本研究旨在阐明miR-146a rs2910164多态性与变应性鼻炎（AR）易感性之间的关系。血浆miR-146a水平降低及rs2910164 GG基因型与AR风险升高、炎症反应增强以及AR患者更严重的临床表现相关。
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本研究旨在阐明miR-146a rs2910164多态性与变应性鼻炎（AR）易感性之间的关系。血浆miR-146a水平降低及rs2910164 GG基因型与AR风险升高、炎症反应增强以及AR患者更严重的临床表现相关。
变应性鼻炎（AR）虽不危及患者生命，但会严重影响其生活质量。微小RNA-146a（miR-146a）在免疫调节和炎症反应中具有关键作用；然而，miR-146a rs2910164多态性与AR易感性之间的关系尚不完全明确。本病例对照研究旨在探讨miR-146a rs2910164多态性对AR易感性的影响。研究共纳入180名非AR志愿者和211例AR患者。采用RT-qPCR法检测血浆miR-146a的表达水平；采用TaqMan-qPCR法检测rs2910164基因型；采用ELISA法检测血清IgE、IL-4、IL-6和IL-10的浓度。通过Pearson相关分析评估miR-146a表达水平与TNSS评分、RQLQ评分及血清因子浓度之间的线性相关性。采用Logistic回归分析识别AR的危险因素。AR患者中miR-146a rs2910164的GG基因型和G等位基因频率显著高于健康对照组。AR患者的血浆miR-146a水平降低。携带GG基因型的AR患者血浆miR-146a水平更低，并表现出更活跃的过敏和炎症反应。miR-146a的表达水平与过敏症状及临床表现严重程度密切相关。Logistic回归分析表明，血清IgE和IL-4水平是AR的独立危险因素，而IL-10和miR-146a的表达水平是AR的独立保护因素。AR患者血浆miR-146a水平降低，miR-146a rs2910164的GG基因型可增加AR的易感性。
变应性鼻炎（AR）是一种由变应原介导的、累及鼻黏膜的非感染性炎性疾病。AR的典型临床症状包括鼻痒、鼻塞、清亮鼻涕以及频繁打喷嚏。1在较严重的情况下，患者还可能出现嗅觉减退，甚至影响睡眠质量。流行病学数据显示，全球过敏性鼻炎的患病率逐年上升，已达到10%至25%2尽管过敏性鼻炎（AR）不会危及患者生命，但会严重干扰睡眠、学习和工作，显著降低生活质量，并给个人和社会带来沉重的经济负担3研究证实，变应性鼻炎（AR）是哮喘的危险因素，随着疾病进展，患者更易并发鼻窦炎或鼻息肉，进一步加重疾病负担。4,5因此，过敏性鼻炎的预防与控制已成为呼吸系统疾病领域的一项关键任务。然而，过敏性鼻炎的发病机制尚未完全阐明。深入探究其病理生理机制并制定针对性治疗策略具有重要意义，也是当前亟需解决的重要科学问题。
变应性鼻炎（AR）的发病与环境因素和遗传因素相关6。目前研究普遍认为，个体遗传易感性与变应原暴露环境之间的协同作用是AR发病的核心驱动因素。Brozek团队进一步证实，机体遗传易感性与环境暴露之间的相互作用是AR的根本病因2。在AR遗传机制研究领域，遗传多态性逐渐成为学者们关注的焦点。单核苷酸多态性（SNPs）作为遗传多态性的主要形式，是生物体遗传信息变异的主要原因7。越来越多的证据表明，IL-33 rs7044343位点的TT基因型可能作为AR预防与治疗的潜在靶点8。此外，CD14启动子区C-159T位点的TT基因型可作为AR发病风险的预测标志物9。这表明关键基因的SNPs可作为评估AR发病风险、实现早期预警以及精准防治的重要分子靶标，为深入理解AR的遗传易感机制提供了重要线索。
大量研究表明，microRNA（miRNA）的异常表达是多种疾病发生与发展的核心驱动因素之一10。miRNA具有在体液中稳定存在的特性，使其成为疾病诊断中高度敏感的分子标志物。miR-146a是一种具有广泛生物学功能的非编码RNA分子11。rs2910164多态性位于前体miR-146a序列的茎环区域，该位点的变异可影响pre-miR-146a的加工及成熟效率，从而改变成熟miR-146a的表达水平，并影响下游的免疫和炎症反应。既往研究已证实，miR-146a的过表达可显著降低哮喘小鼠模型的气道高反应性，并抑制致敏淋巴细胞的活化12。通过靶向并抑制表皮生长因子受体（EGFR）的活性，miR-146a可有效缓解鼻窦炎的炎症损伤13。此外，miR-146a的过表达还可通过阻断Toll样受体4（TLR4）信号通路，缓解过敏性鼻炎（AR）小鼠模型的病理症状14。这些发现凸显了miR-146a在调控呼吸系统疾病中的重要作用。
来自遗传多态性研究的现有证据表明，miR-146a rs2910164 位点的 G 等位基因频率与气道高反应性密切相关15。该单核苷酸多态性（SNP）也被视为韩国人群中哮喘风险的潜在生物标志物15。此外，Jimenez-Morales 团队进一步揭示，miR-146a rs2910164 位点的 CC 基因型对哮喘具有保护作用16。然而，目前尚无相关研究报道 miR-146a rs2910164 多态性与变应性鼻炎（AR）易感性之间的关联。因此，本研究旨在验证 miR-146a rs2910164 多态性对 AR 的影响，为 AR 的发病机制、临床诊断及治疗提供新的理论依据。
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伦理声明：
所有参与者均充分了解本实验的目的，并签署了知情同意书。本研究已获得福建医科大学龙岩第一附属医院伦理委员会的批准（批准编号：LYREC2023-k007-01）。所有操作均严格遵循相关指南、法规以及《赫尔辛基宣言》的规定。
受试者招募、纳入标准与样本采集
2023年1月至2025年5月期间，从福建医科大学附属龙岩第一医院耳鼻喉科门诊共招募了211名确诊为变应性鼻炎（AR）的个体及180名健康参与者（非AR）。AR的诊断标准依据《中华医学会变态反应学分会变应性鼻炎诊断与治疗指南》17。患者需表现出不少于两种AR临床症状，包括鼻痒、喷嚏、鼻塞或流涕。此外，鼻黏膜检查需显示苍白及水肿，且皮肤点刺试验（SPT）或血清IgE检测结果至少一项为阳性。SPT由门诊过敏原检测室专职人员操作，以确保结果的准确性与一致性。所有AR患者均在医务人员协助下完成鼻结膜炎生活质量问卷（RQLQ）和总鼻部症状评分（TNSS）评估，评分结果被记录用于后续分析。
在医院接受常规体检的健康志愿者被招募为非过敏性鼻炎（AR）组。纳入的受试者无个人或家族过敏性鼻炎史，无哮喘或其他过敏性疾病史，无慢性鼻窦炎或其他鼻腔炎症性疾病史，且近一个月内无呼吸道感染。此外，有严重心脏、肝脏、肺部或肾脏疾病史，或任何恶性肿瘤病史者均被排除在研究之外。
采集两组志愿者的外周静脉血样本。取部分抗凝静脉血用于DNA提取和血浆RNA提取；另取部分静脉血分离血清，用于检测血清相关因子（免疫球蛋白E（IgE）、白细胞介素-4（IL-4）、IL-6和IL-10）。
DNA 提取：
使用全血基因组 DNA 提取试剂盒（参见材料表）从 200 µL 外周静脉血样本中提取 DNA。血液样本采集至含锂肝素抗凝剂的试管中，分装后于 -20 °C 冷冻保存。具体操作步骤应严格遵循试剂盒说明书。最后使用 100 µL 洗脱缓冲液洗脱 DNA。采用核酸/蛋白分析仪（分光光度计）测定提取 DNA 样本的纯度（OD₂₆₀/OD₂₈₀ 比值在 1.8 至 2.0 之间）。检测合格的 DNA 样本于 -20 °C 保存，以备后续基因分型实验使用。
基因型检测
采用TaqMan SNP基因分型试剂盒检测miR-146a rs2910164基因型的分布情况。试剂盒信息已录入耗材清单。PCR总反应体系为10 µL，包含5 µL Master Mix、0.5 µL 探针引物混合液、10 ng模板DNA以及RNase-free水。DNA扩增使用Roche LightCycler 480 II实时荧光定量PCR仪进行。反应条件：95 °C预变性10分钟；40个循环（95 °C变性15秒，60 °C退火延伸1分钟），并在60 °C读取FAM/VIC荧光信号。扩增完成后，使用LightCycler 480软件分析采集的FAM/VIC双荧光信号，并对基因型数据进行统计学处理。仅出现FAM信号代表一种纯合基因型，仅出现VIC信号代表另一种纯合基因型，同时出现两种信号则为杂合基因型。对于信号异常或重复检测结果不一致的样本，将重新检测。每次实验均设置无模板对照和阳性对照以进行质量控制。所有样本均进行三次技术重复。
RT-qPCR
使用专用的miRNA提取试剂盒，从100 µL血浆中提取总血浆miRNA。试剂盒信息已录入耗材清单。采用分光光度计测定RNA浓度。提取合格的miRNA样品其OD₂₆₀/OD₂₈₀比值范围为1.8至2.0。取200 ng RNA用于逆转录合成cDNA，反应程序按照试剂盒的标准说明进行。逆转录反应总体积为20 µL，包括在42 °C孵育60分钟，随后在85 °C灭活5分钟。qPCR反应按照既定方案配制，总体积为20 µL。反应体系配置如下：10 µL qPCR预混液，0.4 µL上游引物，0.4 µL下游引物，1 µL cDNA模板，以及8.2 µL无RNase水。使用针对miR-146a及内参基因U6的特异性引物。扩增使用Roche LightCycler 480 II实时荧光定量PCR仪完成。qPCR扩增程序为：95 °C预变性30秒，随后进行40个循环，每个循环包括95 °C变性5秒，60 °C退火与延伸30秒。所有样品均设置三个技术重复。实验数据使用LightCycler 480软件进行分析。以U6作为内参校正样本间差异，首先计算ΔCt值（miR-146a的Ct值减去U6的Ct值），然后计算ΔΔCt值（实验组的ΔCt减去对照组的ΔCt），最终通过2⁻ΔΔCt计算获得miR-146a的相对表达水平。
ELISA
采用 ELISA 试剂盒检测血清中 IgE、IL-4、IL-6 和 IL-10 的水平。实验步骤参照试剂盒说明书进行，具体操作如下：首先，将浓缩洗涤液稀释，并对标准品进行梯度稀释，以制备标准曲线所需的工作溶液。其次，向各孔中加入 50 µL 稀释液、标准品溶液或待测样本，于 37 °C 孵育 60 分钟。孵育结束后，用洗涤缓冲液洗涤反应孔 3 次。随后，每孔加入 50 µL 酶标抗体工作溶液，于 37 °C 孵育 30 分钟。孵育完成后，弃去孔内液体，再次洗涤反应孔，然后加入显色溶液，于 37 °C 避光孵育 15 分钟。加入终止液后，使用酶标仪在 450 nm 波长处测定各孔的吸光度。根据标准曲线计算样本中目标因子的浓度。每个样本均重复检测三次，变异系数小于 10% 的数据视为有效。实验过程中设立空白孔和对照孔，用于质量控制。试剂盒的检测范围和灵敏度均符合制造商说明书中的规定。
数据统计
实验数据采用 SPSS 和 GraphPad Prism 9 软件进行分析。数据以均值 ± 标准差（mean ± SD）表示。采用 Shapiro-Wilk 检验评估连续变量的正态性，采用 Levene 检验评估方差齐性。两组间连续变量的比较采用独立样本 t 检验。多组间比较采用单因素方差分析（One-way ANOVA），并结合 Tukey 事后检验；双因素方差分析（Two-way ANOVA）用于评估两个独立因素的主效应及其交互作用。根据 3 倍标准差规则识别并剔除异常值。本研究未发现缺失数据。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析 miR-146a 对过敏性鼻炎（AR）的诊断效能。相关 ROC 参数及 95% 置信区间通过内置统计算法计算得出。采用 Pearson 相关分析评估 miR-146a 表达水平与血清相关因子水平之间的线性相关性。通过单因素和多因素 logistic 回归分析筛选 AR 的危险因素。单因素分析中 p < 0.05 的变量被纳入多因素 logistic 回归模型。以 p < 0.05 为差异具有统计学意义。
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受试者特征与基因型分布
对两组受试者的临床基线数据进行了统计分析。结果显示，血清IgE、IL-4、IL-6和IL-10水平存在显著差异。与非AR志愿者组相比，AR患者组血清IgE、IL-4和IL-6浓度升高，而IL-10水平降低(表1)。采用TaqMan-qPCR方法检测miR-146a rs2910164的基因型分布。分析结果表明，与非AR组相比，AR患者组中rs2910164位点的GG基因型（χ2=7.018，OR (95% CI) = 0.471 (0.269–0.825)，p=0.008）和G等位基因（χ2=7.474，OR (95% CI) = 0.637 (0.506–0.894)，p=0.006）更为常见。rs2910164位点的基因型分布在两组中均符合哈迪-温伯格平衡（pHWE = 0.191）（表2）。
血浆 miR-146a...
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变应性鼻炎（AR）是一种慢性过敏性呼吸道炎症性疾病。AR的核心机制是机体接触变应原后，由IgE介导的鼻黏膜炎症病变17,18。其临床症状主要包括鼻痒、鼻塞、喷嚏和清水样鼻涕，严重影响患者的生活质量。流行病学和遗传学研究证实，遗传易感性在AR的发生和发展中发挥着关键且不可或缺的作用19。本研究进一步揭示，miR-146a rs2910164多态性与AR易感性密切相关，其中rs2910164的GG基因型可能是致病基因型。AR患者血清IgE、IL-4和IL-6浓度升高，同时IL-10水平降低，提示过敏和炎症反应增强，这与该疾病的免疫病理学特征一致。
先前的研究表明，miR-146a 的单核苷酸多态性（SNP）与多种过敏性疾病的发生机制相关，例如类风湿关节炎20、系统性红斑狼疮21和炎症性肠病22...
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本文无利益冲突声明。
数据可用性：
本研究期间生成或分析的所有数据均已作为补充文件包含在本文中。进一步的询问可联系通讯作者。
作者贡献：
YMY 对研究的构思与设计、数据获取或数据分析与解释做出了重要贡献，并参与了稿件的撰写。YYH 协助完成了数据获取、数据分析和统计分析。GML 和 JCW 参与了结果的解释，并对稿件进行了关键性修改。所有作者均阅读并批准了最终稿件。
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