本研究旨在探讨头针联合运动对脑卒中后肢体痉挛大鼠模型运动皮质突触可塑性的影响，并探索PI3K/Akt通路活性与治疗效果之间的关联。
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本研究旨在探讨头针联合运动对脑卒中后肢体痉挛大鼠模型运动皮质突触可塑性的影响，并探索PI3K/Akt通路活性与治疗效果之间的关联。
目前，针对卒中后肌张力障碍（PSS）的有效治疗手段仍然有限，头皮针灸联合运动（SAE）缓解PSS的作用机制尚未完全阐明。本研究探讨了SAE在PSS大鼠模型中的作用，并进一步探究SAE是否通过PI3K/Akt通路调控突触可塑性。通过建立大脑中动脉闭塞（MCAO）大鼠模型，将大鼠随机分为五组：空白组、假手术组、MCAO组、SAE组和巴氯芬组。所有干预措施均连续实施7天。随后评估神经功能、脑梗死体积、组织病理学变化、突触超微结构及相关蛋白表达水平。与MCAO组相比，SAE组显著改善了神经功能缺损，减轻了肌肉张力增高，缩小了梗死体积，缓解了神经元损伤，增加了突触数量，并改善了突触形态。SAE还上调了胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）、磷酸化PI3K（p-PI3K）、磷酸化Akt（p-AKT）以及突触相关蛋白，包括突触素（SYN）、突触后密度蛋白95（PSD-95）和生长相关蛋白43（GAP-43）。免疫荧光染色进一步表明，SAE治疗后运动皮层中SYN和p-Akt的表达增强。这些结果提示，SAE可能通过上调GDNF激活PI3K/Akt信号通路，从而改善突触可塑性并缓解PSS症状。本研究验证了SAE在PSS大鼠中的作用，并探索了SAE干预、PI3K/Akt通路活性与突触可塑性之间的潜在关联。
脑梗死仍是全球范围内导致死亡和残疾的主要原因。缺血和缺氧会损伤神经元，破坏运动环路中的兴奋-抑制平衡，从而导致运动功能障碍1。卒中后肌张力增高表现为肌肉张力升高和关节活动度下降，影响日常生活活动能力，并增加照护负担2。尽管巴氯芬等抗痉挛药物可暂时缓解症状，但长期使用可能导致药物耐受性和不良反应，且无法恢复受损的神经功能3。传统的运动康复治疗也受限于起效缓慢和疗程较长。因此，亟需更安全、更有效的治疗策略，其潜在机制也有待进一步研究。神经可塑性是卒中后功能恢复的核心机制，涉及突触重塑、轴突再生和神经元存活4。缺血性卒中后，梗死核心区域的神经元迅速死亡，局部炎症反应则加剧缺血半暗带的组织损伤；这些过程共同导致脑损伤5,6。突触可塑性作为神经可塑性的重要组成部分，可通过突触相关蛋白进行评估，包括突触前标志物如突触素（SYN）和生长相关蛋白43（GAP-43），以及突触后密度蛋白95（PSD-95）7,8,9。
神经营养因子为突触可塑性提供了分子基础。胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）尤为重要，因其可促进神经元的存活与修复，抑制炎症反应，并改善突触微环境10。GDNF通过结合Ret受体，可激活PI3K/Akt信号通路11。PI3K/Akt级联反应是神经系统中主要的促生存通路，其激活可抑制细胞凋亡，同时支持突触重塑所需的蛋白质合成12,13。头针联合运动疗法（SAE）是一种整合性康复策略，将头针刺激与主动运动训练相结合。该方法的总体目标是同时调节中枢神经活动并促进与任务相关的运动功能恢复，从而降低肌张力增高，并改善脑卒中后的功能结局。SAE在中国被广泛用于治疗脑卒中后痉挛（PSS）。该联合疗法的理论依据在于，头针可能调节皮层兴奋性和脑灌注，而运动疗法则提供依赖活动的运动训练，促进功能恢复和突触重塑。与单独运动疗法相比，既往临床证据表明，在头皮穴位进行头针联合运动疗法可进一步减轻脑卒中后肢体痉挛患者的肢体痉挛程度，并改善其运动功能及日常生活活动能力14。
最近的一项系统综述与荟萃分析也表明，运动式头针疗法或相关的头针-运动同步干预措施在改善痉挛、运动功能、平衡能力及日常生活活动能力方面，优于单一成分或序贯干预措施，提示同步神经调节与运动训练可能具有潜在优势15。临床前研究显示，SAE或相关的运动式头针治疗方案可通过5-HT₂A受体介导的脊髓KCC2再激活，改善脑血流并减轻痉挛状态16,17。最近一项研究进一步表明，针刺可通过PI3K/Akt信号通路促进神经可塑性18。因此，SAE可能特别适用于以调节卒中后神经可塑性、促进运动功能恢复及减轻痉挛为主要治疗目标的实验与临床情境。然而，SAE与GDNF/PI3K/Akt信号通路及突触可塑性在缓解卒中后痉挛状态（PSS）中的潜在关联仍不明确。本研究建立了一种PSS大鼠模型，旨在评估SAE对神经功能缺损和肌肉痉挛的影响，并表征干预后GDNF表达、PI3K/Akt通路活性以及突触可塑性相关蛋白的变化。本研究可能为判断SAE是否适合作为PSS的康复策略及其潜在作用机制的阐明提供实验依据。
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所有实验程序均经长春中医药大学动物伦理委员会批准（批准号：20251038），并依照《动物研究：体内实验报告指南》（ARRIVE 2.0）以及《美国国立卫生研究院实验动物护理与使用指南》进行。本研究中使用的所有材料均列于材料表中。
实验步骤
实验动物与分组
80只SPF级成年雄性Sprague–Dawley大鼠（体重220–250 g）购自中国吉林省长春市宽城区宏达动物繁育场。动物饲养于长春中医药大学实验动物中心，环境条件控制在22–25 °C、相对湿度50–60%，光照周期为12小时明/12小时暗，自由摄食和饮水。经过1周的适应性饲养后，将大鼠随机分为空白组（n = 12）、假手术组（n = 12）和模型保留组（n = 56）。空白组作为正常、未处理的对照组，用于提供健康大鼠在行为学表现、组织病理学特征及分子标志物表达方面的基线数值。假手术组接受与MCAO组相同的麻醉和手术暴露操作，但不进行动脉阻塞；因此，该组用于控制麻醉和手术操作可能带来的影响。同时设置空白组和假手术组，有助于将缺血性损伤的影响与手术操作本身的影响区分开来。
模型保留组进行了MCAO造模。术后前3天定义为模型诱导期。在此期间，56只大鼠中有8只死亡，死亡率为14.29%，另有12只因造模失败被剔除。剩余36只成功建立模型的大鼠通过随机数字表法随机分配至MCAO组、SAE组和巴氯芬组，每组12只。各组干预措施如下：（I）空白组：仅进行常规喂养，无任何干预。（II）假手术组：暴露颈总动脉、颈内动脉、颈外动脉及迷走神经，但不进行结扎或线栓插入。（III）MCAO组：在3%戊巴比妥钠腹腔麻醉下建立MCAO模型，之后无任何治疗。（IV）SAE组：成功完成MCAO造模并确认后，大鼠接受头皮针灸联合运动干预。仅在短暂的进针阶段使用1.5%–2.0%异氟烷吸入麻醉。跑步机训练仅在意识完全恢复且自主行走能力恢复后开始。针灸取穴为GV20及双侧EX-HN1。针刺深度为1 mm，并在跑步机训练期间留针。标准化的30分钟留针/训练期定义为跑步机训练期，包括以0°坡度先以6 m/min速度训练10分钟，随后以12 m/min速度训练20分钟。该干预每日进行一次，连续7天。（V）巴氯芬组：成功完成MCAO造模并确认后，大鼠每日一次经口灌胃给予巴氯芬，剂量为0.4 mg/kg，连续7天。
大脑中动脉闭塞模型的建立
采用改良的血管内线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）模型19。大鼠禁食禁水12小时后，通过腹腔注射3%戊巴比妥钠进行麻醉，并置于仰卧位。皮肤消毒后，作颈正中切口，暴露右侧颈总动脉（CCA）及其邻近的神经和肌肉。辨认并结扎颈外动脉（ECA），分离颈内动脉（ICA）。在近端ICA和CCA处放置结扎线，暂时夹闭远端CCA。在夹闭点近端的CCA上做一小切口，插入直径0.26 mm的尼龙线栓，并沿ICA向前推进18–20 mm，以阻塞大脑中动脉起始部。随后结扎ICA和CCA，缝合切口。术后将大鼠保温直至恢复，并给予腹腔注射青霉素（40,000 U）以预防感染。假手术组仅进行血管暴露，不插入线栓；伤口缝合及术后护理与MCAO组相同。模型建立成功的标准为术后3天Zea Longa评分≥2分19，且改良Ashworth量表（MAS）肌张力评分≥1级20。
干预方法
头针联合运动干预
既往研究表明，在大脑中动脉阻塞（MCAO）大鼠模型中，神经功能缺损在术后第3天达到高峰，并在术后10天内持续处于较高水平，而外周肌肉阻力则从第6天至第9天逐渐增加21。因此，治疗于术后第3天开始，每日1次，连续进行7天，以尽量减少自发恢复的影响。在造模前，SAE组大鼠接受为期3天的适应性跑台训练，速度为5 m/min，每天10分钟22。该适应性训练旨在使大鼠熟悉跑台运行环境，降低在正式干预期间出现挣扎、跌落、拒绝跑步或中途停止等情况的可能性。在适应性训练及正式干预过程中，与跑台相关的异常事件定义为持续挣扎、从跑道跌落、拒绝跑步超过1分钟或在训练中停止超过1分钟。一旦观察到上述情况，需在实验记录中予以记录。若大鼠仅出现短暂犹豫或瞬时停顿，但在轻柔提示后可恢复跑台运动，则不作为排除标准。仅当动物因反复跌落、持续拒绝跑步或严重应激而无法完成当日指定的跑台训练时，其数据才予以剔除。在第3天成功完成模型验证后，SAE干预措施开始实施，每日1次，连续7天。
每次治疗时，大鼠使用1.5%–2.0%异氟烷进行麻醉。针刺插入后立即停止麻醉。在实验操作中，大鼠通常在停止异氟烷后约1–2分钟内完全恢复意识。大鼠在麻醉状态下不进行跑台训练。穴位由经验丰富的动物针灸师根据中国针灸学会2020年发布的《实验动物常用穴位名称与定位》确定。GV20定位为颅骨中线上前囟与后囟连线的中点。双侧EX-HN1位于GV20旁开2 mm处。使用尺寸为0.25 mm × 13 mm的一次性针具，垂直刺入1 mm深度，并在整个标准化的30分钟跑台训练期间留针。针具用透气医用胶带固定，以防止移位；并通过触诊排除针刺穿透颅骨的可能，以确保操作的一致性。在跑台训练开始前、训练过程中若出现异常跑动行为而短暂暂停时，以及训练结束后立即检查针的位置和胶带固定情况。此外，无论动物行为是否异常，均在跑台训练期间每5分钟目视检查一次针的位置。针位移定义为在跑台运行过程中出现可见的松动、针体角度改变、部分退出或完全脱落。若发生轻度松动但针位未丢失，则在短暂暂停跑台的同时轻轻加固胶带。若针具部分退出或完全脱落，则当次治疗不再重新插入；大鼠在无额外针具操作的情况下完成剩余的跑台训练，该事件需记录在实验日志中。除非针位移事件伴随无法完成跑台训练或出现严重痛苦迹象，否则仅因单次针位移事件并不排除该动物出组。
当大鼠在异氟烷麻醉后完全恢复并开始跑台运动时，标准化的30分钟留针/训练期开始；在跑台训练结束后立即拔除针头，此时训练期结束。异氟烷停用后的短暂恢复时间不计入标准化的30分钟训练期内。由于针具是在大鼠恢复前插入的，因此实际的物理留针时间比30分钟跑台训练期长约1–2分钟。该定义在SAE组所有大鼠中均一致应用。当大鼠满足以下标准时，被认为已充分恢复，可开始跑台训练：意识完全恢复、能够独立站立、能在平面上稳定行走，以及对轻柔的外界刺激有正常反应。这些标准在将大鼠放置于跑台前进行检查确认。
在留针期间，大鼠在跑台上进行运动，坡度为0°：以6 m/min速度跑10分钟，随后以12 m/min速度跑20分钟。在整个研究过程中未使用电刺激。若大鼠在正式训练期间停止跑步或拒绝跑步超过1分钟，可采用温和的非厌恶性听觉刺激（例如轻敲跑台壁）鼓励其继续运动。此类提示行为，以及任何挣扎、跌倒、停止、拒绝跑步或针体移位等情况，一旦被观察到，均需记录在实验日志中。这些事件以描述性方式加以监测，并在观察到时记录于实验日志中。运动强度根据既往报道的结合头皮针刺与跑台训练的方案进行综合调整16,23。SAE干预每日进行一次，连续7天（图1A）。
巴氯芬干预
模型成功验证后，巴氯芬组大鼠通过灌胃给予巴氯芬溶液，剂量为 0.4 mg/kg。每日上午 9:00 给药一次，连续给药 7 天。
结局指标
一般观察
对所有组别的动物每日进行一般状况监测，包括体重、精神状态、食物和水的摄入量以及自发活动情况。
神经功能与肌张力评估
在模型验证后的第1、3、5和7天，采用Zea Longa评分、改良神经功能缺损评分（mNSS）以及改良Ashworth量表对神经功能缺损和肢体痉挛情况进行评估。所有时间点的行为学评估均由两名研究者独立完成，且在整个观察期间对分组信息保持盲态。详细的评分标准见（表1–3）。
脑梗死体积的测定
采用2,3,5-三苯基氯化四氮唑（TTC）染色法评估脑梗死体积。干预7天后，从每组中随机选取3只大鼠，通过腹腔注射过量戊巴比妥钠实施安乐死，随后迅速断头以完整取出脑组织。脑组织先在−20 °C下冷冻，然后切成2 mm厚的冠状切片。切片置于2% TTC溶液中，37 °C避光孵育30分钟，随后在4 °C下用4%多聚甲醛固定过夜。次日，使用数码相机对所有切片进行拍照。正常脑组织染成深红色，而梗死组织呈淡白色。使用ImageJ软件对梗死区域进行定量分析，并采用以下公式将梗死体积表示为百分比：
梗死体积 (%) = 梗死面积 / 脑切片总面积 × 100%。 (1)
脑组织的组织病理学检查
苏木精-伊红（HE）染色
采用苏木精-伊红染色法评估脑梗死周围皮层的组织病理学变化。干预7天后，大鼠通过腹腔注射过量戊巴比妥钠实施安乐死。随后迅速进行经心脏灌注，先用0.01 M磷酸盐缓冲盐水（PBS）冲洗以去除血液，再用250 mL冷的4%多聚甲醛（4 °C）进行固定。取出全脑，分离梗死周围皮层组织，并在4 °C下用4%多聚甲醛固定24小时。组织经石蜡包埋后冠状切片，厚度为5 µm。切片贴附于载玻片上，在60 °C烘烤30分钟，随后依次在二甲苯I–III中脱蜡（每步10分钟）。接着进行HE染色，之后脱水并透明化。最后用中性树胶封片，并使用尼康光学显微镜采集图像。
尼氏染色
尼氏染色用于评估梗死周围区域的神经元存活情况及尼氏体密度。干预7天后，处死大鼠，并经心脏灌注0.01 M PBS（37 °C），随后灌注250 mL 4%多聚甲醛（4 °C）。取出全脑，分离梗死周围区及对侧皮层组织，置于4%多聚甲醛中4 °C固定过夜。经石蜡包埋后，制备5 µm切片。切片在二甲苯中脱蜡10分钟，再通过梯度乙醇溶液（95%、90%、80%、70%和50%；每种浓度5分钟）水化，随后在室温下用尼氏工作液染色30分钟。用蒸馏水短暂漂洗后，切片经梯度乙醇脱水，在二甲苯中透明2分钟，最后封片。在光学显微镜下采集并分析图像。
蛋白质表达的Western印迹分析
通过Western印迹检测PI3K/Akt信号通路及突触可塑性相关蛋白的表达。干预7天后，大鼠经戊巴比妥钠过量麻醉处死，采集梗死周围运动皮层组织。将组织置于冰上，用放射免疫沉淀分析（RIPA）裂解缓冲液充分匀浆，于4 °C、1610 × g离心30分钟，提取总蛋白。采用商用二辛可宁酸（BCA）蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度。取等量蛋白（每泳道50 µg）进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE），随后电转至聚偏二氟乙烯（PVDF）膜。膜在室温下用5%牛血清白蛋白（BSA）溶液封闭1小时，以消除非特异性结合，然后于4 °C与一抗孵育过夜。用含吐温-20的三羟甲基氨基甲烷缓冲盐水（TBST）缓冲液洗涤三次后，室温下与二抗（稀释比例1:1000）孵育1小时。使用增强型化学发光（ECL）显影蛋白条带，并用ImageJ软件定量条带强度。相对蛋白表达量以目的蛋白与内参蛋白的比值表示。一抗包括：GAPDH（1:1000）、PI3K（1:1000）、磷酸化PI3K（1:1000）、Akt（1:1000）、磷酸化Akt（1:1000）、GAP-43（1:1000）、SYN（1:1000）、PSD-95（1:1000）和GDNF（1:1000）。
突触超微结构观察
采用透射电子显微镜（TEM）评估突触数量及结构完整性。干预7天后，对大鼠进行麻醉，并经心脏灌注含有4%多聚甲醛和2.5%戊二醛的混合固定液。采集梗死周围皮质组织块（1 mm × 1 mm × 1 mm），先在2.5%戊二醛中固定2小时，随后用1%四氧化锇后固定1小时。样品依次经过梯度乙醇脱水、环氧树脂包埋、超薄切片（厚度50 nm），并用醋酸铀和柠檬酸铅双重染色。使用透射电子显微镜观察突触超微结构。以8,000×放大倍数采集图像用于结构评估，以5,000×计数突触。每组随机选取三个神经 Neuropil 区域进行分析，计算平均突触数量，并采用单因素方差分析（one-way ANOVA）进行数据比较。
免疫荧光双标检测
通过免疫荧光双标染色评估梗死周围皮层中 SYN 和 p-Akt 的表达与分布情况。干预 7 天后，大鼠通过腹腔注射过量戊巴比妥钠实施安乐死，迅速分离梗死周围皮层组织。样品在 4% 多聚甲醛中固定 24 小时，包埋于最佳切割温度化合物（OCT）中，并切成 10 µm 厚的切片。切片在室温下空气干燥 1 小时，用 TBST 缓冲液洗涤三次以去除残留的 OCT 化合物。切片在室温下用 0.3% Triton X-100 通透 20 分钟，用 PBS 漂洗后，在室温下用 5% BSA 溶液封闭 1 小时。在避光条件下，切片于 4 °C 与兔抗 SYN 抗体（稀释度 1:200）和兔抗 p-Akt 抗体（稀释度 1:200）孵育过夜。次日，切片用 PBS 洗涤三次后，在室温下避光孵育二抗（稀释度 1:400）50 分钟。再经 TBST 缓冲液洗涤六次后，细胞核在室温下用 4′,6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）工作液复染 5 分钟。使用荧光显微镜在相同的曝光和背景设置下采集图像。选取代表性图像用于评估各组间运动皮层中 SYN 和 p-Akt 的表达模式。
统计学分析
统计学分析使用 GraphPad Prism 10.1.2 和 IBM SPSS Statistics 25 进行。数据以均值 ± 标准差（SD）表示。在多个时间点收集的行为学数据，包括 Zea Longa 评分、改良神经功能缺损评分（modified Neurological Severity Score）和改良 Ashworth 量表，采用双因素重复测量方差分析（ANOVA），其中组别为组间因素，时间为组内因素。当检测到显著的主效应或交互作用时，采用 Sidak 法进行事后多重比较。其他数据采用单因素方差分析，随后使用 Sidak 法进行事后比较。以双侧 p. < 0.05 为差异具有统计学意义。在柱状图中，统计学显著性由相应图注中定义的星号表示。
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SAE 可改善脑卒中后痉挛大鼠的神经功能并减轻肌肉痉挛
在模型验证后的第1、3、5和7天，采用Zea Longa评分、改良神经功能缺损评分（mNSS）和改良Ashworth量表对SAE在脑卒中后痉挛大鼠行为功能障碍中的治疗效果进行评估（每组n = 12）。Zea Longa评分和mNSS用于评估神经功能缺损，而MAS评分用于评估肌张力/肌肉痉挛程度。建模后，空白组和假手术组大鼠体重持续增加，行为正常，活动能力保持良好；相比之下，MCAO组大鼠出现体重下降、精神萎靡、摄食减少以及左侧肢体活动受限。经治疗后，SAE组和巴氯芬组大鼠的体重逐渐恢复，行为状态较MCAO组明显改善（图2）。
对于 Zea Longa 评分，双因素重复测量方差分析显示时间效应以及组别与时间的交互作用均具有显著性（p < 0.001）。事后分析显示，在任何时间点，空白组与假手术组之间的差异均无统计学意义（p = 1.000）。相比之下，在整个观察期间，MCAO 组、SAE...
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既往临床研究显示，头皮针刺联合运动可缓解脑卒中后痉挛患者的痉挛症状，同时改善其运动功能及日常生活活动能力（ADL）14,24。这些发现支持其临床应用价值。本研究进一步在大鼠模型中通过三种行为学指标——Zea Longa评分、mNSS评分和MAS评分，证实了SAE的治疗益处。重复行为学评估显示，SAE随着时间推移改善了神经功能缺损并减轻了肌张力增高，其改善趋势比模型组更明显且出现更早。这些行为学改善提示SAE对神经修复和运动控制均具有真实作用。然而，仅凭行为学改善无法揭示其潜在的组织水平或分子机制。因此，本研究进一步检测了脑梗死体积、神经元损伤、突触超微结构以及信号通路中相关蛋白的表达情况。
在组织水平上，TTC 染色显示，SAE 显著降低了 PSS 处理大鼠的脑梗死体积。HE 染色和尼氏染色进一步表明，与 MCAO 组相比，SAE 增加了梗死周围皮质区的神经元存活率和尼氏体密度，同时减轻了神经元变性和整体组织病理学损伤。这些结果表明，SAE 可缓解急性缺血性损伤，并...
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作者声明不存在任何竞争性经济利益。
作者贡献：
Sainan Zhao：概念化，方法论，形式分析，调查，项目管理，撰写 – 初稿，撰写 – 审阅 & 编辑。Lingxu Li：调查，数据管理，验证。Wenna Li：数据管理，正式分析，可视化。Chunmeng Wang：调查，资源。Yanlong Jin：软件，验证，撰写——审阅 & 编辑。冀广成：监督，经费获取，资源，撰写——审阅 & 编辑。
作者感谢所有参与本研究的受试者。本工作得到吉林省科技发展计划项目 [编号：YDZJ202401122ZYTS] 的资助。
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| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 2,3,5-三苯基氯化四氮唑染色液 | Beyotime | C0651 | TTC染色 |
| 3MM滤纸 | Whatman, UK | 3030861 | 蛋白质印迹转膜 |
| AKT抗体 | Affinity | AF0836 | 一抗 |
| 丙酮 | 国药集团化学试剂有限公司 | 10000418 | 电镜样品渗透 |
| Adobe Illustrator | Adobe Inc. | Version 29.5 (64-bit), https://www.adobe.com/products/illustrator.html | 64位版本，用于图形编辑和科研图像制作 |
| 无水乙醇 | 国药集团化学试剂有限公司 | 100092683 | 石蜡切片脱蜡 |
| 抗荧光淬灭封片剂 | 武汉百千度生物科技有限公司 | C1020 | 盖片 |
| BCA蛋白定量试剂盒 | MDL | MD913053 | 蛋白浓度测定 |
| 蓝化液 | 武汉百千度生物科技有限公司 | C2104 | 苏木精染色 |
| 化学发光成像系统 | CLINX，中国 | ChemiScope6100 | 系统检测目标蛋白 |
| 浓缩型正常山羊血清 | 武汉博士德生物工程有限公司 | AR1009 | 血清封闭 |
| DAPI | 武汉百千度生物科技有限公司 | C1030 | 细胞核染色 |
| 金刚石刀 | Daitome | Ultra 45° | 切超薄样品 |
| 分化液 | 武汉百千度生物科技有限公司 | C2104 | HE染色 |
| 干燥烘箱 | 天津莱博瑞仪器设备有限公司 | GFL-230 | 烘烤固定组织切片 |
| EDTA（pH 9.0）抗原修复液 | 武汉百千度生物科技有限公司 | C1052 | 抗原修复 |
| 电镜固定液 | ASPEN | AS1063 | 电镜样品固定 |
| 电泳电源 | 龙方 | LF-2000 | 提供电泳电压 |
| Embed 812包埋剂 | SPI | 90529-77-4 | 电镜样品渗透 |
| EndNote X9 | Clarivate Analytics (US) LLC | Version X9, https://endnote.com/ | 用于参考文献管理和学术引用格式化 |
| 冷冻台 | 武汉俊杰电子有限公司 | JB-L5 | 冷冻冷冻组织块 |
| GAP-43抗体 | Affinity | Df7766 | 一抗 |
| GAPDH抗体 | Affinity | AF7021 | 一抗 |
| GDNF抗体 | 百泰生物 | Bs-1024r | 一抗 |
| 冰醋酸 | 武汉百千度生物科技有限公司 | C2138 | 尼氏染色 |
| 载玻片和盖玻片 | 国药集团化学试剂有限公司 | 10212432C | 贴附组织切片 |
| GraphPad Prism | GraphPad Software, LLC | Version 10.1.2 (324) for Windows 64-bit, https://www.graphpad.com/ | 64位版本，用于统计分析和科研绘图 |
| 研磨仪 | 北京赫德 | N.9548 | 研磨组织样品 |
| HE染色液 | 武汉百千度生物科技有限公司 | C2103 | HE染色 |
| HRP标记山羊抗小鼠二抗 | Servicebio | C030205 | 二抗 |
| HRP标记山羊抗兔二抗 | SeraCare | 5220-0336 | 二抗 |
| 过氧化氢（H2O2） | 武汉百千度生物科技有限公司 | C5101 | TSA试剂制备 |
| IBM SPSS Statistics | IBM Corp. | Version 25, 64-bit, https://www.ibm.com/products/spss-statistics | 64位版本，用于统计数据分析与处理 |
| 成像系统 | 尼康，日本 | Nikon DS-U3 | 采集显微图像 |
| 金属浴 | COYOTE | H203-H | 恒温孵育 |
| 微波炉 | 格兰仕微波电器有限公司 | P70D20TL-P4 | 抗原修复 |
| NC膜（0.22 μm） | GVS, USA | ISEQ00010 | 蛋白转膜 |
| 中性树胶 | 国药集团化学试剂有限公司 | 10004160 | 脱水与封片 |
| PBS缓冲液 | 武汉百千度生物科技有限公司 | C0003 | 脱色与洗涤 |
| PI3K抗体 | Affinity | AF6241 | 一抗 |
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| 病理切片机 | 徕卡仪器（上海）有限公司 | RM2016 | 切石蜡切片 |
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| 移液器 | 大龙 | KE0003087/KA0056573 | 定量液体转移 |
| 蛋白酶抑制剂混合物 | Beyotime | P1005 | 蛋白酶抑制 |
| RIPA裂解液（中等强度） | Beyotime | P0013C | 组织裂解 |
| 冷冻离心机 | SEILOGEX，中国 | CF1524R | 低速样品分离 |
| SDS-PAGE电泳系统 | Beyotime | MiniProGel™ 凝胶制备、电泳及蛋白质印迹转膜系统 | 蛋白电泳分离 |
| 预制SDS-PAGE凝胶试剂盒 | MDL | MD911919 | SDS-PAGE电泳 |
| SYN（突触素）抗体 | 百泰生物 | bs-3501R | 一抗 |
| 摇床 | 其林贝儿 | TS-8 | 样品振荡洗涤 |
| 组织脱水机 | 武汉俊杰电子有限公司 | JJ-12J | 石蜡组织脱水 |
| 组织包埋机 | 武汉俊杰电子有限公司 | JB-P5 | 石蜡包埋组织 |
| 展片机 | 武汉俊杰电子有限公司 | KD-P | 展开石蜡切片 |
| 甲苯胺蓝染色液 | 武汉百千度生物科技有限公司 | C2131 | 尼氏染色 |
| 透射电子显微镜 | FEI | Tecnai G2 20 TWIN | 观察超微结构 |
| 三色预染广范围蛋白分子量标准（10–180 kDa） | Servicebio | G2091 | SDS-PAGE电泳 |
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