孔圣枕中丹在自闭症相关通路中的作用机制：基于网络药理学、分子对接与实验验证的研究

摘要

本研究整合网络药理学、分子对接和分子动力学（MD）模拟，阐明空生镇中丹（KSZZD）在自闭症谱系障碍（ASD）中的核心活性成分和治疗靶点，通过丙氨酸扫描鉴定关键结合残基，并在丙戊酸诱导的ASD大鼠模型中验证其作用效果。

摘要

自闭症谱系障碍（ASD）是一种复杂的神经发育障碍，其发病机制与慢性神经炎症密切相关。作为经典的中药复方，孔圣枕中丹（KSZZD）因其具有报道的神经保护作用，常用于治疗神经发育障碍和记忆障碍，但其在ASD中的具体分子机制尚不明确。本研究结合网络药理学、分子对接分析和分子动力学（MD）模拟，从系统和原子水平系统阐明KSZZD治疗ASD的核心活性成分及潜在治疗靶点。随后通过丙氨酸柔性扫描鉴定关键结合残基，并利用丙戊酸（VPA）诱导的ASD大鼠模型评估其生物学效应。网络药理学分析表明，KSZZD中的关键成分槲皮素可能通过调控TNF-α介导的炎症信号通路发挥部分作用。分子对接结果显示，KSZZD核心成分与其靶点的结合能均低于-5.0 kcal/mol，其中槲皮素与TNF的结合亲和力最强（-8.52 kcal/mol）。分子动力学模拟提示，槲皮素可在TNF-α的活性口袋中保持稳定的结合状态，丙氨酸扫描进一步鉴定出GLU104和GLN102为维持该复合物结构稳定性的关键氨基酸残基。体内实验表明，槲皮素干预显著改善了VPA诱导的ASD大鼠的运动和探索行为，并有效降低了血清和脑组织中TNF-α的表达水平。这些结果提示，槲皮素可能至少部分通过抑制TNF-α信号通路，参与介导KSZZD的预测疗效。

引言

自闭症谱系障碍（Autism Spectrum Disorder, ASD）是一种复杂的神经发育障碍，其特征为社交沟通障碍、兴趣范围狭窄以及重复刻板行为¹。ASD 的病理机制极为复杂，涉及遗传变异、表观遗传调控与环境因素之间的相互作用，最终导致突触可塑性受损和神经环路连接异常^2,3。中枢神经系统（CNS）的慢性炎症在 ASD 的发病机制中起核心作用，针对神经炎症的干预措施已成为有前景的治疗策略。

孔圣枕中丹（KSZZD）是一个经典的中药方剂，首次记载于《备急千金要方》。该方由四种药用植物组成：龟甲、龙骨、远志和石菖蒲。传统上，孔圣枕中丹用于补益心肾、安神定志。临床上，常用于治疗智力发育迟缓和记忆障碍⁴。现代药理学研究表明，孔圣枕中丹及其活性成分具有神经保护、抗炎和抗氧化作用，并可能改善神经发育障碍模型中的学习、记忆及类似焦虑的行为表现⁵。我们的植物化学分析显示，槲皮素及其他黄酮类化合物是该方剂的关键活性成分，能够穿透血脑屏障并表现出显著的抗炎活性⁶。然而，这些活性成分在自闭症谱系障碍（ASD）中介导孔圣枕中丹治疗作用的具体机制仍不清楚。

随着计算生物学的快速发展，网络药理学、分子对接、分子动力学模拟和量子化学计算等技术为阐明中药活性成分与疾病靶点在原子水平上的相互作用提供了强有力的工具^7,8,9,10,11通过整合异质数据源，网络药理学能够构建一个复杂的、相互作用的网络 "成分-靶点-通路" 从系统生物学的角度构建网络，从而初步鉴定中医药干预疾病的关键生物节点。

在此基础上，可进一步采用分子对接技术模拟组分与靶标蛋白之间的几何匹配和能量适配，预测其结合模式及潜在活性。随后，通过分子动力学（MD）模拟研究该复合物在水相及生理条件下的结构波动性和结合稳定性。结合丙氨酸扫描，应用定点突变模拟精确识别维持结合亲和力的核心热点残基，并阐明药效团在氨基酸水平上的贡献权重。最后，通过设计严谨的药理学实验进行验证，可有效揭示中药化合物对特定疾病治疗作用的分子机制。

因此，本研究首先旨在通过网络药理学方法筛选康寿增智方（KSZZD）治疗自闭症谱系障碍（ASD）的核心成分及其作用靶点。随后，结合分子对接、分子动力学模拟和丙氨酸柔性扫描，鉴定维持复合物稳定性的“热点残基”，并评估槲皮素与TNF-α之间的动态相互作用模式。最后，在丙戊酸（VPA）诱导的ASD大鼠模型中，通过动物行为学评估、脑组织病理学检查及炎症因子表达水平检测，对计算结果进行实验验证。本研究旨在从多尺度视角探讨KSZZD来源成分可能影响自闭症相关炎症通路的潜在机制，为中医药干预神经发育障碍的进一步研究提供依据。

方案

网络药理学分析

"自闭症"作为关键词用于在 GeneCards 数据库（https://www.genecards.org/）中检索与自闭症相关的靶点^12,13,14。从数据库中获取的靶点在去除重复条目后进行合并。对于数据库预测未涵盖的活性成分已知靶点，依据文献报道予以补充¹⁵。疾病相关靶点及药物成分的潜在靶点均通过 UniProt 蛋白质数据库（https://www.uniprot.org/）统一标准化为基因符号，并对这两组靶点进行比对，以确定 KSZZD 治疗自闭症的潜在治疗靶点¹⁶。

基于传统中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP，http://lsp.nwu.edu.cn/tcmsp.php），根据口服生物利用度（OB ≥ 0.30）和类药性指数（DL ≥ 0.18）的标准，筛选出康肾止浊方（KSZZD）中潜在的生物活性成分及其相应作用靶点¹⁷化合物的SMILES标识符从PubChem数据库（https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）获取，并进一步利用Swiss Target Prediction（http://swisstargetprediction.ch/）预测TCMSP平台未包含的潜在作用靶点。¹⁸随后，使用 HERB 数据库（http://herb.ac.cn）依据类药五原则（Lipinski's Rule of Five）进行补充筛选，筛选标准如下：分子量（MW ≤ 500 Da）、辛醇-水分配系数（AlogP ≤ 5）、氢键供体数量（Hdon ≤ 5）、氢键受体数量（Hacc ≤ 10）以及可旋转键数量（RBN ≤ 10）。接着，利用 BATMAN-TCM 数据库（http://bionet.ncpsb.org.cn/batman-tcm/）进行靶点筛选，筛选条件为：评分阈值（≥0.84）、药物可开发性评分（≥0.10）以及 P 值（≤0.05）。最后，使用 UniProt 数据库（https://www.uniprot.org）将选定的靶标名称转换为标准的基因符号。

利用在线 Draw Venn Diagram 工具（http://bioinformatics.psb.ugent.be）鉴定药物靶点与自闭症靶点之间的重叠靶点。将这些重叠靶点导入 STRING 数据库（https://string-db.org/）以构建蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络¹⁹。设定物种为智人（Homo sapiens），并过滤掉置信度评分低于 0.40 的蛋白质-蛋白质相互作用。将所得网络导入 Cytoscape 3.10.0 软件进行可视化分析¹⁶，其中药物、化合物和靶点分别以红色菱形、蓝色圆形和绿色三角形表示，边的权重反映节点的度中心性。随后使用 CytoNCA 插件计算度中心性值，对核心化合物进行排序，并确定主要核心化合物。利用 Metascape 平台对靶基因进行生物信息学富集分析²⁰，包括 GO 分析（生物过程，BP；分子功能，MF；细胞组分，CC）和 KEGG 通路分析。

分子对接

上述鉴定出的与自闭症相关的受体蛋白在对接前经过预处理，包括修复缺失的残基、优化质子化状态以及去除结晶水分子，以维持受体结构的完整性。随后采用CDOCKER模块中的半柔性对接方法²¹。将共结晶配体10 Å范围内的残基定义为活性口袋，并在该区域内模拟配体-受体结合。

采用CDOCKER相互作用能作为关键指标评估对接结果，能量值越低，表明配体与受体之间的预测结合越稳定。通过比较核心成分与共结晶配体在活性口袋中的空间结合构象，评估对接模式的可靠性。选择结合能最优且相互作用最强的复合物作为后续分子动力学模拟的初始构象。

分子动力学模拟

根据分子对接结果，进行了分子动力学模拟，以探究槲皮素复合物与TNF-α之间的结合机制。该方法在原子水平上模拟分子的运动和相互作用，分析蛋白质、配体及周围环境的动态变化，从而提供有关分子构象变化、结合稳定性以及蛋白-配体动态行为的信息。采用TIP3P水模型对受体-配体复合物进行溶剂化处理，复合物与体系边界之间的缓冲距离至少为12 Å，以确保充分溶剂化并减少边界效应。离子浓度设定为0.154 M，并添加Na⁺和Cl⁻离子以中和体系电荷。为提高模拟的准确性，采用了Amber14SB蛋白力场²²，该力场能有效描述非键合分子间相互作用和结合模式，特别适用于蛋白-配体复合物的研究²³。

为进行初始能量最小化，采用最陡下降法运行5000步，以消除不合理的接触和高能构象，并使用10 kJ/mol/nm的收敛阈值，确保力场参数的弛豫。随后采用共轭梯度法运行2000步，进一步优化系统的热力学状态并确保体系稳定性²⁴。

在平衡阶段，首先进行100 ps的NVT系综模拟，时间步长为2 fs。系统逐渐加热至300 K，以减小初始结构的影响并达到热力学平衡。随后将系综切换为NPT，在1 bar的恒定压力下再进行100 ps的额外平衡，以稳定体系的密度和压力。该阶段用于在正式生产模拟之前使体系达到稳定的热力学状态²⁵。正式的分子动力学模拟持续20 ns，温度维持在300 K，压力为1 bar，时间步长为2 fs。每10 ps保存一次轨迹。为确保模拟的稳定性与准确性，定期监测温度、压力和体积等物理参数，以确认其保持在预期范围内。

丙氨酸灵活扫描

基于分子动力学模拟获得的稳定构象，对配体结合界面3 Å半径范围内的所有氨基酸残基进行了丙氨酸扫描。在此过程中，目标残基被系统性地替换为丙氨酸，从而截断侧链，同时保持主链构象，并消除由侧链介导的特异性相互作用。通过计算野生型与突变体复合物之间结合自由能的变化，量化了每个残基对结合亲和力的贡献权重。与传统的静态模型不同，本研究引入了侧链柔性弛豫机制，允许突变位点周围环境发生结构弛豫，从而更真实地模拟结合界面的动态响应。该分析旨在鉴定维持复合物稳定性的关键残基，为靶向自闭症相关蛋白的先导化合物优化提供能量特征图谱。

动物实验

实验动物

选取3月龄、在相同条件下出生并饲养的健康SPF级Sprague-Dawley（SD）大鼠6只（雄性3只，雌性3只）。室温控制在18–22 °C，相对湿度维持在60%–70%，光照周期为12 h光:12 h暗。所有动物实验操作均经遵义市第一人民医院实验动物伦理委员会批准（批准号：LunShen（2025）-2-362）。

动物交配、妊娠鉴定与分组

所有大鼠购入后均在SPF环境中适应性饲养1周。每天下午18:00将1只雌性大鼠与1只雄性大鼠同笼饲养。次日早晨8:00（合笼后12小时）进行阴道栓检查。发现阴道栓视为交配成功，当日定为妊娠第0.5天（GD0.5）。妊娠大鼠单独分笼饲养。每日称量并记录妊娠大鼠的体重。妊娠大鼠体重持续增加，平均每日增重2–5 g，分娩前总体重可增加约30%。妊娠约10天后，可见腹部出现典型的梨形不对称隆起，触诊可触及胎儿形成的硬块，可与肥胖引起的均匀柔软的腹部周径增大相区分。

模型建立与对照组设置：

对于模型组，随机选取两只妊娠大鼠，在妊娠第12.5天（GD12.5）单次腹腔注射VPA溶液（600 mg/kg）。VPA于妊娠第12.5天以600 mg/kg的剂量通过单次腹腔注射给药。该方案的选择依据Schneider和Przewłocki²⁶的开创性研究，该研究证实，在此特定妊娠时间点暴露于VPA可重现人类自闭症谱系障碍（ASD）的神经解剖学和行为学特征。此后，该方案已成为标准模型，并在近期使用相同参数的药理学研究中得到持续验证²⁷。对于空白对照组，选取一只妊娠大鼠，在相同时间点腹腔注射等体积的0.9%生理盐水。妊娠大鼠自然分娩，子代出生日记为出生后第0天（PND0）。所有子代大鼠在出生后第21天（PND21）断奶，并按性别单独饲养。

子代分组与干预

在出生后第28天（PND28），从经VPA暴露的妊娠大鼠的雄性子代中随机选取12只幼鼠（模型组6只，槲皮素干预组6只），并从经生理盐水暴露的妊娠大鼠的雄性子代中随机选取6只幼鼠（空白组6只）。确保各组幼鼠之间体重无显著差异。将经生理盐水处理的妊娠大鼠所产子代归为空白组，经VPA处理的妊娠大鼠所产子代归为模型组，经VPA处理且接受槲皮素干预的妊娠大鼠所产子代归为槲皮素干预组。

从出生后第28天（PND28）开始，持续进行为期4周的干预。对于槲皮素干预组，每天固定时间以100 mg/kg/天的剂量经口灌胃给予槲皮素混悬液。该剂量的选择依据如下综合证据：（i）既往的剂量探索研究发现，在脂多糖（LPS）诱导的神经炎症大鼠模型中，100 mg/kg剂量可有效缓解类焦虑行为并降低促炎性细胞因子水平²⁸；（ii）在产前给予丙戊酸（VPA）诱导的自闭症大鼠模型中，50 mg/kg剂量的槲皮素已被证明可预防社交互动缺陷和脑部氧化损伤²⁹；（iii）近期研究显示，在丙酸诱导的自闭症大鼠模型中，口服槲皮素可降低脑内TNF-α水平并改善类自闭症行为³⁰。综合上述独立验证结果，选择100 mg/kg剂量可确保在本研究的产后VPA诱导ASD模型中有效干预TNF-α介导的炎症通路。空白组和模型组则每天经口灌胃给予等体积的0.5%羧甲基纤维素钠（CMC-Na）生理盐水溶液。干预期间，所有动物均可自由摄食和饮水，每周测量体重一次，以便根据体重调整给药体积。

旷场实验

经过4周的干预（约出生后第56天，PND56），进行旷场实验以评估大鼠的自发活动能力和焦虑水平。旷场实验（OFT）是一种经典的动物行为学实验，用于评估实验动物与焦虑相关的行为表现。检测指标包括大鼠在开阔环境中的自发运动能力以及在旷场中心区域停留的时间。用于大鼠的OFT装置底部尺寸为长50 cm、宽50 cm，高30 cm，内壁为白色，并人为划分为16个小方格，其中中心区域包含4个方格，外围区域包含12个方格。实验环境保持安静，以避免声音刺激影响实验结果的准确性。每只大鼠被放置于箱体底部中央，随即同时开始视频记录和计时。摄像视野覆盖整个旷场区域，记录大鼠的自发活动轨迹及穿越方格的次数。每次测试持续5分钟，之后停止录像。每次测试结束后，使用75%酒精擦拭旷场箱的内壁和底部，以防止前一只动物遗留的粪便或体味对后续动物的测试结果造成干扰。更换大鼠后重复上述操作，直至所有大鼠完成测试。

病理学检测方法

用4%多聚甲醛固定后，脑组织使用全自动脱水机进行梯度脱水：75%乙醇中处理2小时，85%乙醇中1小时，95%乙醇中1小时，无水乙醇Ⅰ-Ⅳ中各20分钟。随后用透明剂Ⅰ透明25分钟，透明剂Ⅱ透明30分钟，接着进行石蜡包埋。将厚度为5 µm的切片分别用脱蜡液Ⅰ和Ⅱ各脱蜡30分钟，再经梯度乙醇复水。切片用苏木精染色5–10分钟，盐酸酒精分化3秒，碱性水返蓝。然后用醇溶性伊红复染3分钟，梯度乙醇脱水，透明，中性树胶封片，显微镜下观察。

血清和脑组织中 TNF-α 水平的检测

末次给药后，采集大鼠腹主动脉血液，于 4 °C 以 3,000 r/min 离心 15 分钟，收集血清上清液。同时剥离海马和皮层组织，按 1:9 的比例加入预冷 PBS 进行机械匀浆。匀浆液于 4 °C 以 12,000 r/min 离心 20 分钟，收集上清液。采用 BCA 法进行组织蛋白定量。按照 ELISA 试剂盒说明书，依次将待测样本和生物素化抗体加入微孔板中。孵育并洗涤后，加入亲和素-过氧化物酶复合物并孵育。再次洗涤后，加入底物溶液显色，用终止液终止反应，使用酶标仪在 450 nm 处测定吸光度。根据标准曲线计算血清（pg/mL）和脑组织（pg/mg prot）中 TNF-α 的浓度。

统计分析

使用 Microsoft Excel 中的 RANDBETWEEN 函数对大鼠进行随机分组，并生成用于大鼠分配的随机数字。本研究中所有实验数据均以均值 ± 标准差（SD）表示。在进行统计分析前，首先对每组数据进行正态性检验（Shapiro-Wilk 检验）和方差齐性检验（Levene 检验）。对于符合正态分布且方差齐性的数据，采用单因素方差分析（one-way ANOVA）。若差异具有统计学意义，则进一步采用 LSD 法进行多重比较。*p < 0.05，**p < 0.01，以及 ***p < 0.001 被认为具有统计学显著性。

结果

基于网络药理学研究探讨康寿增智丹治疗自闭症的作用机制分析

从 GeneCards 数据库中检索到共 15,770 个与自闭症相关的靶点。筛选相关性评分 ≥ 4.21 的靶点作为自闭症的潜在靶点，得到 1,014 个疾病靶点。将 KSZZD 的 827 个靶点与 1,014 个自闭症靶点取交集，获得 125 个共同靶点。使用 SRplot 平台³¹（https://www.bioinformatics.com.cn/）进行可视化，并绘制韦恩图，如图 1A所示。这 125 个靶点被认为是 KSZZD 可能发挥自闭症相关作用的潜在作用位点。

将KSZZD丸的活性成分及其作用靶点导入参考软件（见材料表）进行网络可视化分析，并剔除度值为0的活性成分节点。在图1B的全局网络中，菱形节点代表药物，方形节点代表...

讨论

一个关键的问题是，为何选择槲皮素而非其他核心成分进行实验验证，以及它是否能够代表抗癫痫解毒方（KSZZD）的整体效应。这一选择基于以下多方面的证据：（i）在产前VPA诱导的大鼠模型中，槲皮素显著预防了社交互动缺陷和脑部氧化损伤²⁹；（ii）在丙酸诱导的自闭症模型中，口服槲皮素降低了脑内TNF-α水平并改善了类自闭样行为³⁰；（iii）在LPS诱导的神经炎症模型中，槲皮素以剂量依赖的方式缓解了类焦虑行为并减少了炎症性细胞因子²⁸。综上，这些发现支持槲皮素在与自闭症谱系障碍（ASD）相关的模型中具有神经保护和抗炎作用。其次，已有研究表明槲皮素能够穿透血脑屏障³²，这是靶向中枢TNF-α介导的神经炎症的前提条件。第三，从网络药理学的角度来看，独立研究已将槲皮素鉴定为多种经典中药复方中针对神经精神疾病的枢纽核心化合物³³，这支持了优先选择枢纽化合物进行下游实验验证的合理性。综合来看，这些数据表明，作为KSZZ...

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
0.5% 羧甲基纤维素钠生理盐水溶液	文中未说明	未说明	作为空白/模型组及槲皮素混悬液的溶媒。
0.9% 生理盐水	文中未说明	未说明	用于空白对照组母鼠注射的溶媒。
含4% 多聚甲醛的PBS溶液	Thermo Scientific Chemicals	J61899.AK	用于脑组织固定。
75% 酒精	文中未说明	未说明	用于动物间开放场实验装置的清洁。
无水乙醇	文中未说明	未说明	用于包埋前组织脱水。
碱性水	文中未说明	未说明	用于苏木精染色切片的返蓝。
Amber14SB 蛋白力场	文中未说明	不适用	用于分子动力学模拟的蛋白力场。
BATMAN-TCM 数据库	文中未说明	不适用	在线靶点筛选数据库：http://bionet.ncpsb.org.cn/batman-tcm/
BCA 蛋白检测试剂盒	Thermo Scientific	23225	用于组织匀浆液的蛋白定量。
返蓝试剂	Thermo Scientific Richard-Allan Scientific	7301	苏木精染色后用于细胞核返蓝。
CDOCKER 模块	文中未说明	不适用	用于分子对接的半柔性对接模块。
透明/脱蜡试剂	Thermo Scientific Richard-Allan Scientific	Clear-Rite 3, 6901	可用于组织学流程中的透明和脱蜡步骤。
CytoNCA 插件	文中未说明	不适用	用于度中心性分析的 Cytoscape 插件。
Cytoscape 软件	文中未说明	版本 3.10.0	用于网络可视化和蛋白质-蛋白质相互作用分析。
Discovery Studio 软件	文中未说明	版本 2019 和 2021	用于受体预处理、对接和丙氨酸扫描。
Draw Venn Diagram 在线工具	文中未说明	不适用	用于维恩图的在线工具：http://bioinformatics.psb.ugent.be
伊红-Y（醇溶性）	Thermo Scientific Richard-Allan Scientific	7111	用于 H&E 染色中的胞质复染。
全自动脱水机	文中未说明	未说明	用于固定脑组织的梯度脱水。
GeneCards 数据库	文中未说明	不适用	用于获取自闭症相关靶点的在线数据库：https://www.genecards.org/
GraphPad Prism 软件	文中未说明	版本 9.5	用于统计分析和作图。
苏木精染色液	Thermo Scientific Richard-Allan Scientific	7211	用于 H&E 染色中的细胞核染色。
HERB 数据库	文中未说明	不适用	用于补充化合物筛选的在线数据库：http://herb.ac.cn
盐酸酒精	文中未说明	未说明	用于 H&E 染色过程中的分化步骤。
Metascape 平台	文中未说明	不适用	用于 GO 和 KEGG 富集分析的在线平台。
酶标仪	Thermo Scientific	Multiskan FC, 51119000	用于在 450 nm 波长下读取吸光度。
显微镜	文中未说明	未说明	用于观察 H&E 染色的脑切片。
Microsoft Excel 软件	Microsoft	未说明	使用 RANDBETWEEN 函数对大鼠进行随机分组。
封片介质	Thermo Scientific Richard-Allan Scientific	4111	用于染色切片的盖玻片封固和永久封片。
开放场实验装置	文中未说明	未说明	50 cm × 50 cm × 30 cm 的箱体，用于行为学测试。
石蜡	文中未说明	未说明	用于脑组织的石蜡包埋。
磷酸盐缓冲液（PBS），pH 7.4	Gibco	10010023	用作预冷的组织匀浆缓冲液。
PLIP 相互作用指纹分析	文中未说明	不适用	用于蛋白-配体相互作用指纹分析。
PubChem 数据库	文中未说明	不适用	用于获取 SMILES 标识符的在线数据库：https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/
槲皮素	文中未说明	未说明	以 100 mg/kg/天的剂量经灌胃给药。
大鼠 TNF-α ELISA 检测试剂盒	Invitrogen	ERA56RB	适用于血清和组织匀浆中 TNF-α 的检测。
冷冻离心机	Thermo Scientific	Sorvall ST 16R, 75004383	用于血清和组织匀浆的离心。
Schrödinger Suite 软件	Schrödinger, LLC	版本 2024	用于构建分子动力学模拟系统。
SPF 级 Sprague-Dawley 大鼠	文中未说明	未说明	使用 3 只雄性和 3 只雌性大鼠建立动物模型。
SPSS 软件	文中未说明	版本 25.0	用于统计分析。
SRplot 平台	文中未说明	不适用	用于可视化的在线平台：https://www.bioinformatics.com.cn/
STRING 数据库	文中未说明	版本 12.0	用于构建蛋白质-蛋白质相互作用网络：https://string-db.org/
SwissTargetPrediction 平台	文中未说明	不适用	用于靶点预测的在线平台：http://swisstargetprediction.ch/
TCMSP 数据库	文中未说明	不适用	用于生物活性化合物筛选的在线平台：http://lsp.nwu.edu.cn/tcmsp.php
TIP3P 水模型	文中未说明	不适用	用于分子动力学模拟的水模型。
UniProt 蛋白质数据库	文中未说明	不适用	用于将靶点名称标准化为基因符号：https://www.uniprot.org/
丙戊酸（VPA）溶液	文中未说明	未说明	在妊娠第12.5天以 600 mg/kg 剂量腹腔注射。
视频记录系统/摄像机	文中未说明	未说明	用于记录大鼠在开放场实验中的运动行为。