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方法文章

建立STAT6报告基因检测法用于筛选影响过敏性气道炎症的环境毒物

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DOI：

10.3791/71694

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2026年8月25日

 ,  ,  ,  , 
1Chakri Naruebodindra Medical Institute, Faculty of Medicine Ramathibodi Hospital, Mahidol University

本文内容

摘要

本方案描述了在人呼吸道上皮细胞中建立和验证稳定的 STAT6 荧光素酶报告基因检测的方法。该方法可在受控条件下高效筛选可调节 STAT6 活性的环境毒物和空气污染物组分 体外 条件。

摘要

与空气污染相关的过敏性气道炎症正日益成为重要的公共卫生问题。白细胞介素-4（IL-4）和白细胞介素-13（IL-13）可激活信号转导子与转录激活子6（STAT6）通路，该通路是过敏性气道炎症的核心介质，可能调节污染物引起的呼吸系统毒性。本研究描述了一种在人源气道上皮细胞中建立并验证稳定的STAT6荧光素酶报告基因检测方法，用于评估可调节STAT6信号通路的环境毒物。人支气管上皮16HBE14o-细胞− 细胞通过慢病毒载体转导了STAT6响应性荧光素酶报告系统，随后优化了嘌呤霉素筛选浓度和感染复数，并通过有限稀释法进行单克隆分离。筛选获得一个在连续传代中表现出强效且可重复诱导的稳定克隆。通过IL-4/IL-13刺激验证报告系统的响应性，并利用特异性STAT6、STAT5和STAT3抑制剂确认其对STAT6的依赖性。通过Z值量化检测性能′-因子分析，表明可重复的信号分离。此外，该检测方法还应用于单个空气污染物组分，以及苯并[b]荧蒽和颗粒物显著增加了STAT6报告基因活性。该方法为检测气道上皮细胞中STAT6活性以及筛选可调节过敏性气道信号通路的环境毒物提供了一种可扩展的策略。

引言

空气污染是当前最紧迫的全球公共卫生挑战之一，具有深远的健康影响和经济社会后果。目前，空气污染被列为全球第二大死亡风险因素，每年导致810万人死亡1,2,3。在各类空气污染物中，直径小于2.5微米的细颗粒物（PM2.5）因其可深入穿透呼吸道而构成最大的健康风险4,5。长期暴露于高浓度PM2.5已被明确证实与肺功能下降以及呼吸系统疾病住院率升高密切相关6。包括哮喘、过敏性鼻炎和特应性皮炎在内的过敏性炎症性疾病的患病率在全球范围内持续上升，且在污染严重的特大城市中尤为突出4。

变应性气道疾病（如特应性哮喘）主要由2型炎症反应介导，其特征是白细胞介素-4（IL-4）和白细胞介素-13（IL-13）水平升高，并激活信号转导子和转录激活子6（STAT6）信号通路7。在气道上皮细胞中，IL-4和IL-13驱动的STAT6磷酸化可促进黏液过度分泌并破坏上皮屏障，表明STAT6是变应性气道病理过程的核心介质，也是重要的治疗靶点8,9。来自小鼠模型的实验证据表明，暴露于PM2.5和二氧化硫会增强STAT6信号传导，并加剧变应性气道炎症10,11。然而，尚无系统研究评估单个空气污染物组分是否可直接调节人源气道上皮细胞中STAT6的转录活性。

空气污染由多种化学成分复杂的物质组成，包括颗粒物、多环芳烃（PAHs）、重金属和无机盐，这些成分各自对气道STAT6活化的作用尚不明确12,13。目前用于检测气道上皮细胞中STAT6活性的方法，如终点磷酸化检测或基于瞬时转染的报告系统，均不适用于大规模化学物质筛选。因此，建立一种在人源气道上皮细胞中稳定表达的STAT6报告系统，将为识别可调节过敏性气道信号通路的污染物提供可扩展的工具。本实验方案描述了在16HBE14o−气道上皮细胞中构建和验证稳定的STAT6荧光素酶报告检测方法，从而实现对环境样品及单一化学毒物诱导STAT6活化的定量评估，用于系统性筛选。

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方案

本研究使用已建立的16HBE14o−人支气管上皮细胞系，因此不适用人体受试者伦理审批。

1. 生成稳定表达STAT6活性报告基因的16HBE14o− 细胞

注意：图1 展示了工作流程的概览。

  1. 细胞培养
    注意：所有操作均须在 II 级生物安全柜中采用无菌技术进行。使用前须确认细胞无支原体污染。
    1. 将 16HBE14o− 细胞维持在添加了 10% 胎牛血清和 1% 青霉素-链霉素的最低必需培养基中。将细胞在含 5% CO2 的湿润环境中 37 °C 培养，并每隔一天更换一次培养基。
    2. 让细胞生长至约 80% 汇合度。吸除培养基，并用磷酸盐缓冲液冲洗细胞单层一次。
    3. 加入足量磷酸盐缓冲液覆盖细胞单层，并在 37 °C 下孵育 20 分钟。完全吸除磷酸盐缓冲液。
      注意：采用 20 分钟磷酸盐缓冲液孵育步骤，有助于破坏该细胞系形成的紧密细胞间连接。此孵育时间是本实验室优化后的改良方案。
    4. 加入足量 0.25% 胰蛋白酶-乙二胺四乙酸溶液覆盖细胞单层。在 37 °C 下孵育 10 分钟。
      注意：使用倒置光学显微镜监测细胞脱落情况。必要时轻轻敲击培养容器以促进细胞脱落。
    5. 加入相对于胰蛋白酶-乙二胺四乙酸溶液体积约五倍的完全培养基以终止酶活性。轻柔吹打悬浮液，获得单细胞悬液。
    6. 将细胞悬液转移至 15 mL 离心管中。在 25 °C 下以 300 × g 离心 5 分钟。
    7. 小心吸除上清液，并将细胞沉淀重悬于新鲜培养基中。轻柔吹打混匀，并在倒置光学显微镜下确认形成单细胞悬液。
    8. 使用血细胞计数板计数细胞，并将细胞浓度调整至后续实验所需密度。常规传代比例为 1:8。
      注意：有关培养容器的生长面积以及相应的磷酸盐缓冲液和胰蛋白酶-乙二胺四乙酸溶液体积，请参见 补充表 1 和 补充表 2。
  2. 确定嘌呤霉素诱导的细胞毒性
    ​注意：根据慢病毒载体编码的抗性基因选择相应的抗生素。
    1. 将 16HBE14o− 细胞以每孔 2 × 104 个细胞接种于 96 孔培养板中，每孔含 100 µL 完全培养基。将细胞孵育过夜。
    2. 将培养基更换为含嘌呤霉素的新鲜培养基，终浓度分别为 0.5、1、2 或 4 µg/mL。为 24、48 和 72 小时时间点分别准备独立的培养板。
    3. 向每孔加入 5 µL 细胞计数试剂。将培养板在 37 °C 下孵育 1 小时。
      注意：避免在加样过程中引入气泡，因其可能干扰吸光度测定。
    4. 使用 650 nm 作为参考波长，在 450 nm 处测定吸光度。在终点法模式下读数前，立即振荡培养板 15 秒。
    5. 使用公式 1 计算细胞活力14。
      细胞活力计算公式，样品、对照组、空白组的 OD450-650；生物测定分析公式。
      其中：
      吸光度计算公式 OD450-650，减法方法，用于分光光度法，公式。
      光密度公式（OD450-650），用于光谱实验中的吸收分析。
      光密度方程，OD450-650blank=OD450blank-OD650blank，用于光谱数据分析。
      注意：将未处理细胞定义为对照组，将不含细胞但含检测试剂的培养基定义为空白组。选择能够在 48–72 小时内完全清除未转导细胞的最低嘌呤霉素浓度。
  3. 确定最佳感染复数
    警告：须在注册的生物安全二级设施中，在生物安全二级条件下操作慢病毒颗粒，并遵守机构的生物安全规定。所有病毒操作均须在 II 级生物安全柜中进行。病毒污染的耗材或溢出物须用 10% 漂白剂覆盖至少 1 小时后，方可作为生物危害废物处理。
    ​注意：应优化感染复数，因其直接影响转导效率。
    1. 使用公式 2 计算所需慢病毒原液的体积15。
      MOI 计算公式，病毒颗粒与靶细胞的比值，分子生物学公式。
      其中：
      功能性病毒滴度公式，T_virus = TU/mL，病毒学研究数据分析公式。
      病毒体积公式，V_virus=病毒体积（mL），公式，病毒学研究，计算方法。
      静态平衡，公式：N_cells = 靶细胞数量，用于教育研究的示意图。
      注意：本方案中使用的 STAT6 荧光素酶报告慢病毒原液的功能性滴度为 5 × 107 转导单位/mL。对于 2 × 104 个靶细胞，MOI 为 20 时对应每孔 8 µL 慢病毒原液。对于不同滴度的病毒制剂，应重新计算病毒体积。
    2. 将 16HBE14o− 细胞以每孔 2 × 104 个细胞接种于 96 孔白色透明底培养板中，每孔含 100 µL 完全培养基。将细胞孵育过夜，直至达到约 80% 汇合度。
    3. 将培养基更换为含 5 µg/mL 多聚素（polybrene）和 STAT6 荧光素酶报告慢病毒（MOI 分别为 1、5、10 和 20）的新鲜培养基。设置一个不含慢病毒的未转导模拟对照孔。
      注意：根据病毒原液的功能性滴度计算各 MOI 所需的慢病毒体积。
    4. 将细胞与慢病毒颗粒共孵育 48 小时。将转导培养基更换为新鲜培养基，并继续孵育 24 小时。
    5. 将培养基更换为含白细胞介素-4 和白细胞介素-13（各 10 ng/mL）的新鲜培养基。将细胞孵育 24 小时。
    6. 向每孔加入 25 µL 荧光素酶检测试剂16。避光保护培养板，并在室温下孵育 20 分钟。
    7. 以线性方式振荡培养板 20 秒。使用全板读数模式和增益设置为 120 的条件测定发光强度。
      警告：加入荧光素酶检测试剂后 1 小时内记录发光信号，以捕获最大信号。请遵循试剂生产商的安全与操作说明。
      注意：所有吸光度和发光强度测定均应使用相同的多功能微孔板读数仪和采集参数。
  4. 转导细胞的筛选
    1. 将 16HBE14o− 细胞以 2 × 105 个细胞/mL 的密度接种于 24 孔培养板中。将细胞孵育过夜。
    2. 将培养基更换为含 MOI 为 20 的 STAT6 荧光素酶报告慢病毒和 5 µg/mL 多聚素的新鲜培养基。将细胞孵育 48 小时。
    3. 将转导培养基更换为新鲜培养基。继续孵育细胞 24 小时。
    4. 吸除培养基，并加入含 1 µg/mL 嘌呤霉素的新鲜培养基。将细胞孵育 5 天，每 2 天更换一次筛选培养基。
    5. 持续进行嘌呤霉素筛选，直至未转导的模拟对照孔中所有细胞均被清除。
      ​注意：转导后至少等待 24 小时再开始抗生素筛选，以允许抗性基因充分表达。
  5. 通过有限稀释法分离单细胞克隆
    1. 消化并计数经嘌呤霉素筛选的 STAT6 报告细胞。通过连续稀释制备浓度为 5 个细胞/mL 的单细胞悬液。
      ​注意：稀释过程中防止细胞聚集。必要时可通过细胞筛过滤悬液。
    2. 将 200 µL 细胞悬液分配至 96 孔培养板的每孔中，以获得平均每孔约一个细胞的密度。
    3. 在 24 小时内使用倒置显微镜检查每孔，识别仅含单个细胞的孔。排除含多个细胞或多个空间分离细胞集落的孔。
    4. 在第一周内监测选定孔，确认克隆性生长。每 3 天更换一次培养基。
    5. 在原始 96 孔板中扩增每个克隆约 20 天，或直至细胞汇合。将每个克隆依次转移至 6 孔板，再转移至 T-25 培养瓶。
      注意：在将细胞转移至 T-25 培养瓶前，应在 6 孔板中培养约 6 天，或待其达到适当汇合度后再转移。
      ​暂停点：可继续扩增克隆，或以每管 1 × 106 个细胞的密度，在含 90% 胎牛血清和 10% 二甲基亚砜的 1 mL 冷冻保存液中进行冷冻保存。
    6. 将扩增后的每个克隆以 2 × 105 个细胞/mL 的密度接种于 96 孔白色透明底培养板中。将细胞孵育过夜。
    7. 将培养基更换为含 IL-4 和 IL-13（各 10 ng/mL）的新鲜培养基。将细胞孵育 24 小时。
    8. 按照步骤 1.3.6–1.3.7 所述方法测定荧光素酶活性。比较各单个克隆的诱导报告基因活性。
    9. 在细胞传代次数增加的情况下重复荧光素酶检测。选择在多次传代中保持一致细胞因子诱导报告基因活性的克隆。
      注意：克隆 3 因其基础发光水平低，且在连续传代中能维持稳定的细胞因子诱导激活信号而被选中。

2. STAT6 活性报告基因检测方法的建立与验证

注意：图2 展示了工作流程的概览。

  1. STAT6 活性报告基因检测的验证
    1. 使用完全培养基，以每孔 100 µL 将 STAT6 报告基因细胞接种于 96 孔白色透明底板中，细胞密度为 2 × 105 个细胞/mL。将细胞培养过夜。
    2. 更换新鲜培养基，其中加入终浓度均为 10 ng/mL 的 IL-4 和 IL-13。同时加入以下选择性抑制剂：100 nM AS1517499（STAT6 抑制剂）、2.5 µM AC-4-130（STAT5 抑制剂）或 2.5 µM Stattic（STAT3 抑制剂）。
    3. 设置含 0.1% 二甲基亚砜（DMSO）的溶剂对照组。将细胞继续培养 24 小时。
    4. 按照步骤 1.2.3–1.2.5 所述方法，通过细胞计数实验测定细胞活力。
    5. 按照步骤 1.3.6–1.3.7 所述方法检测荧光素酶活性。
    6. 将每孔的发光信号根据其对应的细胞活力进行归一化处理，并以细胞因子处理的对照组为参照表达归一化值。
      注：细胞活力下降可能独立于 STAT6 活性而降低荧光素酶信号。只有在确认细胞活力处于可接受范围后，方可解释报告基因活性结果。
  2. 检测方法稳健性的评估
    1. 通过阳性对照组和阴性对照组各设置 21 个重复孔，计算 Z′ 因子以评估检测的稳健性。
    2. 使用公式 3 计算 Z′ 因子。
      静态平衡方程，Z因子公式，用于检测质量控制的数学表达式。
      其中：
      静态平衡方程，σₚ 表示对照组的标准差，用于教育目的的公式图示。
      标准差方程，σn，用于阴性对照准确性的统计分析。
      方程 μ<sub>p</sub>= 阳性对照的平均信号；统计数据分析概念。
      静态平衡，方程 μn= 阴性对照的平均信号，用于教育分析。
      注：Z′ 因子在 0.5 至 1.0 之间表明该检测适用于高通量筛选。

3. STAT6 报告基因检测在环境毒物筛选中的应用

警告：多环芳烃和重金属盐类具有毒性且可能致癌，操作时需谨慎。应使用适当的个人防护装备，所有操作均须在经认证的化学通风橱中进行，并按照机构危险废物处理程序处置被污染的材料。

  1. 环境毒物筛选
    1. 使用完全培养基，以每孔100 µL、细胞密度为2 × 105 个细胞/mL的条件，将STAT6报告细胞接种至96孔白色透明底板中。将细胞置于培养箱中过夜培养。
    2. 更换培养基，加入含有待测化合物的新鲜培养基，终浓度按实验需求设定（本方案中为10 µM），并在无IL-4和IL-13的条件下处理细胞。
    3. 设置阴性对照组，加入0.1%二甲基亚砜；设置阳性对照组，加入IL-4和IL-13，浓度均为10 ng/mL。将细胞继续培养24小时。
    4. 按照步骤1.2.3–1.2.5所述方法，通过细胞计数法测定细胞活力。
    5. 按照步骤1.3.6–1.3.7所述方法，检测荧光素酶活性。
    6. 将每孔的发光信号根据对应的细胞活力值进行归一化处理，并以阴性对照组为基准表示归一化结果。
    7. 在分析STAT6报告基因活性时，排除使细胞活力低于80%的化合物。
      注：细胞毒性条件下获得的报告信号应视为不可靠，因为细胞活力下降可能独立于STAT6信号通路而影响发光强度。

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结果

为确定用于稳定筛选的最佳嘌呤霉素浓度，将亲本16HBE14o−细胞用逐渐增加浓度的嘌呤霉素（0.5–4 µg/mL）处理，并在24、48和72小时后通过细胞活力检测评估细胞活力。嘌呤霉素以剂量和时间依赖的方式降低细胞活力，所有浓度在48–72小时后均使细胞活力降至20%以下（图3）。1 µg/mL的浓度是能够完全清除未转导细胞的最低浓度，可在48小时内将残留的细胞活力信号降低至约4.5%（p < 0.0001）。进一步提高嘌呤霉素浓度并未导致细胞活力进一步下降。因此，选择1 µg/mL嘌呤霉素用于后续转导细胞的筛选。

为了优化慢病毒转导效率，将16HBE14o−细胞分别以1、5、10和20的感染复数（MOI）转导STAT6荧光素酶报告慢病毒，转导时间为48小时，随后用IL-4和IL-13（各10 ng/mL）刺激24小时，以激活STAT6信号通路。如图4所示，相对荧光素酶活性（RLUs）随MOI的...

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讨论

IL-4/IL-13–JAK–STAT6 信号通路不仅是过敏性疾病（包括哮喘和过敏性鼻炎）发病机制中的关键驱动因素，也是重要的治疗靶点22。本方案描述了一种基于稳定细胞系的简单报告基因检测方法，用于鉴定调节 STAT6 活性的化合物。该检测可用于评估多种环境化合物对 STAT6 的调节作用，并可轻松适用于高通量筛选，如概念验证筛选研究中所示（图8）。通过将荧光素酶报告系统与平行的细胞活力检测相结合，该方法能够在最小化化合物诱导的细胞毒性干扰效应的同时，实现对 STAT6 信号通路调节作用的定量评估。

该方法的一个显著特征是使用稳定转导的永生化人支气管上皮细胞16HBE14o−，这是一种生理学上相关的细胞类型，其中污染物诱导的IL-4/IL-13信号通路参与过敏性气道炎症的发生。目前检测STAT6活性的方法存在重要的实际局限性。通过蛋白质印迹法（Western blotting）或酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测STAT6磷酸化水平或其下游靶蛋白，操作...

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披露

作者声明无利益冲突。

致谢

本工作由泰国国家研究理事会（NRCT）（资助编号：N42A680388）资助，本研究项目由玛希隆大学（2025年战略研究基金）（资助编号：35）支持。图1和图2使用BioRender.com创建（Pothipan, P. (2026). https://BioRender.com/h44gy3h）。

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材料

本文使用的材料清单
姓名公司目录编号评论
0.25% 胰蛋白酶-EDTAGibco25200072细胞解离试剂
15 mL 圆锥形离心管CorningCLS430791无菌聚丙烯离心管
16HBE14o- 人支气管上皮细胞系由泰国宋卡王子大学 Nawiya Huipao 博士和美国加州大学旧金山分校 Dieter C. Gruenert 教授惠赠RRID:CVCL_0112人支气管上皮细胞系（传代次数 35–40）；经确认无支原体污染，保留分化气道上皮形态及屏障特性。参考文献：Cozens AL, 等. Am J Respir Cell Mol Biol. 1994;10(1):38–47.
24 孔透明平底组织培养处理板Corning3527细胞培养板
6 孔透明平底组织培养处理板Corning3516细胞培养板
96 孔透明平底聚苯乙烯组织培养处理微孔板Corning3599细胞活力检测板
96 孔白色透明底聚苯乙烯组织培养处理微孔板Corning3610发光检测板
AC-4-130（STAT5 抑制剂）MedChemExpressHY-124500选择性 STAT5 抑制剂
AS1517499（STAT6 抑制剂）MedChemExpressHY-100614选择性 STAT6 抑制剂
苯并[b]荧蒽AccuStandardH-128N多环芳烃
II 级生物安全柜NuaireNU-543-400E用于无菌细胞培养操作
氯化镉（CdCl2）Sigma202908重金属化合物
细胞计数试剂盒-8（CCK-8）MedChemExpressHY-K0301细胞活力检测
细胞培养瓶，25 cm²（T-25）Corning430639组织培养瓶
CO2 培养箱NuaireNU-5710E维持在 37 °C、5% CO2、湿润气氛中
二甲基亚砜（DMSO）SigmaD2650溶剂（终浓度 0.1%）和冷冻保护剂（10%）
胎牛血清（FBS）SigmaF7524培养基添加剂（10%）和冻存液成分（10%）
血细胞计数板BOECOBOE14手动细胞计数
倒置相差显微镜ZEISSPrimovert细胞形态观察
荧光素酶检测试剂系统（ONE-Step）BPS Bioscience60690荧光素酶报告基因检测
氯化汞（HgCl2）Sigma215465重金属化合物
微孔板读板仪BioTekSynergy Neo2由 Gen5 软件（v3.08.01）控制的多功能微孔板读数仪/发光检测仪。在 15–20 秒线性振荡后，于 450 nm 波长测定吸光度，650 nm 作为参比波长。在 20 秒线性振荡后，使用 120 增益设置以终点模式测定发光值。
最低必需培养基（MEM）Gibco11095-080基础培养基
硫酸镍（NiSO4）东京化成工业N1203重金属化合物
颗粒物（PM）美国国家标准与技术研究院SRM 2975颗粒物标准参考物质
青霉素-链霉素（100×）Gibco15140122抗生素添加剂（终浓度 1%）
磷酸盐缓冲液（PBS）Gibco18912014洗涤缓冲液
聚凝胺SigmaTR-1003-G慢病毒转导增强剂
嘌呤霉素MedChemExpressHY-B1743A用于稳定细胞筛选的抗生素
重组人 IL-13Thermo Fisher ScientificA42526用于刺激的细胞因子
重组人 IL-4Thermo Fisher ScientificA42602用于刺激的细胞因子
STAT6 荧光素酶报告基因慢病毒BPS Bioscience78799慢病毒报告载体；储存液滴度为 5 × 107 TU/mL
Stattic（STAT3 抑制剂）MedChemExpressHY-13818选择性 STAT3 抑制剂

参考文献

  1. Organisation for Economic Co-operation and Development. The Economic Consequences of Outdoor Air Pollution. OECD Publishing; Paris; 2016.
  2. Thailand Pollution Control Department. Air Quality Assessments for Health and Environment Policies in Thailand. Thailand Pollution Control Department; Bangkok; 2018.
  3. Health Effects Institute. State of Global Air Report 2024. Available at: https://www.stateofglobalair.org/resources/report/state-global-air-report-2024
  4. State of Global Air. Trends in Air Quality and Health Impacts: Insights from Central, South, and Southeast Asia. 2025. Available at: https://www.stateofglobalair.org/
  5. Shi X. Acute effects of air pollution on human health in China: Evidence and prospects. China CDC Wkly. 2021;3(45):941-942.
  6. Tsai YG, et al. Long-term PM2.5 exposure impairs lung growth and increases airway inflammation in Taiwanese school children. ERJ Open Res. 2025;11(4).
  7. Walford HH, Doherty TA. STAT6 and lung inflammation. JAKSTAT. 2013;2(4):e25301.
  8. Moonwiriyakit A, et al. GPR120/FFAR4 stimulation attenuates airway remodeling and suppresses IL-4- and IL-13-induced airway epithelial injury via inhibition of STAT6 and Akt. Biomed Pharmacother. 2023;168:115774.
  9. Pelaia C, et al. Biological therapy of severe asthma with dupilumab, a dual receptor antagonist of interleukins 4 and 13. Vaccines (Basel). 2022;10(6).
  10. Yang Y, et al. Continuous exposure to PM2.5 exacerbates ovalbumin-induced asthma in mouse lung via the JAK-STAT6 signaling pathway. Adv Clin Exp Med. 2020;29(7):825-832.
  11. Li X, Huang L, Wang N, Yi H, Wang H. Sulfur dioxide exposure enhances Th2 inflammatory responses via activation of the STAT6 pathway in asthmatic mice. Toxicol Lett. 2018;285:43-50.
  12. Reiss R, et al. Evidence of health impacts of sulfate- and nitrate-containing particles in ambient air. Inhal Toxicol. 2007;19(5):419-449.
  13. Li R, et al. Key toxic components and sources affecting oxidative potential of atmospheric particulate matter using interpretable machine learning: Insights from fog episodes. J Hazard Mater. 2024;465:133175.
  14. Posimo JM, et al. Viability assays for cells in culture. J Vis Exp. 2014;(83):e50645.
  15. Baumlin-Schmid N, Salathe M, Fregien NL. Optimal lentivirus production and cell culture conditions necessary to successfully transduce primary human bronchial epithelial cells. J Vis Exp. 2016;(113).
  16. Nozeret K, Pernin A, Buddelmeijer N. Click-chemistry based fluorometric assay for apolipoprotein N-acyltransferase from enzyme characterization to high-throughput screening. J Vis Exp. 2020;(159).
  17. Rolling C, Treton D, Pellegrini S, Galanaud P, Richard Y. IL-4 and IL-13 receptors share the γc chain and activate STAT6, STAT3, and STAT5 proteins in normal human B cells. FEBS Lett. 1996;393(1):53-56.
  18. Deimel LP, Li Z, Roy S, Ranasinghe C. STAT3 determines IL-4 signalling outcomes in naïve T cells. Sci Rep. 2021;11(1):10495.
  19. Wingelhofer B, et al. Pharmacologic inhibition of STAT5 in acute myeloid leukemia. Leukemia. 2018;32(5):1135-1146.
  20. McMurray JS. A new small-molecule STAT3 inhibitor. Chem Biol. 2006;13(11):1123-1124.
  21. Chiba Y, Todoroki M, Nishida Y, Tanabe M, Misawa M. A novel STAT6 inhibitor, AS1517499, ameliorates antigen-induced bronchial hypercontractility in mice. Am J Respir Cell Mol Biol. 2009;41(5):516-524.
  22. Zhang X, et al. The immunogenetic landscape of allergic rhinitis: From cellular effectors to gene regulation and targeted therapies. Int J Biol Sci. 2026;22(3):1322-1345.
  23. Yu H, Li Q, Kolosov VP, Perelman JM, Zhou X. Interleukin-13 induces mucin 5AC production involving STAT6/SPDEF in human airway epithelial cells. Cell Commun Adhes. 2010;17(4-6):83-92.
  24. White SR, Martin LD, Stern R, Laxman B, Marroquin BA. Expression of IL-4/IL-13 receptors in differentiating human airway epithelial cells. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 2010;299(5):L681-L693.

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