MIR30C rs928508 多态性与初产妇硬膜外分娩镇痛效果的关联性：一项观察性研究

摘要

这项观察性研究探讨了MIR30C rs928508多态性与中国台湾初产妇经阴道分娩时硬膜外分娩镇痛效果、疼痛评分、产程时长及不良反应之间的关联。

摘要

基因多态性可能影响个体对分娩疼痛感知及镇痛效果的差异。微小RNA-30c（MIR30C）在疼痛调节中发挥作用，但其与分娩镇痛之间的关联尚不明确。本研究探讨了MIR30C rs928508多态性与中国汉族初产妇硬膜外分娩镇痛之间的关系。共纳入202名接受罗哌卡因联合舒芬太尼标准化硬膜外镇痛的健康汉族初产妇。采用TaqMan法检测rs928508基因型（GG、GA和AA），并进行哈迪-温伯格平衡分析以评估群体遗传分布。使用视觉模拟评分（VAS）在镇痛前基线、镇痛后30分钟、镇痛后1小时以及停药后评估疼痛强度。采用多变量回归分析评估影响分娩镇痛效果的因素。与GA和AA基因型携带者相比，GG基因型携带者在镇痛前、镇痛后30分钟及停药后的VAS评分显著更高，且第一产程持续时间更长。多变量回归分析显示，GG基因型是镇痛后VAS评分升高的独立相关因素。各基因型间的新生儿结局和大多数不良反应相似，但GG基因型携带者穿刺部位疼痛的发生率较高。MIR30C rs928508 G等位基因与中国汉族初产妇基线疼痛增加、硬膜外分娩镇痛效果可能降低以及第一产程时间延长相关。这些发现支持进一步研究MIR30C基因变异在分娩镇痛中潜在的药物基因组学意义。

引言

分娩疼痛被认为是人类最剧烈的疼痛形式之一，不仅会引起产妇严重的生理应激，还可能通过神经内分泌机制对母体和新生儿结局产生不利影响，导致子宫收缩异常、胎儿窘迫以及产后抑郁等并发症^1,2。分娩镇痛能有效缓解产妇的疼痛和应激反应，改善分娩体验，在合理使用的情况下对母婴均具有良好的安全性³。硬膜外镇痛是临床实践中首选的分娩镇痛方法，已被证实可有效降低视觉模拟评分（VAS）疼痛评分。此外，联合用药方案的研究进一步提高了镇痛效果，同时减少了不良反应的发生⁴。

大量证据表明，作为遗传变异主要形式之一的基因多态性可能影响分娩镇痛的效果。一项研究显示，携带μ-阿片受体基因（OPRM1）多态性位点rs1799971 G等位基因的产妇，相较于AA基因型个体，需要更高的阿片类药物剂量才能实现分娩镇痛，且镇痛满意度较低。该位点的突变可能降低受体在细胞膜上的表达，从而减弱阿片类镇痛药的疗效⁵。此外，儿茶酚-O-甲基转移酶（COMT）基因的多态性可通过调节多巴胺代谢影响中枢疼痛敏感化程度，进而改变产妇在分娩过程中的疼痛阈值及对镇痛药物的反应性⁶。细胞色素P450 3A4（CYP3A4）基因的多态性也被报道可通过影响药物代谢速率来调节镇痛效果^7,8。此外，Zhang等人报道，剖宫产术后，MDR1 1236C>T TT基因型患者的芬太尼用量显著高于CC或CT基因型患者⁹。综上，这些研究结果有助于揭示个体间疼痛感知差异的遗传基础¹⁰。

随着表观遗传学研究的进展，非编码RNA基因多态性在疼痛调节中的作用日益受到关注。微小RNA（miRNA）作为关键的表观遗传调控因子，通过靶向信使RNA（mRNA）实现翻译抑制或降解，从而在疼痛信号传递及疼痛敏化的发展过程中发挥重要作用¹¹。大量研究表明，miRNA在神经病理性疼痛、炎症性疼痛及其他疼痛状态下呈现差异表达，并通过调控多种信号通路参与中枢疼痛敏化过程^12,13。miRNA的多态性可能影响其表达水平或与靶基因的结合效率，进而调节疼痛相关的信号级联反应¹⁴。既往研究已将miRNA多态性与复杂性区域疼痛综合征（CRPS）的表型异质性以及乳腺癌中的病理性疼痛相关联^15,16。在众多与疼痛相关的miRNA中，miR-30家族因其参与神经病理性疼痛调控而受到越来越多的关注^17,18。其中，miR-30c-5p的调控作用已被广泛研究。动物实验表明，在坐骨神经损伤后，疼痛相关神经结构中miR-30c-5p的表达显著上调，而给予合成抑制剂可持久逆转大鼠的神经病理性疼痛超敏反应。进一步的机制研究表明，miR-30c-5p靶向DNA甲基转移酶3a（DNMT3a）和DNMT3b的信使RNA，通过表观遗传调控影响神经细胞中的DNA甲基化水平，从而参与疼痛的长期维持¹⁹。临床研究也提示，患者体内miR-30c-5p水平与神经病理性疼痛强度之间存在相关性^20,21。值得注意的是，近期一项研究报道，在遭受职场欺凌的个体中，miR-30c rs928508位点的G等位基因会增加疼痛发生风险²²。另一项研究显示，该G等位基因可通过影响初级miR-30c（pri-miR-30c）向成熟miR-30c的加工过程，降低miR-30c的表达水平。然而，miR-30c多态性是否影响分娩疼痛敏感性或硬膜外分娩镇痛效果，目前尚不明确。

尽管分娩镇痛技术已不断优化，但微小RNA（miRNA）在疼痛调控中的作用机制正日益明确。miR-30c-5p 已被确认为神经病理性疼痛中的重要调控因子，其多态性与疼痛相关表型相关。然而，miR-30c 多态性是否参与分娩镇痛的调控仍有待阐明。因此，本研究聚焦于 MIR30C rs928508 多态性，探讨其与接受硬膜外镇痛的初产妇分娩镇痛效果之间的关联。研究结果可能为今后探索遗传变异在个体化分娩镇痛策略中潜在作用提供理论依据。

方案

本研究遵循石家庄市第六医院医学伦理委员会的伦理标准，并获得委员会批准（批准文号：No. 2022111709）。所有参与者在入组前均签署了书面知情同意书。研究设计与实验流程的示意图见图1。

图1. 研究设计与主要发现的工作流程示意图。该图总结了本研究的整体工作流程，旨在探讨MIR30C rs928508多态性与中国台湾初产妇硬膜外分娩镇痛效果之间的关联。工作流程包括受试者招募、MIR30C rs928508基因分型、基于基因型的分层、标准化硬膜外分娩镇痛的实施、结局评估以及统计分析。评估的结局指标包括视觉模拟评分（VAS）疼痛评分、产程持续时间、新生儿结局以及镇痛相关不良反应。该示意图还突出了主要研究结果，包括GG基因型携带者疼痛评分更高、第一产程延长以及穿刺部位疼痛发生率增加。VAS，视觉模拟评分；SNP，单核苷酸多态性。请点击此处查看该图的放大版本。

临床数据
在中国石家庄第六医院，通过医院的电子病历系统连续纳入2022年1月至2025年1月期间分娩的初产妇作为研究对象，共纳入202例。在妊娠28至36周期间的产前检查时，符合条件的初产妇被介绍本研究内容，并签署书面知情同意书。最终纳入分析的患者为妊娠37–41周分娩、单胎妊娠且胎位为头位的初产妇。

纳入标准如下：1）年龄为20至35岁的健康初产妇；2）中国汉族女性；3）单胎头位妊娠，孕周在37至41周之间；4）计划进行自然分娩或助产阴道分娩，且符合硬膜外镇痛指征。硬膜外镇痛的指征包括：（a）产妇知情同意并签署同意书；（b）处于活跃产程（宫颈扩张≥2 cm并伴有规律宫缩）；（c）产科评估确认适合阴道分娩。

排除标准包括：1）妊娠合并症，如妊娠期高血压、糖尿病或严重心血管疾病；2）多胎妊娠；3）在开始分娩镇痛后转为剖宫产；4）脊柱结构异常；5）分娩镇痛的禁忌证。分娩镇痛的禁忌证包括：（a）产妇拒绝或无法配合；（b）颅内压增高、脊柱畸形或穿刺部位局部感染；（c）凝血功能障碍（血小板计数 <70 × 10⁹/L 或已知凝血因子异常）；（d）未纠正的低血容量或休克；（e）对局部麻醉药或阿片类药物过敏；（f）产科急症（如胎儿窘迫需立即剖宫产、脐带脱垂或伴有活动性出血的前置胎盘）。

事后统计功效计算为0.91，表明样本量足以检测研究人群与参考人群之间基因型和等位基因频率的差异。

镇痛与麻醉
在实施硬膜外麻醉前，所有初产妇均接受生命体征的持续监测。呼吸抑制定义为呼吸频率<10次/分钟或血氧饱和度（SpO₂）<90%；低血压定义为收缩压<90 mmHg或较基线值下降>20%；尿潴留定义为产后6小时内无法自主排尿，需导尿处理。宫颈扩张程度由当班主治产科医师或注册助产士通过阴道指诊评估。所有检查人员均接受过使用宫颈检查模拟器进行宫颈扩张评估的标准化培训，并定期进行质量控制评估，以确保不同评估者之间的一致性。在活跃产程期间，常规每2小时进行一次宫颈检查，若怀疑产程进展异常，则检查频率更高。当记录显示宫颈扩张达到≥2 cm时，由当班产科医护人员启动硬膜外镇痛。

采用标准化的硬膜外镇痛方案。将产妇置于左侧卧位，通过L3–L4椎间隙，使用生理盐水阻力消失法确定硬膜外腔。将硬膜外导管向前推进3–4 cm进入硬膜外腔。在给予任何药物之前，先通过导管轻柔抽吸。未抽出脑脊液或血液表明导管位置正确，排除了导管位于蛛网膜下腔或血管内的可能。随后经硬膜外途径给予5 mL 1%盐酸利多卡因作为试验剂量。

随后进行10分钟的观察期，在此期间根据预设的安全标准对产妇进行严密监测。这些标准包括：无局部麻醉药全身毒性反应的征象（如口周麻木、金属味、耳鸣或躁动），无高位或全脊髓阻滞的征象（如运动阻滞迅速进展、呼吸困难、发声困难或意识状态改变），以及血流动力学稳定，定义为心率和血压维持在基线值的20%范围内。在确认所有安全标准均满足后，给予负荷剂量10 mL，其中含0.1%盐酸罗哌卡因和0.4 µg/mL枸橼酸舒芬太尼。

结局指标
记录初产妇的基本人口统计学和产科特征，包括年龄、体重指数（BMI）、孕周、停止镇痛时的体温、第一产程、第二产程和第三产程的持续时间以及总产程持续时间。停止镇痛时的体温由经过培训的护理人员使用标准化的数字腋下体温计测量，体温计置于右侧腋窝持续5分钟。产程各阶段的持续时间由当班助产士或产科医生根据预先定义的标准产科标准前瞻性记录。第一产程定义为从规律宫缩且宫颈扩张≥4 cm开始，至宫颈完全扩张（10 cm）为止；第二产程从宫颈完全扩张开始，至胎儿娩出结束；第三产程从胎儿娩出开始，至胎盘完全娩出结束。总产程持续时间为三个产程持续时间之和。所有测量数据均实时记录在产程图和电子病历中。所有参与产程管理的临床人员在研究开始前均接受了关于这些定义的统一培训。

使用视觉模拟评分法（Visual Analogue Scale, VAS）评估疼痛强度。每位产妇通过在一条10 cm长的直线上标记来自行报告其疼痛程度，随后由经过培训的研究人员测量并记录得分。由于基因分型是在包括VAS评分在内的所有临床结局数据收集完成后才进行的，因此评估人员对基因型信息设盲。疼痛评分在四个时间点记录：镇痛开始前（宫颈扩张达2 cm时）、镇痛开始后30分钟、镇痛开始后1小时，以及分娩后30分钟（对应于镇痛终止时间）。为考虑重复测量VAS数据引起的个体内相关性，对四个评估时间点采用双因素重复测量方差分析（ANOVA）。VAS评分范围为0至10，其中0–3分为轻度疼痛，4–6分为中度疼痛，7–10分为重度疼痛²³。

主要镇痛效果评估在镇痛开始后30分钟进行。疼痛强度采用视觉模拟评分（VAS）进行测量，其中0表示无疼痛，10表示可想象的最严重疼痛。根据预先定义，VAS评分>3被归类为镇痛效果不佳（二分类因变量编码为1），而VAS评分≤3则被归类为镇痛效果充分（编码为0）。该定义在分析过程中始终保持一致，主要的逻辑回归模型将此二分类结果作为因变量。

新生儿结局通过出生后1分钟和5分钟的Apgar评分进行评估。评分8–10分为正常，5–7分为轻度窒息，0–4分为重度窒息²⁴。Apgar评分依据美国儿科学会与美国妇产科医师学会联合发布的《新生儿复苏指南》（第7版），并结合医院新生儿科制定的标准评估规范进行。所有评估均由经过培训的新生儿护士或住院医师完成，且评估者对研究分组情况设盲。

记录了开始镇痛后不良反应的发生情况。不良反应包括呼吸抑制、低血压、尿潴留、穿刺部位疼痛、头晕、恶心或呕吐以及瘙痒。呼吸抑制定义为呼吸频率<10次/分钟或血氧饱和度（SpO₂）<90%；低血压定义为收缩压<90 mmHg或较基线值下降>20%；尿潴留定义为产后6小时内未能自行排尿而需导尿；穿刺部位疼痛定义为患者报告的穿刺部位疼痛，数字评分量表（NRS）评分≥4分；恶心和呕吐定义为出现恶心或至少发生一次呕吐；瘙痒定义为患者报告的皮肤瘙痒且无其他可识别的原因。从硬膜外镇痛开始至出院期间持续监测不良事件，由主管临床团队前瞻性记录。

血液样本采集与基因分型
在产前检查期间，从每位入选的初产妇中采集外周静脉血（2 mL），采血条件为禁食状态（禁食时间不少于8小时），且采血时间标准化为每日08:00至10:00之间，血液采集至含乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝剂的采血管中，用于后续核酸提取。所有样本在采集后立即于−80°C保存直至分析。DNA提取前的保存时间介于1至6个月之间。为尽量减少DNA降解，样本在保存前进行分装，并在整个研究过程中尽量减少冻融循环次数。冷冻样本在处理前于冰上缓慢解冻。

采用基因组DNA纯化试剂盒从全血中提取DNA。在进行基因分型之前，通过紫外分光光度法测定A260/A280比值以评估DNA浓度和纯度，并通过琼脂糖凝胶电泳评估DNA完整性。仅纳入符合预设质量控制标准的样本进行后续分析。

采用TaqMan单核苷酸多态性（SNP）基因分型检测法（货号：4351379）对rs928508多态性进行基因分型。使用VIC标记的探针检测等位基因A（5′-CAGGCCTGAGAGGCATGATGTTTGG-3′），FAM标记的探针检测等位基因G（5′-TAGCATCTTCCCAACACTTGCAATT-3′）。总聚合酶链式反应（PCR）体系体积为10 µL，包含5.0 µL的2× TaqMan基因分型预混液、0.25 µL预配制的TaqMan SNP基因分型检测液（引物-探针混合物）、10–20 ng基因组DNA模板，以及无核酸酶水补足至终体积。

使用定量PCR仪器，按照标准的TaqMan检测程序进行扩增。热循环条件包括：95°C下酶活化10分钟，随后进行40个循环，每个循环为95°C变性15秒，60°C退火/延伸60秒。扩增完成后，仪器软件自动采集荧光信号并进行等位基因 discrimination 分析，以确定样本基因型。

所有样本均进行双份分析。对于结果不一致的情况，进行第三次独立分析，并采用一致的结果。SNP 基因分型成功率为 ≥95%，随机选取的 10% 样本在重复检测中显示出 100% 的一致性。每次检测的反应板均包含阳性对照、阴性对照和无模板对照。基因型判定以盲法方式进行，所有参与基因分型的实验人员在整个研究期间均对临床结局数据保持盲态。

统计学分析
在研究人群中评估了 rs928508 等位基因的哈迪-温伯格平衡（HWE）。使用 Shapiro-Wilk 检验评估连续变量的正态性。符合正态分布的数据以均值 ± 标准差（SD）表示，不符合正态分布的数据则以中位数和四分位间距（IQR）表示。

对于三个组之间的比较，若满足正态性假设，则采用单因素方差分析（ANOVA）或双因素重复测量方差分析（two-way repeated-measures ANOVA），并随后进行Tukey's honestly significant difference（HSD）检验以进行事后多重比较。若不满足正态性假设，则采用Kruskal–Wallis H检验，并随后进行Dunn's事后检验并结合Bonferroni校正。分类变量以频数和百分比进行汇总，并采用卡方（χ²）检验进行分析。在分析前评估各单元格的期望频数，若任一单元格的期望频数<5，则采用Fisher精确检验。

采用双因素重复测量方差分析（ANOVA）对在多个时间点收集的重复VAS测量值进行分析，以考虑受试者内部的相关性。事后比较采用经Bonferroni校正的检验方法，以控制多重比较带来的误差。

采用二元 logistic 回归分析以确定与分娩镇痛效果不佳相关的因素。主要结局指标定义为硬膜外镇痛开始后 30 分钟时的镇痛效果。视觉模拟评分（VAS）采用预设阈值 3 进行二分类处理，其中 VAS >3 被归类为镇痛效果不佳，VAS ≤3 被归类为镇痛效果满意。变量根据临床相关性纳入多变量模型。采用方差膨胀因子（VIF）评估多重共线性，并检验变量间的潜在交互作用。多变量模型中所有变量的 VIF 值详见补充表 1。模型校准度通过 Hosmer–Lemeshow 拟合优度检验进行评估。

双侧 P 值 <0.05 被认为具有统计学显著性。统计分析采用 SPSS 软件（版本 23.0）进行。

结果

临床数据

在202名入组的初产妇中对MIR30C rs928508多态性进行分析，结果显示GA基因型最为常见（49.51%，n = 100），其次为GG型（26.73%，n = 54）和AA型（23.76%，n = 48）。相应的等位基因频率分别为G等位基因51.49%和A等位基因48.51%。如表1所示，该研究群体的基因型和等位基因分布总体上与Ensembl数据库（Ensembl Release 116，2026年6月）中报道的东亚人群频率一致。此外，研究队列中的基因型分布符合哈迪-温伯格平衡（P = 0.898）。

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Rs928508

讨论

本研究探讨了202名健康中国汉族初产妇群体中miR-30c rs928508多态性与硬膜外分娩镇痛效果之间的关联。研究结果表明，产妇的rs928508基因型与分娩镇痛期间的疼痛感知差异以及第一产程持续时间相关。此外，本研究所采用的硬膜外镇痛方案在不同基因型组间对新生儿结局及大多数母体不良反应均表现出总体相似的安全性。研究队列中的基因型分布符合哈迪-温伯格平衡，并且与Ensembl数据库（Ensembl Release 116，2026年6月）报告的东亚人群等位基因频率基本一致，表明入组研究队列具有良好的遗传稳定性和人群代表性。这些发现与大规模人类群体遗传学研究中关于不同人群中遗传变异模式的观察结果总体一致²⁵。

本研究的主要发现是G等位基因与分娩镇痛期间更高的疼痛评分相关。在多个评估时间点（包括镇痛开始前及镇痛开始后30分钟），携带GG基因型的受试者在视觉模拟评分（VAS）上显著高于携带GA或AA基因型的受试者。由于不同基因型组之间的基线VAS评分存在显著差异（GG组在镇痛开始前即表现出最高的疼痛评分），因此进一步进行了校正基线VAS...

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
琼脂糖	Sigma-Aldrich	A2929-250G	DNA完整性评估
宫颈检查模拟器	Erler-Zimmer	R16160	考官培训与质量控制
数字腋下体温计	Terumo	ETC207S	体温测量
DNA凝胶染色剂	Biotium	41020	核酸的可视化
EDTA 血液采集管	Greiner Bio-One	22040161	外周静脉血采集
电子病历系统	石家庄市第六医院	N/A	临床数据采集
硬膜外导管套件	泰利福（Arrow）	FlexTip Plus	硬膜外导管置入
硬膜外输注装置 / 患者自控硬膜外镇痛泵	Eitan Medical	17000-031-0035	硬膜外镇痛给药
硬膜外穿刺针（Tuohy）	Medline	N/A	17G × 用于L3硬膜外穿刺的3.5英寸Tuohy针–L4
凝胶成像系统	赛默飞世尔科技	iBright FL1500	DNA条带的可视化
基因组DNA纯化试剂盒	赛默飞世尔科技	K0512	从外周全血样本中提取DNA
水平凝胶电泳系统	实验室伙伴	LMHES-A201	DNA 质量控制
冰桶和碎冰	康宁	N/A	样本解冻与处理
盐酸利多卡因注射液（1%）	辉瑞	0409-4713-65	硬膜外试验剂量
微量离心管（1.5 mL / 2 mL）	康宁	430909（1.5 mL）；430915（2 mL）	样本储存与处理
可调体积微量移液器	Eppendorf	3125000044	PCR 与样品制备
多参数患者监护仪	乐普创意医疗	PC-3000	血压、心率和血氧饱和度监测
无核酸酶水	Promega	P1195	PCR 试剂配制
产程图表格或电子产程图系统	GrowthXP（PC PAL）	N/A	产程阶段记录
个人计算机工作站	联想（ThinkStation）	P2	数据处理与分析
PLINK 软件	Purcell 实验室	版本 1.9	哈代–哈迪-温伯格平衡分析
脉搏血氧仪	Microlife	OXY 500 BT	血氧饱和度监测
定量PCR仪	赛默飞世尔科技（应用生物系统）	QuantStudio Dx (4470660)	等位基因 discrimination 与荧光检测
冷藏型微量离心机	赛默飞世尔科技（Heraeus）	Fresco 21 (75002425)	样品制备
盐酸罗哌卡因注射液	Hikma Pharmaceuticals（Naropin）	0143-9265-10	硬膜外镇痛剂
SPSS 统计软件	IBM 公司	版本 23.0	统计分析
无菌气溶胶阻隔移液器吸头	赛默飞世尔科技（ART）	2149P-05	分子生物学应用
无菌生理盐水溶液	Baxter Healthcare Corporation	2B1301X	阻力消失技术
无菌注射器（5 mL，10 mL）	Becton, Dickinson and Company (BD)	309646; 309695	药物的配制与给药
枸橼酸舒芬太尼注射液	Hospira, Inc.（辉瑞）	0409-3382-11	阿片类镇痛成分
TaqMan 基因分型主混合液（2×)	赛默飞世尔科技（应用生物系统）	4371353	PCR扩增试剂
TaqMan SNP基因分型检测（rs928508）	赛默飞世尔科技	4351379	MIR30C rs928508 多态性的基因分型
超低温冰箱（-80） °C)	赛默飞世尔科技	FDE30086FV	长期样本保存
紫外分光光度计 / NanoDrop 分光光度计	赛默飞世尔科技（NanoDrop）	ND-1000	DNA浓度与纯度评估
视觉模拟评分法（VAS）评估表	N/A	N/A	用于疼痛评估的标准10厘米视觉模拟评分表形式