，而200目网格提供足够的开放区域以实现均匀的粒子分布和稳定的成像。
37 °C培养箱	Thermo Scientific	51032877	37度CO2培养箱提供理想的体外环境。
50-mL批量锥形离心管	KIRGEN	KG2811	无菌，无RNase/Dnase和致热性
Anti-CD63抗体 [MX-49.129.5]	Abcam	ab193349	Anti-CD63抗体 [MX-49.129.5] (ab193349) 是一种小鼠单克隆抗体，在 Western Blot、流式细胞术（Intra）、流式细胞术、IHC-P、ICC/IF 中检测 CD63。适用于人。
Anti-TSG101抗体 [EPR7130(B)]	Abcam	ab125011	Anti-TSG101抗体 [EPR7130(B)] (ab125011) 是一种兔单克隆抗体，在 Western Blot、流式细胞术（Intra）、流式细胞术、IHC-P、ICC/IF 中检测 TSG101。适用于人、小鼠、大鼠。
自动细胞计数器	Countstar	IC1000	用于快速、精确的细胞计数的自动细胞计数器
BCA蛋白测定试剂盒	Beyotime	P0012	在 50 - 2000 μg/ml 的浓度范围内具有良好的线性关系。
台式离心机	BIORIDGE	TD5	台式离心机，用于在实验室环境中快速高效的样品分离
生物安全柜	Thermo Scientific	1379	生物安全柜是一种无菌密封装置，通过过滤空气中的病原体并防止微生物工作过程中的交叉污染，保护操作员、样品和环境。
细胞培养板，12孔	Eppendorf	0030721110	经过组织培养处理，带盖，平底 无菌，不含可检测的致热原，RNase & DNase，人类 & 细菌DNA 无细胞毒性
细胞培养板，96孔	NEST	701001 0714B	经过组织培养处理，聚苯乙烯，非致热性，无菌
Cellsaving	NCM	C40100	无血清，不含动物蛋白 细胞冷冻培养基
胶原酶，I型，粉末	Gibco	17100017	胶原酶是一种蛋白酶，可切割中性氨基酸（X）和甘氨酸之间的键，在序列 Pro-X-Gly-Pro 中，该序列在胶原中以高频率出现。
Dispase II，粉末	Gibco	17105041	Dispase II（中性蛋白酶）是一种氨基端内肽酶，可水解非极性氨基酸残基的 N 端肽键。
Dulbecco's Modified Eagle Medium	Gibco	C11995500BT	[+]4.5g/L D-葡萄糖 [+]L-谷氨酰胺 [+]110mg/L 钠丙酮酸
Evo M-MLV逆转录酶试剂盒	AG	AG11707	专用于实时 RT-PCR 的逆转录试剂。它利用 Evo M-MLV 逆转录酶，具有强大的延伸能力，能够在短时间内高效合成 cDNA。
外泌体浓缩溶液	Umibio	UR52111	从细胞上清液中提取外泌体
外泌体去除胎牛血清	Umibio	UR50202	通过过滤无菌收集的健康胎牛血清获得无外泌体的胎牛血清，胎牛血清中 ≥99% 的内源性外泌体被去除。它与处理前的胎牛血清具有相同的细胞生长速率和形态。
胎牛血清，合格，澳大利亚	Gibco	10099141	血红蛋白水平： ≤30 mg/dL（水平通常 ≤25 mg/dL）
Human-H36B4	上海圣贡生物科技	SB002	正向：5'-GCAATGTTGCCAGTGTCTGT-3'; 反向：5'-GCCTTGACCTTTTCAGCAAG-3'
Human-IL-23A	上海圣贡生物科技	SB002	正向：5'-GAAGAGGGAGATGAAGAGAC-3'; 反向：5'-TATCCGATCCTAGCAGCTTC-3'