射精后精液暴露时间延长，精子DNA碎片率增加，活动力显著下降。在14份正常样本中，DNA碎片率在1小时、2小时和4小时分别增加了5.5%、11.5%和16.1%，同时精子活动力下降。这些结果提示，对于异地精液采集和处理，应尽量减少延迟。
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射精后精液暴露时间延长，精子DNA碎片率增加，活动力显著下降。在14份正常样本中，DNA碎片率在1小时、2小时和4小时分别增加了5.5%、11.5%和16.1%，同时精子活动力下降。这些结果提示，对于异地精液采集和处理，应尽量减少延迟。
精子DNA碎片化已知会对精子质量产生不利影响，进而对辅助生殖技术（ART）周期产生负面影响。通过在不同时间点检测精液中精子DNA碎片化（SDF），可以了解精液在长时间暴露条件下对精子DNA完整性的潜在影响。在本项初步研究中，采用精子染色质扩散法对14份正常精液样本进行了SDF检测，以模拟异地精液采集条件下的实际情况。对检测过程中各时间点的DNA碎片化百分比进行统计分析后发现，从射精到精液分析期间精液长时间静置会显著增加DNA碎片化程度。精子平均活力在采集后1小时显著下降7.4%，2小时下降14.5%，4小时下降18.7%；而平均SDF值在采集后1小时显著上升5.5%，2小时上升11.5%，4小时上升16.1%。精子质量随时间推移而下降的现象，可能为生育诊所制定ART周期中精子处理方案提供参考依据，尤其是在精液采集地点远离男科实验室的情况下。实验室可考虑建立接收异地采集精液的可接受时间阈值。
世界卫生组织（WHO）指出，全球有六分之一的人口（即17.5%）在其一生中的某个阶段会经历不孕不育1。约20%的不孕症病例仅由男性因素不育导致，另有30%至40%的病例中男性因素作为次要诊断2。即使在健康男性中，精液参数在个体之间也可能存在显著差异，包括浓度、活力、形态和存活率的波动3。因此，了解影响男性生育力的具体因素，对于在临床环境中提供恰当治疗至关重要。
一个正在发展的研究领域是精子DNA完整性对辅助生殖技术（ART）周期的影响4,5,6,7,8,9,10,11,12,13。世界卫生组织《人类精液检查与处理实验室手册》第5版指出，精子DNA碎片化（SDF）（无论是单链或双链断裂）可能影响胚胎发育、着床及妊娠结局14。Muriel 等人对SDF进行了分析，发现SDF升高会导致ART周期中的受精率、胚胎质量及着床率下降10。然而，仍需更深入地了解导致DNA碎片化的因素。
既往研究表明，氧化应激可导致精子活力下降、酶的生成与功能受损，尤其是DNA损伤8。此类DNA损伤可能包括但不限于基因缺失、错义翻译以及精子DNA碎片化（SDF）。目前临床上使用SDF检测来评估精子DNA的完整性。尽管已有研究将冷冻保存、处理培养基以及氧化应激与SDF相关联，但对于从射精到分析这段时间内SDF的变化仍知之甚少4,5。考虑到辅助生殖技术（ART）周期中家庭精子采集用于精子处理的情况日益普遍，从射精到分析的这段时间在精子生命周期中尤为关键15。在COVID-19大流行期间，家庭采集精子的方式变得越来越受欢迎，因其可减少与患者的直接接触，并提高舒适性与便利性。然而，目前尚无明确指南建议家庭采集样本从射精到分析的最佳时间间隔。因此，本研究的主要目的是明确在静置的精液中，SDF是否会随时间发生变化，以及这些变化是否对ART样本的处理具有实际意义。
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本研究遵循《赫尔辛基宣言》进行，并获得了大学医院机构审查委员会的批准（STUDY20201371）。所有参与研究的受试者均签署了知情同意书。共选取了来自俄亥俄州东北部一家学术性生育中心的14份精液样本。本实验中分析的所有样本均在本机构现场采集。由经过全面培训的男科技术人员按照制造商说明书对精液样本进行精子染色质扩散检测，以尽量减少人际差异。使用该试剂盒时，将完整、未固定的鲜精精子浸入经预处理载玻片上的惰性琼脂糖微凝胶中，随后在4 °C下冷却5分钟，使微凝胶固化。首先进行酸处理，以变性DNA碎片化精子细胞中的DNA，然后加入裂解缓冲液以去除核蛋白。用蒸馏水洗涤后，载玻片经梯度乙醇溶液脱水并自然风干。使用试剂盒提供的染色液染色后，在光学显微镜下观察，无DNA碎片的精子表现为具有较大扩散晕的核小体（晕的直径大于核心直径的1/3），而有DNA碎片的精子则表现为较小的晕（晕的直径小于核心直径的1/3）或无晕。精子DNA碎片率以具有DNA碎片和退化形态的精子数量占总数的百分比表示。每张载玻片上计数总计300个精子，将其分类为具有大或中等扩散晕，或无扩散晕。该计数重复两次以评估技术变异性，最终结果取两次计数的平均值。该试剂盒的诊断敏感性和特异性均为93%，每次实验均包含阳性和阴性对照。精液样本在0、1、2和4小时（0小时定义为37 °C下液化后15分钟）进行评估，并在室温（22–25 °C）下保存。
在0、1、2和4小时对每个样本进行额外的活动力分析。活动力评估由经验丰富的男科医师通过一次性计数板采用计数法完成。每个网格计数300个活动精子，重复计数两次。根据两次重复计数结果计算活动精子的平均浓度。
采用重复测量方差分析（ANOVA）对各个时间组进行比较。当检测到显著的总体效应时，采用Tukey的诚实显著性差异（HSD）检验进行事后两两比较。以 p 值 < 0.05 为具有统计学显著性。材料的详细信息汇总于材料表中。
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为评估精液长时间暴露对精子活力和DNA碎片化的影响，共采集了14份精液参数正常的患者样本，并在采集后的四个时间点进行分析。根据世界卫生组织第五版th edition14的精液分析标准，所分析的样本精液参数均属于“正常”范围。所有样本均在本生育中心现场采集，以确保各时间点分析参数的准确性。患者的平均年龄为35.4岁（24–45岁）。该组样本的初始精液参数结果显示，平均精液体积为3.7 mL，平均浓度为42.2百万/mL，平均活力为46.9%，平均正常形态率为4%，且所有样本通过定性检测均未检出白细胞（表1）。
随着时间的推移，精子活力呈进行性下降。与基线水平（0 h）相比，1 h时平均精子活力下降了7.4%（范围为3–16%），2 h时下降了14.5%（范围为4–31%），4 h时下降了18.7%（范围为8–37%）。精子活力随时间呈持续下降趋势，从基线时的58.6%降至暴露4 h后的42.5%（图1）。总体而言，不同时间...
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在本实验所包含的样本中，SDF 随时间推移而升高，而精子活力在同一时期内下降。这表明，在射精与分析或处理之间的时间间隔较长时，精液处于停滞状态可能会导致精子DNA完整性降低。样本在分析前停滞时间的延长可能增加了暴露于氧化应激相关环境的风险。如前所述，氧化应激可能对精子DNA质量产生不利影响，导致高水平的DNA片段化6,8,13。本研究的结果可能为辅助生殖技术（ART）周期中的精液处理提供参考依据。
首先，临床机构或许值得将该检测加入传统精液分析参数中，以确保在辅助生殖技术（ART）周期中使用精子前的精子DNA质量。优化精子质量可能与改善的临床结局相关，例如冷冻胚胎数量增加、整倍体率提高以及临床妊娠率和活产率上升，既往研究已报道过此类结果16。
其次，这些结果揭示了在家采集精液对辅助生殖技术（AR...
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作者声明无利益冲突。
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 方差分析计算器 | Statistics Kingdom | 统计分析 https://www.statskingdom.com/anova_manova.html | |
| Halosperm G2 | Halotech | HT-HSG2 | 用于检测精子DNA碎片化的体外诊断试剂盒 https://halotechdna.com/en/producto/halosperm-g2/ |
| Microcell | Vitrolife | 15423 | 用于精液分析的一次性计数室 https://www.vitrolife.com/products/sperm-processing/microcell--accessories/ |
| 白细胞/pH试纸质控品 | Medical Electronic Systems | A-CA-01752-00 | QwikCheck白细胞检测试纸的阳性和阴性质控品 https://mes-global.com/products/semen-analysis-validation-kits/qwikcheck-test-kits/qwikcheck-wbc-ph-test-strips-quality-control/ |
| QwikCheck 白细胞/pH检测试剂条 | Medical Electronic Systems | 0700 | 用于测定精液中的白细胞（WBC） https://mes-global.com/products/semen-analysis-validation-kits/qwikcheck-test-kits/ |
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