河源地区男性人乳头瘤病毒感染及基因分型分析

摘要

本研究分析了前往河源市人民医院门诊就诊并接受人乳头瘤病毒（HPV）核酸检测的男性患者，初步揭示了该地区HPV感染的流行病学特征及基因型分布。这些发现为HPV相关疾病的预防与控制提供了依据。

摘要

本研究旨在调查中国河源市男性门诊患者中人乳头瘤病毒（HPV）的感染流行率及其基因型分布，并比较不同年龄组的感染率，以指导当地的预防与治疗策略。研究纳入了2021年至2024年间在河源市人民医院接受HPV检测的1,559名男性，仅包含其首次就诊的检测结果。采用聚合酶链式反应（PCR）-反向点杂交法鉴定23种HPV基因型。通过回顾性横断面分析评估总体HPV感染率、各年龄段感染率、感染模式、亚型分布以及疫苗相关基因型的覆盖情况。统计分析使用SPSS 23.0版本进行。计数资料以例数和百分比表示，组间差异采用卡方检验进行评估，统计学显著性定义为p < 0.05。总体HPV感染率为45.3%（707/1,559）。各年龄组（≤24岁、25–34岁、35–44岁、45–54岁、55–64岁和≥65岁）的感染率分别为42.8%、43.1%、45.8%、48.2%、68.3%和46.4%。单一型感染是最常见的感染模式，占阳性病例的57.0%。检出频率最高的五种高危型基因型依次为HPV52（9.05%）、16（5.90%）、53（5.09%）、51（5.01%）和59（4.93%），主要的低危型基因型为HPV6（21.24%）、11（9.85%）和43（5.17%）。二价、四价和九价疫苗的理论覆盖率为分别为8.65%、39.74%和55.41%。中国河源市男性门诊患者中HPV感染率相对较高，以单一型感染为主。最常见的高危型基因型为HPV52、16、53、51和59，主要低危型基因型为HPV6、11和43。55–64岁年龄组的感染率最高。这些结果提供了具有区域代表性的数据，有助于为该地区男性人群制定针对性的HPV预防和疫苗接种策略。

引言

人乳头瘤病毒（HPV）是一种主要通过性接触传播的DNA病毒，人类是其唯一宿主。全球范围内，男性和女性的HPV感染率相似，男性为3.5%至45%，女性为2%至44%¹。近80%的性活跃人群在其一生中至少会感染一次该病毒，因为其传播途径不仅包括性接触，还包括皮肤表面和黏膜的摩擦或接触、母婴垂直传播等²。迄今为止，已发现超过200种不同的HPV基因型，根据其与宫颈癌、阴道癌、外阴癌、肛门癌、头颈部癌及阴茎癌发生的相关性，被分为高危型和低危型，其中低危型主要与生殖器疣或尖锐湿疣相关³。大多数情况下，感染可在12至24个月内被免疫系统完全清除，且无临床并发症。然而，若免疫系统未能清除病毒，则会发展为持续性感染，从而为肿瘤性增生性病变的发生奠定基础⁴。特别是持续性高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）感染，与鳞状上皮内病变（SILs）以及阴茎上皮内瘤变（PeiN）的发生密切相关；这两种病变分别是女性宫颈癌和男性阴茎癌的癌前病变^5,6。此外，长期使用口服避孕药、吸烟、免疫缺陷或合并其他性传播感染等生活方式因素也可能促进肿瘤性增殖⁷。

目前，中国针对女性人群中人乳头瘤病毒（HPV）感染的流行情况、危险因素及预防策略已开展大量研究，女性群体对HPV疫苗的认知率和接种率也显著提高。HPV在性伴侣之间易于传播，在许多情况下，配偶之间可能发生多次未被察觉的传播事件⁸。中国最新的临床指南优先推荐9–26岁女性接种HPV疫苗，尤其重点关注9–14岁女孩。此外，还建议27–45岁女性以及9–26岁男性接种疫苗，以推动性别间的联合预防措施⁹。

男性感染HPV可能是导致女性性伴侣感染HPV及反复感染的原因¹⁰。此外，HPV感染可引起男性寻常疣、生殖器疣、生殖器癌症、口咽癌和肛门癌等疾病¹¹，还可能与男性不育相关¹²。然而，目前中国针对男性HPV感染的研究相对较少。此外，中国地域广阔，民族众多，各地婚姻观念和生活习惯存在差异，HPV感染亦具有地域性、种族性和多样性特征¹³。其他研究显示，男性接种HPV疫苗对其性伴侣宫颈病变具有显著的预防潜力¹⁴。全面了解男性HPV感染模式及基因分型特征，有助于完善公共卫生体系，并降低男女性患者管理和治疗的相关成本。有报告指出，在意大利，男性HPV相关疾病对整体医疗支出造成的经济负担更为显著¹⁵。

因此，本研究旨在了解2021年至2024年期间在河源地区接受检测的男性门诊患者中人乳头瘤病毒感染的流行情况、按年龄分层的阳性率、基因型频率、感染模式分布以及疫苗型别的覆盖情况，为该地区男性HPV感染的早期筛查、诊断、预防和治疗提供重要依据。

方案

本研究已通过河源市人民医院医学研究伦理委员会的审查和批准（批准编号：YXYJLL-SFKJ202461；批准日期：2024年5月15日）。伦理批件已作为补充文件上传。患者、未成年患者的父母或监护人在登记时已签署声明，内容为“我同意在去除可识别的个人信息后，将我的临床生物样本和数据用于医学研究伦理委员会批准的科学研究、技术创新和临床研究”，本分析不会对患者造成任何额外风险，并符合相关法规要求。本研究中使用的所有材料均列于材料表中。

主题

本研究共纳入2021年1月至2024年12月期间在河源市人民医院门诊就诊并接受HPV检测的1,559名男性患者。研究对象年龄范围为2至80岁（研究人群包括该医疗机构在2021年至2024年间所有具有有效HPV核酸检测结果的男性门诊患者）；主要目的是全面了解该地区男性患者中HPV检测及感染的流行特征；此外，HPV的感染途径不仅包括性行为，还包括皮肤表面和黏膜的摩擦或接触，以及母婴垂直传播。因此，本研究未设定年龄限制，患者平均年龄为(34.2 ± 10.7)岁。

方法

本研究采用回顾性横断面设计，分析所有前往我院门诊就诊并接受人乳头瘤病毒（HPV）检测的男性患者；对于重复检测的患者，仅纳入其首次采样的结果。

样本采集

脱落细胞样本由经过培训的临床医生使用无菌的专用采样刷获取。采样部位包括阴茎的背侧和腹侧表面、内冠状沟和外冠状沟、阴茎头、远端尿道以及任何可见的疣状病变，具体采样部位根据每位患者的临床发现确定；采集后，将采样刷头部折断并放入专用的样本保存液中。标本保存条件：采样后，标本立即置于2–8 °C冰箱中保存，并在3天内完成检测。

DNA 提取

每个样本经振荡混匀后，依次向核酸提取或纯化试剂中加入 200 µL。使用 SP96 全自动核酸提取仪中的提取试剂，通过磁珠技术进行 DNA 提取。

HPV 检测

HPV-DNA检测采用人乳头瘤病毒分型（23种型别）检测试剂盒，该试剂盒基于PCR技术结合 体外 扩增及DNA反向斑点杂交用于HPV基因分型。根据HPV的遗传特征设计特异性引物，扩增23种HPV基因型的目标片段。将扩增产物与固定在膜上的分型探针进行杂交，探针包括17种高危型HPV（HPV16,51,52,53,18,58,59,31,33,45,56,66,35,39,68,73,82）和6种低危型HPV（HPV6,11,42,43,81,83）。根据是否存在杂交信号，判断上述HPV基因型的感染状态。具体实验步骤为：使用带滤芯的吸头将5 µL提取的DNA加入PCR反应体系中，使总体积达到25 µL，随后进行PCR扩增。扩增结束后，将所有扩增产物加入含有膜条的恒温杂交仪中进行显色杂交。显色完成后即可判读结果。

统计学分析

采用 SPSS 23.0 软件进行统计分析。计数资料以例数（n）和百分比（%）表示。组间比较采用 χ²检验。 p < 0.05 被认为具有统计学意义。在23种HPV基因型中，任一单一基因型阳性即表明存在HPV感染；仅一种基因型阳性表示单一感染；两种或两种以上基因型阳性表示多重感染。根据共存基因型的数量，多重感染进一步分为双重感染、三重感染、四重感染、五重感染、六重感染及更高重感染。"“占总检出频率的比例”以基因型总检出次数（1,238次）为分母进行计算，因为多重感染患者可贡献多个基因型。

结果

研究人群中HPV阳性的总体流行率

在1559例男性门诊患者中，707例人乳头瘤病毒（HPV）DNA检测呈阳性，阳性率为45.3%。各年度HPV感染率分别为2021年（44.8%，100/223）、2022年（45.5%，231/508）、2023年（45.3%，182/402）和2024年（45.5%，194/426）。不同年份间的HPV感染率差异无统计学意义（χ² = 0.033，p = 0.998）（见表1）。除2023年未检出HPV83外，其余三年检测套件均检出23种型别。各年度优势基因型并不完全相同，但HPV6、11和52型在连续四年中的感染率均位列前三。

不同年龄组中人乳头瘤病毒感染率

1559名男性的年龄为(34.2 ± 10.7)岁。各年龄组的感染率从高到低依次为55–64岁（68.3%，43/63）...

讨论

人乳头瘤病毒（HPV）是男性和女性中最常见的性传播病毒。高危型感染与女性的宫颈癌、外阴癌和阴道癌，以及男性的阴茎癌、肛门癌和口咽癌密切相关。持续的低危型感染可导致大多数肛门生殖器疣和呼吸道乳头状瘤病¹⁶。一项针对男性HPV感染相关疾病的分析显示，HPV在男性阴茎、阴茎头/冠状沟、精液、阴囊、肛周及肛门区域的检出率高达50%至70%；该分析还表明，在美国，约一半的头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）病例由高危型HPV（HR-HPV）感染引起¹⁷。此外，HPV可通过男女之间的性接触和密切接触传播。人群中大量无症状的男性病毒携带者可能成为女性感染HPV的潜在传染源。因此，对男性人群HPV感染的研究对于男女HPV感染的预防、诊断和治疗具有重要意义。

本研究回顾性分析了我院1559例男性患者的HPV感染情况，发现男性门诊患者的HPV总阳性检出率为45.3%。该结果高于基于人群的流行率估计值，例如上海计划生育研究所报告的医院感染率为22.50%¹⁸，滨州地区...

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
肺炎支原体核酸及耐药基因检测	广州达安基因股份有限公司	Stream SP96
带滤芯吸头	科睿生命科学有限公司	29822001	0–10 µL
带滤芯吸头	科睿生命科学有限公司	05623001	5–300 µL
人乳头瘤病毒基因分型（23型）检测试剂盒	深圳亚能生物技术有限公司	20193401918
核酸提取试剂（磁珠法）	广州达安基因股份有限公司	20170583
PCR扩增仪	赛默飞世尔科技公司	ABI Veriti DX 96
PCR杂交仪	深圳亚能生物技术有限公司	YN-H16
采样刷	深圳亚能生物技术有限公司
样本保存液	深圳亚能生物技术有限公司