微藻油改善高脂饮食诱导小鼠模型的肝脏脂质代谢

摘要

本研究采用高脂饮食诱导的代谢功能障碍相关脂肪性肝病小鼠模型，评估富含二十二碳六烯酸（DHA）的微藻油补充干预的效果，结果表明该干预可改善肝脏脂质谱，并与肠道微生物群组成的变化相关。

摘要

从代谢角度来看，代谢功能障碍性脂肪性肝病是一种常见的代谢紊乱疾病，与肠道菌群失调及肝脏脂质失衡密切相关。本研究建立了高脂饮食诱导的小鼠模型，以评估补充富含DHA的微藻油的效果。小鼠（每组n = 4）接受高脂饮食喂养8周，并每日口服给予微藻油、益生菌，或富含DHA的微藻油与益生菌的联合干预。检测了代谢参数、肠道菌群组成（16S rRNA测序）、微生物功能通路以及肝脏代谢组学谱。结果显示，富含DHA的微藻油可改善脂质稳态，表现为血清低密度脂蛋白胆固醇（LDL-c）和肝脏甘油三酯水平降低，高密度脂蛋白（HDL-c）水平升高，并与肝损伤和氧化应激的缓解相关。菌群分析揭示了肠道微生物组成的特异性变化，包括乳杆菌属（Lactobacillus）和双歧杆菌属（Bifidobacterium）的富集，以及高脂饮食相关菌属如梭菌属（Clostridium）和瘤胃球菌属（Ruminococcus）的减少。功能谱分析表明，微生物代谢通路发生改变，包括L-甲硫氨酸循环和苯乙胺降解通路。整合的微生物组-代谢组分析进一步揭示了特定微生物类群与参与脂肪酸代谢、胆汁酸转化及氨基酸通路的肝脏代谢物之间的关联。这些发现表明，在该模型中，补充富含DHA的微藻油与肝脏脂质代谢改善及肠道菌群组成优化相关，但并未证明其存在直接因果机制。

引言

代谢功能障碍相关脂肪性肝病（MASLD）是一种全球范围内高度流行的疾病，影响着全球约32.4%的人口¹。MASLD的特征是肝脏中脂肪过度堆积，这会引发多种相关健康问题。人体消化道内存在一个复杂且平衡的微生物群落，包括细菌、病毒、真菌和寄生虫²。由于该微生物群落与肝脏之间存在相互作用，益生菌被认为是一种有前景的方法，可通过调节这一关键联系来预防和治疗MASLD³。新兴研究表明，益生菌可能通过调节肠道微生物组并减轻炎症，对MASLD产生积极影响。具体而言，给予益生菌被证明可恢复肠道菌群平衡并减少肝脏炎症⁴。此外，某些益生菌，尤其是那些能够增强胆汁酸代谢的菌株，已被证实可缓解MASLD患者的肝脂肪变性（脂肪肝），并支持整体代谢健康^5,6。而且，强有力的证据表明，MASLD患者肠道环境发生显著改变，这种状况被称为菌群失调^7,8。一项关键发现是α多样性降低，即微生物物种的总数和种类减少。此外，MASLD患者的肠道菌群通常表现为厚壁菌门（Firmicutes）占主导地位^9,10,11。MASLD患者通常饮食质量较差，通常表现为饱和脂肪摄入量高而必需微量营养素摄入不足^12,13。这些不健康的饮食模式在城市人群中尤为常见，并与厚壁菌门与拟杆菌门（Firmicutes-to-Bacteroidetes）的比例升高相关，相较于农村地区居民更为显著¹⁴。此外，高脂饮食被直接证实会导致更严重的肠道失衡。具体而言，动物模型研究以及对晚期肝病和MASLD患者的研究均表明，高脂摄入与肠道病毒组的改变有关。这些改变包括裂解性噬菌体活性增加，最终加剧了已有的肠道菌群失调^15,16。

Omega-3 多不饱和脂肪酸（PUFAs）常见于鱼油中，可能改善脂质代谢并调节肠道微生物群。微藻油作为一种有前景且可持续的 Omega-3 PUFAs 来源已逐渐受到关注。其中，Schizochytrium 微藻油因其含有高浓度的纯二十二碳六烯酸（DHA）而成为一种具有潜力的商业化来源。该研究团队此前的研究报道，在高脂饮食（HFD）诱导的肥胖小鼠模型中，微藻油在促进减重方面的效果与鱼油及减肥药物奥利司他（Orlistat）相当。关键的是，微藻油发挥减重作用的时间早于鱼油和奥利司他¹⁷。先前的研究结果还显示，与市售鱼油和奥利司他相比，微藻油对肠道微生物群具有独特且有益的影响。尽管微藻油并未显著改变整体细菌多样性，但它与有益的短链脂肪酸（SCFA）产生菌丰度增加以及致病菌群（包括与肥胖相关的脱硫弧菌属 Desulfovibrio）减少相关。此外，微藻油显著恢复了肠道微生物群的代谢能力，增强了与氨基酸、短链脂肪酸和胆汁酸代谢相关的代谢通路，同时关键性地降低了脂多糖（LPS）的生物合成。这些调节作用可能是改善脂质代谢和增强结肠黏膜屏障功能的原因，表明微藻油是一种更优的膳食补充剂，可用于缓解肥胖¹⁷。

尽管在将肠道菌群失调与代谢功能障碍相关脂肪性肝病（MASLD）的发展联系起来方面已取得进展，但微生物组成、微生物代谢功能与肝脏脂质代谢之间的具体关系仍不完全清楚。特别是，菌群改变与疾病进展之间的因果关系尚不明确，而饮食干预（例如富含DHA的微藻油）是否与肠道微生物群落和宿主代谢谱的协调变化相关，也尚未得到系统研究。富含DHA的微藻油是一种可持续且高效的ω-3脂肪酸来源，其DHA含量可与鱼源性补充剂相媲美。既往研究表明，补充富含DHA的微藻油可能改善肝脏脂肪变性和代谢指标^18,19。然而，其在MASLD背景下与肠道菌群组成及微生物代谢功能之间的关联仍不清楚。

因此，本研究采用高脂饮食诱导的小鼠模型，评估富含DHA的微藻油补充对代谢参数、肠道菌群组成及肝脏代谢组学特征的影响。我们假设，补充富含DHA的微藻油将改善肝脏脂质代谢，并伴随肠道菌群组成及微生物代谢通路的相应改变。

方案

本方案中使用的所有动物、饲料、试剂、试剂盒、仪器、软件和服务提供商的详细信息均列在材料表中。所有动物实验均遵循美国国立卫生研究院（NIH）《实验动物护理和使用指南》进行，并已获得山东省立医院实验动物伦理委员会的批准（伦理审批编号：2022–007，批准日期：2022年1月24日）。

警告：动物血液、粪便样本和组织应被视为潜在的生物危害材料。所有涉及活体动物、生物样本、锐器、有机溶剂和化学检测试剂的操作，均须遵守机构的生物安全、动物护理和化学安全规定。动物尸体、组织、被血液污染的材料和粪便样本应收集在指定的生物危害废物容器中，并通过机构的动物设施或生物安全办公室进行处理。针头、灌胃针、毛细管及其他锐器应在使用后立即丢弃至经批准的锐器容器中。有机溶剂废物（包括含甲醇、乙腈和甲酸的溶液）应收集在贴有标签的化学废物容器中，并通过机构的危险化学废物处理程序进行处置。生化和氧化应激检测产生的废物应根据制造商的安全数据表和机构的化学安全规定进行收集和处置。

实验动物

将6周龄雄性C57BL/6J小鼠（每组n = 4）饲养于特定病原体阴性（SPF）环境中，光照/黑暗周期为12小时，温度为22 ± 2 °C，相对湿度为50–60%。动物可自由摄取食物和水，每笼最多饲养5只小鼠。对照组小鼠饲喂标准维持饲料，其热量组成为70%碳水化合物、20%蛋白质和10%脂肪（kcal）。为建立代谢相关脂肪性肝病（MASLD）小鼠模型，小鼠饲喂高脂饲料8周，其热量组成为20%碳水化合物、20%蛋白质和60%脂肪（kcal）。所有饲料均储存于4 °C，并每周更换两次。使用随机数字生成器将小鼠随机分配至各实验组，样本量（每组n = 4）依据既往采用类似高脂饮食诱导小鼠模型的研究及预实验结果确定。所有处理均在每天同一时间进行，以尽量减少昼夜节律变异。

微藻油由山东省农业科学院提取并纯化，纯度约为99%。微藻油在避光条件下储存于−30 °C。给药前，将油剂与乳化剂混合，并充分搅拌以确保均匀性。具体而言，富含DHA的微藻油被乳化于无菌生理盐水中，该盐水含有0.5%羧甲基纤维素钠和0.5%吐温-80。微藻油与乳化剂载体按1:9（v/v）的比例混合，并在灌胃前立即涡旋振荡2分钟，以获得均匀的悬浮液。微藻油处理组小鼠通过无菌喂养针每日一次经口灌胃给予该制剂，剂量为10 µL/g体重。根据小鼠每日体重调整灌胃体积，以确保剂量一致。对照组小鼠在相同条件下给予等体积的无菌生理盐水。所用生理盐水为0.9%氯化钠注射液。

益生菌治疗由一种复合配方组成，包含 植物乳杆菌 (DY-1) Lactobacillus acidophilus (KDB-03) 干酪乳杆菌 （KDB-LC），以及 Bacillus coagulans (GIM 1.645)。四种菌株按1:1:1:1的等量活细胞比例混合，每种菌株贡献2.5 × 10⁷ CFU/mL 加入至最终配方中，得到总细菌浓度为 1 × 10⁸ CFU/mL。该益生菌混合物由山东省农业科学院合成，未商业化供应。益生菌处理包含一种复合益生菌发酵液 植物乳杆菌 DY-1 Lactobacillus acidophilus KDB-03 干酪乳杆菌 KDB-LC，以及 Bacillus coagulans GIM 1.645。该制剂的细菌浓度为 1 × 10⁸ CFU/mL。益生菌发酵液于4 °C保存备用。实验期间，益生菌处理组小鼠每日通过口服灌胃给予益生菌制剂，剂量为0.01 mL/g体重。

在适当条件下培养各菌株，并于对数生长期中期（OD₆₀₀ ≈ 0.6）收获，随后按指定比例混合。将细菌培养物离心以去除上清液，菌体沉淀重悬于无菌磷酸盐缓冲液（PBS）中。新鲜制备的细菌悬液在给药前置于冰上保存，以维持其活性。给药前将细菌终浓度调整至 1 × 10⁸ CFU/mL。益生菌组小鼠在实验期间每日通过口服灌胃给予该制剂，剂量为 0.01 mL/g 体重。益生菌给药前未进行抗生素预处理。为减少实验偏倚，在适用情况下由不知分组情况的研究人员进行结果评估。通过血液生化分析确认代谢相关脂肪性肝病（MASLD）模型建立。

血液分析

实验周期结束时，小鼠禁食过夜（12小时），可自由饮水，随后进行葡萄糖测定和终末采血。使用异氟烷麻醉蒸发器对小鼠进行深度麻醉，直至确认足底反射消失。通过眶后静脉丛采血获取终末血液样本。采血后，小鼠在深度麻醉状态下通过颈椎脱位实施安乐死，并通过呼吸和心跳停止确认死亡。血液在室温下静置凝固，随后在3,000 × g 条件下离心10分钟以分离血清。血清分装后储存于−80 °C，待后续分析。采用自动生化分析仪检测血清葡萄糖、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-c）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-c）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）和丙氨酸氨基转移酶（ALT），操作遵循试剂盒制造商说明书。上述指标均使用集成于分析系统中的标准试剂盒，通过酶法比色分析进行定量。所有生化参数均根据血清体积进行标准化，并以制造商规定的单位表示。

氧化应激检测

采用试剂盒检测氧化应激生物标志物，包括丙二醛、超氧化物歧化酶和过氧化氢酶。按照试剂盒制造商的说明书进行测定。简言之，将肝组织在冰浴缓冲液中匀浆后离心，取上清液用于分析。丙二醛（MDA）水平通过硫代巴比妥酸反应物（TBARS）法测定；超氧化物歧化酶（SOD）活性通过其抑制超氧阴离子介导反应的能力来测定；过氧化氢酶（CAT）活性通过监测过氧化氢分解速率进行定量。使用酶标仪进行检测，并根据试剂盒提供的标准曲线或计算公式得出检测值。氧化应激指标根据肝组织重量进行归一化处理，并按照制造商的规范进行表达。

16S rRNA 测序与微生物组分析

在实验周期结束时，在无菌条件下直接从每只小鼠采集粪便样本，立即用液氮速冻，并于−80 °C保存直至进行DNA提取。使用商品化试剂盒，按照生产商提供的操作说明提取微生物DNA。采用引物341F/806R扩增细菌16S rRNA基因的V3–V4区。PCR扩增在25 µL反应体系中进行，体系包含模板DNA、2× PCR预混液和每种引物0.2 µM。扩增程序包括：95 °C初始变性3 min，随后进行25个循环（95 °C变性30 s、55 °C退火30 s、72 °C延伸45 s），最后在72 °C延伸10 min。扩增子文库构建完成后，由商业测序服务公司采用Illumina MiSeq平台进行双端2×250 bp测序。测序前对文库质量进行评估，并按照生产商推荐的簇密度将混合文库上机测序。在进行下游分析前，剔除含有模糊碱基、长度不足或平均质量值低于Q20的低质量序列。

原始测序读长使用 QIIME 2 版本 2019.4²⁰ 进行处理。简而言之，成对末端读长在默认参数下（除非另有说明）使用 DADA2 进行解复用、质量过滤、去噪、合并以及嵌合体过滤。保留非单例的扩增子序列变体（ASVs）用于后续分析。分类学注释使用 QIIME2 中集成的 Greengenes 数据库版本 13_8 进行²¹。鉴于 16S rRNA 基因测序本身存在的分辨率限制，特别是使用 Greengenes 数据库时，分类学注释仅在属水平上进行解读。种水平的分类被认为不可靠，因此未在任何后续分析、统计比较或生物学解释中使用。在可视化和分析之前，所有微生物特征均已合并至属水平。

采用 Alpha 多样性指标（Chao1、观测物种数、Shannon、Simpson、Faith 系统发育多样性以及 Pielou 均匀度）。组间 Alpha 多样性的统计比较采用适当的非参数检验方法（例如 Kruskal–Wallis 检验）。使用 Jaccard 距离和 Bray-Curtis 相异性作为 Beta 多样性指标。通过主坐标分析（PCoA）图、非度量多维尺度分析（NMDS）以及线性判别分析效应量（LEfSe）来展示微生物组群落的变化，LEfSe 分析的 LDA 分值阈值设为 2.0。采用置换多元方差分析（PERMANOVA）评估 Beta 多样性的统计学显著性。数据可视化和统计分析使用 GenesCloud 平台（https://www.genescloud.cn）完成。

微生物功能谱是通过16S rRNA测序数据推断得出，而非通过宏基因组鸟枪法测序或转录组测序直接测定。根据标准化的代谢通路或功能群丰度表，将预测的功能单元比对至常用数据库，包括KEGG、MetaCyc和COG。KEGG代谢通路的丰度根据其层级功能分类进行汇总，下游比较采用二级通路分类。使用R软件计算每个通路类别的平均丰度。

肝脏样本的非靶向代谢组学分析

确认死亡后立即快速切除肝脏组织，立即置于液氮中冷冻，并在分析前于−80 °C保存。取约50 mg冷冻肝脏组织，加入冰浴甲醇:水（4:1，v/v）匀浆，该提取液中添加了内标物。组织与提取溶剂的比例为1:10（w/v）。样品涡旋振荡1分钟，冰上超声处理10分钟，随后在−20 °C孵育30分钟以促进蛋白质沉淀。匀浆液充分混匀后再次进行冰上超声处理，然后在4 °C、12,000 × g条件下离心15分钟。小心收集上清液，在温和氮气流下蒸发，再用50%甲醇重新溶解，用于后续分析。

通过将每个样本取等体积混合生成质控（QC）样本，并在整次运行过程中间歇性地进行分析，以评估分析的稳定性和重现性。非靶向代谢组学分析由商业服务提供商使用超高效液相色谱系统联用高分辨质谱仪完成。代谢物采用反相C18色谱柱分离，流动相体系由含0.1%甲酸的水和含0.1%甲酸的乙腈组成。进样体积为2 µL，色谱柱温度维持在40 °C，流速设定为0.30 mL/min。采用梯度洗脱程序以实现广泛的代谢物分离。质谱检测在正离子和负离子电喷雾电离模式下进行，扫描范围为m/z 70–1,000，以获得广泛的代谢物覆盖。离子喷雾电压在正离子模式下设为3.5 kV，在负离子模式下设为−2.5 kV。毛细管温度维持在320 °C，数据以全扫描MS模式采集，并采用数据依赖的MS/MS模式进行代谢物注释。原始数据使用专用代谢组学软件（MassLynx v4.1）进行特征峰检测、对齐和归一化处理。代谢物鉴定基于精确质量数、保留时间以及MS/MS碎片模式，并与公共数据库（包括人类代谢组数据库HMDB和京都基因与基因组百科全书KEGG，v2023版本）进行比对，视情况而定。

多变量与通路分析

对处理后的代谢组学数据进行多变量统计分析，包括主成分分析（PCA）和偏最小二乘判别分析（PLS-DA），以可视化各实验组之间的代谢差异。差异代谢物的筛选基于投影变量重要性（VIP）得分（>1.0）和统计显著性（p < 0.05）的联合标准。进一步通过KEGG通路富集分析将鉴定出的代谢物映射到代谢通路，以阐明与富含DHA的微藻油补充相关的生物学过程。

统计分析

数据以均值 ± 标准误（SEM）表示，采用单因素方差分析（ANOVA）进行检验，随后进行 Tukey 多重比较检验。统计学显著性定义为 p < 0.05。肝脏代谢物的富集分析使用 R 软件（版本 4.4.1）完成。微生物属与肝脏代谢物之间的成对关联性采用 Spearman 秩相关分析。仅将具有统计学意义的相关性（错误发现率，FDR < 0.05）且 |ρ| ≥ 0.6 的结果纳入整合网络分析。微生物组和代谢组学数据的处理如上所述，包括使用 GenesCloud 平台及质量控制流程。

结果

富含DHA的微藻油可改善高脂饮食诱导的MASLD小鼠的脂质代谢、肝脏损伤和肝氧化应激

为评估膳食补充剂对葡萄糖和脂质稳态的影响，我们在五个小鼠组中检测了生化参数：普通饲料（RC）、高脂饮食（HFD）、补充DHA富集微藻油、补充益生菌以及联合补充DHA富集微藻油+益生菌的小鼠组。由于本研究的主要目的是评估DHA富集微藻油的作用，因此将DHA富集微藻油处理组视为主要干预组，而益生菌组和联合治疗组则作为比较性干预组，用于评估单独使用益生菌及潜在协同效应的影响。如图1A所示，高脂饮食成功诱导了代谢相关脂肪性肝病（MASLD）的代谢特征，表现为与RC组相比，空腹血糖水平显著升高（p < 0.001），提示高血糖状态的形成。单独补充益生菌或单独补充DHA富集微藻油均未显著降低空腹血糖水平（与HFD组相比，DHA富集微藻油：p = 0.969）。相比之下，联合使用DHA富集微藻油和益生菌干预使血糖水平较HFD组进一步降低，接近RC喂养小鼠的水平。

讨论

近年来，多项研究探讨了与代谢功能障碍相关脂肪性肝病（MASLD）相关的微生物组变化。然而，这些研究大多集中于比较健康个体与MASLD患者，或考察不同脂肪变性程度之间的差异²⁴。因此，尽管肝纤维化是预测患者预后的最关键因素，目前仍缺乏关于MASLD中肠道菌群在肝纤维化阶段特异性变化的充分证据。本研究显示，在高脂饮食诱导的MASLD小鼠中，富含DHA的微藻油主要改善了脂质代谢而非葡萄糖调节。该效应伴随着肝损伤和氧化应激的减轻、有益菌群（如Lactobacillus和Bifidobacterium）的选择性富集，以及高脂饮食相关菌群（包括Clostridium和Ruminococcus）丰度的降低。此外，组织病理学分析进一步支持了这些发现：油红O染色显示肝脏脂质蓄积减少，H&E染色显示经富含DHA的微藻油处理后肝细胞脂肪变性得到缓解。整合分析进一步揭示，对富含DHA的微藻油产生响应的微生物类群与参与脂质重塑、胆汁酸代谢及芳香族氨基酸通路的肝脏代谢物呈正相关。由于富含DHA的微藻油是本研究关注的主要干预措施，益...

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
2x PCR预混液	Takara Bio Inc., Japan	RR902A	用于16S rRNA PCR扩增
乙腈	Merck, Germany	100030	用于UHPLC流动相的溶剂
麻醉蒸发器	RWD Life Science	R580	用于向小鼠输送异氟烷麻醉剂
全自动生化分析仪	南京建成生物工程研究所，中国	A110-1 & A111-1	检测血清参数（葡萄糖、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、天冬氨酸转氨酶、丙氨酸转氨酶）及肝脏脂质水平
凝结芽孢杆菌（GIM 1.645）	广东省微生物菌种保藏中心，中国	GIM 1.645	益生菌制剂的组分菌株
羧甲基纤维素钠（CMC-Na）	Sigma-Aldrich, USA	C4888	用于富含DHA微藻油制剂的乳化剂组分
过氧化氢酶（CAT）检测试剂盒	南京建成有限公司	A007-1-1	检测肝组织中CAT活性（抗氧化能力的指标）
DADA2软件包	DADA2开发团队	包含于QIIME 2 v2019.4	用于测序读长的去噪和嵌合体过滤
富含DHA的微藻油（裂殖壶菌来源）	-	-	富含二十二碳六烯酸（DHA）；以10µL/g剂量每日灌胃给药，作为实验干预
实验动物（雄性C57BL/6J小鼠）	北京维通利华实验动物技术有限公司	-	6周龄，每组n = 4；通过高脂饮食喂养建立MASLD模型
甲酸	Sigma-Aldrich, USA	F0507	代谢组学分析中流动相添加剂
Greengenes数据库	Greengenes	版本13_8	用于微生物分类学注释
高脂饮食（HFD）	Research Diets Inc., USA	D12492	由20%碳水化合物、20%蛋白质、60%脂肪（千卡）组成；喂养8周以诱导MASLD
高分辨质谱仪	Thermo Fisher Scientific, USA	Q Exactive Orbitrap	用于正负离子模式下的代谢物检测
人类代谢组数据库（HMDB）	加拿大阿尔伯塔大学	2024年发布版	公共代谢物注释数据库
Illumina MiSeq平台	Illumina, Inc., USA	MiSeq系统	用于双端2 × 250 bp测序
异氟烷	Merck, Germany	PHR2874	用于小鼠吸入麻醉
京都基因与基因组百科全书（KEGG）	日本Kanehisa实验室	版本2023	用于通路富集分析和代谢物注释的数据库
嗜酸乳杆菌（KDB-03）	山东省农业科学院，中国	-	益生菌制剂的组分菌株
干酪乳杆菌（KDB-LC）	山东省农业科学院，中国	-	益生菌制剂的组分菌株
植物乳杆菌（DY-1）	山东省农业科学院，中国	-	益生菌制剂的组分菌株
液氮	Air Liquide	-	用于粪便和肝脏样本的快速冷冻与保存
丙二醛（MDA）检测试剂盒	南京建成有限公司	A003-1	检测肝组织中MDA（脂质过氧化/氧化损伤标志物）
MassLynx软件	Waters Corporation, USA	版本4.1	用于代谢组学原始数据处理、特征提取和归一化
甲醇	Merck, Germany	106035	用于代谢物提取的溶剂
微生物组数据分析平台	Genescloud	V1	在线平台：https://www.genescloud.cn/home；用于PCoA、NMDS、LEfSe及其他微生物组可视化分析
OMEGA土壤DNA提取试剂盒	Omega Bio-Tek, Norcross, GA, USA)	(M5635-02)	DNA提取
OTUs参考序列	Genescloud		参考自McDonald等，2012年；用于扩增子序列变体（ASVs）的分类学注释
磷酸盐缓冲液（PBS）	Gibco, Thermo Fisher Scientific, USA	10010023	用于细菌沉淀重悬
引物341F/806R	中国擎科生物技术有限公司	-	用于扩增16S rRNA V3–V4区。341F: 5′-CCTACGGGNGGCWGCAG-3′；806R: 5′-GGACTACHVGGGTATCTAAT-3′
益生菌	-	-	未明确提及具体菌株；作为对照干预（主要改善葡萄糖稳态）
QIIME 2软件	-	2019.4	用于微生物组生物信息学分析（ASV处理、α/β多样性计算）
R软件	-	4.4.1	用于肝脏代谢物富集分析及微生物-代谢物关联的Spearman相关性分析
冷冻离心机	Eppendorf, Germany	5810R	用于血清和代谢组学样本的离心
反相C18色谱柱	Waters Corporation, USA	186002350	用于代谢物的色谱分离
生理盐水	石家庄第四制药厂	2211112304	对照组每日灌胃给药（相对于微藻油处理）
标准饲料	中国科奥协力饲料有限公司	1016706714625204224	由70%碳水化合物、20%蛋白质、10%脂肪（千卡）组成；喂养对照组（RC组）
无菌喂养针	Instech Laboratories, USA	FTP-20-38	用于口服灌胃给药
超氧化物歧化酶（SOD）检测试剂盒	南京建成有限公司	A001-3	检测肝组织中SOD活性（抗氧化能力的指标）
吐温-80	Sigma-Aldrich, USA	P4780	用于富含DHA微藻油制剂的乳化剂组分
超声波匀浆器	中国宁波新芝生物科技有限公司	JY92-IIN	用于代谢物提取过程中的肝脏组织超声处理
非靶向肝脏代谢组学	麦特谱生物科技（上海）有限公司	项目编号：P035Y23A13_SFMU_MJWang_SH
涡旋混合器	Thermo Fisher Scientific, USA	LP Vortex Mixer	用于样本均质化和乳化