在一项针对125例持续HR-HPV感染且表现为脾虚证候患者的回顾性研究中，与单独使用重组人干扰素α-2b（rhIFN-α-2b）相比，温脾调肝方联合rhIFN-α-2b在HPV相关指标、阴道微生态、外周血T细胞亚群及症状改善方面均表现出更优的疗效，且总体记录的不良事件发生率无显著差异。
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摘要
摘要
本回顾性研究评估了外带汤（WDT）联合重组人干扰素α-2b（rhIFN-α-2b）在脾虚证型持续性高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）感染患者中的临床疗效，特别关注阴道微生态及外周血T细胞亚群的变化。研究分析了2024年3月至2025年9月期间接受治疗的125例患者的临床资料。根据治疗方案，57例患者接受口服外带汤联合rhIFN-α-2b阴道栓剂治疗，68例患者仅接受rhIFN-α-2b单药治疗。两组均连续接受三个疗程的治疗。治疗后，观察组的总有效率高于对照组（89.47% 对比 72.06%，p = 0.015），首次HPV转阴时间更短（P = 0.028）；而总体四分类HPV结局分布（P = 0.060）和HPV16/18特异性转阴率（P = 0.138）差异无统计学意义。观察组在阴道微生态指标方面表现更优，包括更低的阴道pH值、白细胞酯酶阳性率和胺试验阳性率，以及更高的过氧化氢正常率、阴道清洁度I–II级比例和乳杆菌优势率（P < 0.05）。真菌检出率、细菌性阴道病相关异常及混合感染的发生率也更低（P < 0.05）。治疗后，观察组外周血CD4+ T细胞百分比和CD4+/CD8+比值更高，CD8+ T细胞百分比更低（P < 0.05）。中医证候总积分、宫颈颜色异常及接触性出血等临床症状改善也更为显著。两组间记录的不良事件总体发生率差异无统计学意义（P = 0.057）。外带汤联合rhIFN-α-2b与更优的HPV转归、阴道微生态、外周T细胞亚群及症状改善相关；但因研究为回顾性设计且存在残余混杂因素，无法得出因果推论。
引言
宫颈癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一，持续的高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）感染是其发生和发展的关键基础1。流行病学数据显示，2020年全球约有60万例宫颈癌新发病例和34万例相关死亡病例2。在持续HR-HPV感染后，病毒早期蛋白E6和E7可能干扰P53和RB等肿瘤抑制相关通路，促进宫颈上皮细胞的不受控增殖，从而增加宫颈上皮内病变及宫颈癌的发生风险3。因此，在宫颈病变发生前促进HR-HPV的清除，仍是降低疾病进展风险的重要步骤。
在临床实践中，重组人干扰素α-2b（rhIFN-α-2b）是治疗高危型人乳头瘤病毒感染（HR-HPV）常用的局部抗病毒药物。其作用并非直接杀灭病毒，而是通过诱导抗病毒蛋白表达、增强细胞免疫反应以及调节炎症反应，从而抑制病毒复制和持续感染4。经阴道给药可使药物在宫颈及阴道病灶部位形成较高浓度，操作相对简便，局部药物浓度高，且全身不良反应较少5。然而，部分患者仍存在转阴速度慢、持续阳性或治疗后复发的情况。反复阴道用药还可能扰乱局部微生态平衡，导致阴道pH值升高、乳杆菌优势减少、过氧化氢产生能力减弱，以及白细胞酯酶和唾液酸酶异常。在较严重的情况下，可能增加外阴阴道假丝酵母菌病、细菌性阴道病（BV）及混合感染的风险6,7。一旦阴道微生态失衡，黏膜屏障和局部免疫防御功能将被削弱，从而增加HPV清除的难度8。
与持续性高危型人乳头瘤病毒感染相关的中医研究常从湿邪、带下病及正气不足等角度阐释其临床表现，通常将其与白带增多、分泌物颜色和质地异常、乏力、食欲减退、腹胀及大便稀溏等症状相联系9。完带汤（WDT）是临床常用的一种妇科方剂。本研究根据脾虚湿盛、带脉失约的病机应用此方。近期研究表明，完带汤可改善脾虚湿盛型外阴阴道假丝酵母菌病患者的阴道菌群结构，提示其在调节阴道微生态方面具有潜在作用10。从现代药理学角度看，该方剂中的相关药效成分具有抗炎和免疫调节作用，可能有助于改善黏膜屏障功能并抑制异常微生物增殖。这些作用可能有助于恢复阴道局部稳态，缓解白带异常症状，并改善持续性高危型HPV感染相关的低免疫应答状态11。
已有文献报道重组人干扰素α-2b（rhIFN-α-2b）及某些中药制剂或中药复方在治疗高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）感染中的作用12,13。干扰素主要通过局部抗病毒作用和免疫激活发挥作用，而温胆汤（WDT）旨在健脾祛湿、扶正祛邪、改善带下异常，并调节微生态。理论上，两者联合使用具有良好的协同性，可能有助于减轻单纯局部用药对阴道微生态的不利影响，促进乳酸杆菌优势的恢复，改善外周T淋巴细胞亚群失衡，并同时缓解脾虚型带下相关症状。然而，直接支持这一观点的证据仍较为有限。
基于此，本研究纳入了具有脾虚证型的持续性高危型人乳头瘤病毒感染患者，比较了温胆汤联合重组人干扰素α-2b与单用重组人干扰素α-2b在临床疗效、HPV转归、阴道微生态及其他方面的差异，旨在为提高高危型HPV清除率、纠正阴道微生态失衡、缓解脾虚型带下病症状以及优化中西医结合治疗策略提供临床证据。
方案
本研究方案已通过长兴县妇幼保健院伦理审查委员会批准（批准号：kyl1-1x-2023 (045)）。由于本研究为对已有临床记录的回顾性分析，故免除知情同意要求。本方案中使用的研究工具列于材料表中。
1. 研究对象
回顾性收集2024年3月至2025年9月期间在中国长兴县妇幼保健院就诊的持续高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）感染且辨证为脾虚证患者的临床资料。根据实际治疗方案，将接受重组人干扰素α-2b（rhIFN-α-2b）治疗并加用口服完带汤（WDT）的患者纳入观察组（n = 57），仅接受rhIFN-α-2b治疗的患者纳入对照组（n = 68）。所有病例资料均来源于门诊电子病历、实验室信息系统及其他院内数据库。
2. 诊断与辨证标准
持续性高危型HPV（HR-HPV）感染的操作性定义为：在治疗前相隔至少3个月采集的两份连续宫颈样本中，检测到至少一种相同的高危型HPV基因型。对于存在多重感染的患者，若在两个时间点均检测到至少一种相同的高危型HPV基因型，则定义为持续感染14。患者可能伴有异常阴道分泌物、宫颈局部炎症表现或宫颈细胞学异常；然而，存在高级别宫颈病变或需立即进行手术、物理治疗或肿瘤治疗的宫颈恶性肿瘤患者被排除在外。
根据“带下病”证候标准进行中医辨证分型 中药新药临床研究指导原则15当出现至少三项主要表现中的两项（即白带增多、白或淡黄色分泌物、分泌物稀薄），并伴有至少一项次要表现（包括面色苍白或萎黄、四肢乏力或水肿、食欲不振、大便溏薄、胃脘或胁肋部不适），且舌象与脉象相符时，诊断为脾虚证。证候分类不采用数值总分截断值。在疗效评估中，中医证候总评分包含八项内容：白带量、颜色、质地、面色、四肢乏力或水肿、食欲、大便性状以及胃脘或胁肋部不适，每项根据预设的严重程度标准按0–3分评分。补充表1），总分范围为0–24分；分数越高，表明症状越严重。
3. 纳入与排除标准
纳入标准为年龄18–65岁的女性患者；治疗前人乳头瘤病毒高危型（HR-HPV）检测阳性，并符合持续感染的定义；中医辨证分型符合脾虚型带下病；接受重组人干扰素α-2b（rhIFN-α-2b）单药治疗，或五毒汤（WDT）联合rhIFN-α-2b治疗；至少具备治疗前后HPV检测、阴道微生态检查、中医证候评分及疗效评价数据；且病历资料和随访数据足以用于主要结局指标的分析。
排除标准包括：妊娠或哺乳期；高级别宫颈上皮内病变、宫颈癌或其他需要立即手术干预的宫颈病变；严重的心脏、肝脏、肾脏或造血系统疾病、恶性肿瘤或免疫缺陷疾病；近期使用过免疫抑制剂、糖皮质激素或其他可能显著影响免疫功能的药物；治疗期间同时使用其他抗HPV药物、阴道微生态制剂、抗菌药物或其他可能影响疗效评估的治疗；因精神疾病导致无法配合治疗或随访；以及缺失主要观察指标，以致无法判定HPV转归或临床疗效。
4. 治疗方法
对照组接受重组人干扰素α-2b阴道栓剂治疗。睡前清洁外阴和双手，佩戴薄膜指套，将栓剂置于阴道后穹窿靠近宫颈处。每疗程重组人干扰素α-2b治疗共进行9次阴道给药，每隔一日给药一次。共进行三个连续疗程，总计计划给药27次。月经规律的患者于月经结束后第3天开始用药，月经期间暂停给药；月经不规律的患者按治疗周期用药，月经期间暂停。绝经后患者于领取药物次日开始治疗。治疗期间建议患者减少性生活频率，并正确使用安全套。在完成三个连续治疗疗程后进行疗效评估。
观察组在上述治疗基础上加用温胆汤（WDT）。处方组成包括党参 Codonopsis Radix（15 g）、白术 Atractylodis Macrocephalae Rhizoma（15 g）、山药 Dioscoreae Rhizoma（30 g）、白芍 Paeoniae Radix Alba（10 g）、苍术 Atractylodis Rhizoma（10 g）、车前草 Plantaginis Herba（10 g）、荆芥炭 Schizonepetae Spica Carbonisata（5 g）、陈皮 Citri Reticulatae Pericarpium（5 g）、柴胡 Bupleuri Radix（10 g）及甘草 Glycyrrhizae Radix et Rhizoma（6 g）。中药饮片由长兴县妇幼保健院门诊中药房提供。每日处方加饮用水浸泡30分钟，水量以高出药面约2–5 cm为宜；煮沸后煎煮两次，头煎25分钟，二煎20分钟。两次煎液合并后定容至400 mL，分早晚两次服用，每次200 mL。由注册中医师根据医院药房标准操作规程对药材的品种、称量重量及处方符合性进行核对，并保留供应商/批号、制备及配发记录。每疗程为14天，共连续进行三个疗程，月经期间暂停用药。依从性通过处方记录和随访资料进行回顾性评估。若完成全部三个规定疗程且无提前终止治疗记录，则视为依从；根据方案在月经期间暂停用药不视为不依从。任何提前终止治疗的情况均作为单独记录的安全性结局保留。
5. 观察指标
- 临床疗效和 HPV 检测结果
采用商业化的 HPV 分型检测方法进行高危型 HPV（HR-HPV）DNA 检测与分型。通过聚合酶链式反应扩增后，进行流式杂交分析。该检测可识别 HPV 6、11、16、18、31、33、35、39、42、43、44、45、51、52、53、56、58、59、66、68 和 81 型。在本研究中，HR-HPV 定义为 HPV 16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66 或 68 型任一阳性。
基线宫颈脱落细胞样本在首次治疗前 7 天内采集。每次治疗后约每月进行一次随访 HPV 检测，以确定首次转阴时间；第三次治疗结束后约 4 周采集最终治疗后样本。在轻柔去除多余宫颈黏液后，将无菌宫颈刷插入宫颈口并旋转五次，随后立即放入提供的保存液中。样本标注唯一的患者标识符和采集日期，于 4 °C 保存，并在 48 小时内完成检测。基线和随访样本均在同一家实验室使用相同的检测方法、平台和判读标准进行处理。
每轮检测均包含试剂盒规定的阳性和阴性对照，以及内部扩增对照和生物素杂交对照；仅当所有必需的对照结果有效时，检测结果才被接受。若样本的内部对照失败或杂交模式不确定，则重新提取并复测。若重复检测仍无效，则需重新采集样本。研究期间，该实验室参与了中国国家临床检验中心 HPV 分型外部质量评估计划。研究分组分类在数据提取阶段回顾性完成，因此在 HPV 结果判读时对实验室人员设盲。
治疗后的 HR-HPV 结果分为四个互斥类别：完全转阴、部分转阴、持续阳性或新出现阳性 HPV 型别。对于多重感染患者，完全转阴要求所有基线 HR-HPV 型别均不可检出；部分转阴要求至少清除一种但非全部基线型别；持续阳性指仍可检测到一种或多种基线型别，且未检出新型别；若随访中检出任何新的 HR-HPV 型别，则该病例在四分类分析中归入“新出现阳性”类别。总有效率定义为完全转阴或部分转阴患者所占的比例。对于基线 HPV16 和/或 HPV18 阳性的患者，HPV16/18 特异性转阴要求相应的基线 HPV16/18 型别不可检出，无论是否存在其他持续的 HR-HPV 型别。首次 HPV 转阴时间从治疗开始日起计算，至首次记录到完全或部分转阴为止。 - 阴道微生态的理化、酶学及评分指标
治疗前后采集阴道分泌物样本，用于阴道微生态检查，包括阴道 pH 值、过氧化氢、白细胞酯酶、唾液酸酶、胺试验及阴道清洁度。同时提取 Nugent 评分16、Donders 评分17，以及判断微生态是否正常或紊乱。根据阴道微生态报告，记录乳杆菌优势、真菌检出、滴虫检出、细菌性阴道病（BV）相关异常及混合感染情况。对于基线无乳杆菌优势的患者，评估治疗后乳杆菌优势的恢复情况。常规微生态检查未进行种水平鉴定，且未区分产 H₂O₂ 与非产 H₂O₂ 的乳杆菌菌株。 - 外周免疫功能指标
治疗前后采集外周静脉血。采用四色 T 细胞亚群试剂，通过流式细胞术测定 CD4+ 和 CD8+ T 细胞百分比，并计算 CD4+/CD8+ 比值。 - 局部宫颈体征及妇科检查结果
从妇科检查记录中提取局部宫颈体征，包括宫颈柱状上皮外移、宫颈颜色异常、宫颈肥大、宫颈息肉或类似肿瘤样改变，以及接触性出血。 - 主要结局指标的改善程度
计算 Nugent 评分、Donders 评分及中医证候总积分的降低值。对于基线无乳杆菌优势的患者，评估乳杆菌优势的恢复情况；微生态正常化依据常规阴道微生态报告中的最终综合分类判定。
6. 安全
治疗期间及治疗后的不良反应均从病历记录和随访记录中提取，包括阴道瘙痒、阴道灼热感及其他症状。实验室检测到的阴道微生态异常，若病历或随访记录中未记载相应的临床诊断或症状，则不归类为不良事件。
7. 统计学方法
采用统计软件进行统计分析。定量数据首先进行正态性检验。符合正态分布的数据以均值 ± 标准差表示，组间比较采用独立样本t检验，组内治疗前后的比较采用配对t检验。不符合正态分布的数据以中位数（四分位间距）表示，组间比较采用Mann–Whitney U检验，组内治疗前后的比较采用Wilcoxon符号秩检验。计数资料以例数和百分比表示，组间比较采用χ2 检验或Fisher确切概率法。等级资料采用秩和检验进行分析。
为了检验治疗与总有效率之间的关联在考虑基线差异后的稳健性，采用包含治疗组、年龄、病程、体重指数、基线HPV阳性基因型数量以及基线HPV16/18状态作为协变量的修正泊松回归模型，并使用稳健方差估计。报告了校正后的相对风险（RR）及其95%置信区间（CI）。治疗后乳杆菌优势与正常过氧化氢状态之间的关联通过χ2检验进行探索性分析，并采用按治疗组分层的交叉列联表评估关联方向的一致性。统计学显著性界定为P < 0.05。
结果
基线特征比较
治疗前，两组在年龄、病程、体重指数（BMI）、月经状态、HPV感染基因型数量或其他基线特征方面均未观察到统计学显著差异（P > 0.05; 表 1).
| 观察组 (n=57) | 对照组 (n=68) | 统计学 | P 值 | |
| 年龄（岁） | 41.37±8.21 | 42.07±8.75 | t = -0.461 | 0.645 |
| 病程（月） | 14.82±5.76 | 15.26±6.14 | t = -0.410 | 0.682 |
| 身体质量指数（千克/平方米）²) | 22.67±2.58 | 22.94±2.64 | t = -0.573 | 0.567 |
| 规律月经 | 42 (73.68) | 50 (73.53) | χ2=0.120 | 0.942 |
| 月经不规律 | 10 (17.54) | 13 (19.12) | ||
| 绝经期 | 5 (8.77) | 5 (7.35) | ||
| 单一基因型感染 | 36 (63.16) | 42 (61.76) | χ2=0.026 | 0.873 |
| 多重基因型感染 | 21 (36.84) | 26 (38.24) | ||
| HPV16/18 阳性 | 20 (35.09) | 25 (36.76) | χ2=0.038 | 0.846 |
| HPV阳性基因型数量 | 1.39±0.53 | 1.41±0.58 | t = -0.259 | 0.796 |
| TCT 非典型鳞状细胞阴性 | 42 (73.68) | 50 (73.53) | χ2=0.000 | 1 |
| TCT ASC-US | 10 (17.54) | 12 (17.65) | ||
| TCT LSIL | 5 (8.77) | 6 (8.82) | ||
| 基线阴道pH值 | 5.18±0.43 | 5.22±0.45 | t = -0.489 | 0.626 |
| 基线 CD4+/CD8+ | 1.17±0.25 | 1.15±0.27 | t=0.441 | 0.66 |
| 基线总中医证候积分（分） | 18.46±4.09 | 18.22±4.36 | t=0.309 | 0.758 |
表1：两组受试者的基线特征。 观察组与对照组基线人口学及临床特征，包括年龄、病程、体重指数、月经状态、HPV感染特征、宫颈细胞学检查结果、阴道pH值、CD4+/CD8+比值及中医证候总积分。
临床疗效与人乳头瘤病毒转归比较
治疗后，观察组的总有效率高于对照组（89.47% 对比 72.06%; χ2 = 5.878, P = 0.015），且在校正了测量的基线协变量后，该关联仍然存在（校正后 RR = 1.23，95% CI 1.08–1.40，P = 0.002）。完全转阴的患者比例分别为66.67%和45.59%；然而，总体四分类HPV结局分布未达到统计学显著性。χ2 = 7.406, P = 0.060）。观察组首次HPV转阴时间更短（P = 0.028），而HPV16/18特异性转阴率在两组间无显著差异（70.00% 对比 48.00%，P = 0.138； 表 2在按基线HPV16/18状态分层的探索性分析中，完全高危型HPV转阴发生在1/20例（5.00%） 对比 0/25 (0.00%) 例人乳头瘤病毒16/18型阳性患者（Fisher’确切 P = 0.444），且在 37/37（100.00%）的案例中 对比 31/43 (72.09%) 人乳头瘤病毒16/18型阴性患者（费希尔’s 精确 P < 观察组与对照组中，HPV16/18阳性感染在基线时多为多重型别感染（分别为17/20例与24/25例）。 补充表 1).
| 观察组 (n=57) | 对照组 (n=68) | 统计学 | P 值 | |
| 总有效率 | 51 (89.47) | 49 (72.06) | χ2=5.878 | 0.015 |
| 完全转化为阴性 | 38 (66.67) | 31 (45.59) | χ2=7.406 | 0.06 |
| 部分转化为阴性 | 13 (22.81) | 18 (26.47) | ||
| 持续阳性 | 5 (8.77) | 15 (22.06) | ||
| 新检出阳性HPV基因型 | 1 (1.75) | 4 (5.88) | ||
| HPV16/18 转阴 | 14/20 (70.00) | 12/25 (48.00) | χ2=2.204 | 0.138 |
| 首次HPV转阴时间（月，有效病例数） | 2.25±0.74 | 2.59±0.76 | t = -2.238 | 0.028 |
表2：治疗后临床疗效与人乳头瘤病毒（HPV）转归。 治疗后临床疗效与人乳头瘤病毒（HPV）转归情况在观察组与对照组中的比较，包括完全转阴、部分转阴、持续阳性、新检出阳性HPV基因型、总有效率、HPV16/18特异性转阴，以及首次HPV转阴时间。对四种HPV转归类别进行的总体比较 χ2 = 7.406, P = 0.060。
阴道微生态理化与酶学指标的比较
治疗前，两组阴道微生态检查结果未见差异（P > 0.05）。治疗后，观察组阴道pH值低于对照组（P < 0.001），且观察组阴道pH值降低幅度更大（P = 0.004）。此外，正常过氧化氢状态的比例以及阴道清洁度I级的比例–观察组中Nugent评分与阴道菌群多样性指数II均高于对照组（P值分别为0.015与0.007），而白细胞酯酶阳性率与胺试验阳性率则较低（P值分别为0.022与0.026）。两组间唾液酸酶阳性率的差异无统计学意义（P = 0.055）。 表 3).
| 观察组 (n=57) | 对照组 (n=68) | 统计 | P 值 | |
| 阴道pH值（治疗前） | 5.18±0.43 | 5.22±0.45 | t = -0.489 | 0.626 |
| 阴道pH值（治疗后） | 4.54±0.31 | 4.78±0.34 | t = -4.150 | <0.001 |
| 阴道pH值降低 | 0.63±0.36 | 0.43±0.41 | t=2.906 | 0.004 |
| 正常过氧化氢（处理前） | 19 (33.33) | 21 (30.88) | χ2=0.086 | 0.77 |
| 常规过氧化氢（处理后） | 43 (75.44) | 37 (54.41) | χ2=5.950 | 0.015 |
| 白细胞酯酶阳性（治疗前） | 41 (71.93) | 50 (73.53) | χ2=0.040 | 0.841 |
| 白细胞酯酶阳性（治疗后） | 17 (29.82) | 34 (50.00) | χ2=5.226 | 0.022 |
| 唾液酸酶阳性（治疗前） | 31 (54.39) | 39 (57.35) | χ2=0.111 | 0.739 |
| 唾液酸酶阳性（处理后） | 12 (21.05) | 25 (36.76) | χ2=3.673 | 0.055 |
| 胺类检测阳性（治疗前） | 29 (50.88) | 35 (51.47) | χ2=0.004 | 0.947 |
| 胺类检测呈阳性（治疗后） | 10 (17.54) | 24 (35.29) | χ2=4.934 | 0.026 |
| 阴道清洁度 I-II 级（治疗前） | 18 (31.58) | 20 (29.41) | χ2=0.069 | 0.793 |
| 阴道清洁度 I-II 级（治疗后） | 45 (78.95) | 38 (55.88) | χ2=7.394 | 0.007 |
表3：治疗前后阴道理化与酶学指标。 观察组与对照组治疗前后阴道pH值、过氧化氢状态、白细胞酯酶阳性率、唾液酸酶阳性率、胺试验阳性率及阴道清洁度分级的比较。
阴道菌群与病原微生物检测的比较
治疗后，观察组中乳杆菌占优势的情况较对照组更为常见（P = 0.008），而真菌检出、细菌性阴道病（BV）相关异常以及混合感染的发生率则较低（P < 0.05）。两组间的滴虫检测结果无差异（P = 0.500； 表 4）。在所有患者中，当乳杆菌占优势时，治疗后过氧化氢状态正常的比例高于乳杆菌不占优势时（62/81 [76.54%] 对比 18/44 [40.91%]; χ2 = 15.714, P < 0.001）。观察组中亦观察到相同趋势（84.09% 对比 46.15%）与对照组（67.57% 对比 38.71%).
| 观察组 (n=57) | 对照组 (n=68) | 统计 | P值 | |
| 治疗前乳杆菌占优势 | 20 (35.09) | 22 (32.35) | χ2=0.104 | 0.747 |
| 乳酸杆菌占优势（治疗后） | 44 (77.19) | 37 (54.41) | χ2=7.055 | 0.008 |
| 真菌检测（处理前） | 7 (12.28) | 9 (13.24) | χ2=0.025 | 0.874 |
| 真菌检测（处理后） | 3 (5.26) | 12 (17.65) | χ2=4.503 | 0.034 |
| 滴虫检测（治疗前） | 2 (3.51) | 3 (4.41) | 费希尔 | 1 |
| 滴虫检测（治疗后） | 0 (0.00) | 2 (2.94) | Fisher | 0.5 |
| 治疗前与细菌性阴道病相关的异常表现 | 30 (52.63) | 36 (52.94) | χ2=0.001 | 0.972 |
| BV相关异常（治疗后） | 9 (15.79) | 23 (33.82) | χ2=5.295 | 0.021 |
| 混合感染（治疗前） | 13 (22.81) | 16 (23.53) | χ2=0.009 | 0.924 |
| 混合感染（治疗后） | 4 (7.02) | 14 (20.59) | χ2=4.633 | 0.031 |
表4：治疗前后阴道菌群与微生物检测结果。 观察组与对照组在治疗前后乳杆菌优势、真菌检出、滴虫检出、细菌性阴道病相关异常及混合感染的比较。
外周T细胞亚群指标比较
治疗前，各组间T细胞亚群指标未见差异（P > 0.05）。治疗后，观察组的CD4+ T细胞百分比高于对照组（P = 0.006），CD8+ T细胞百分比较低（P = 0.024），且CD4+/CD8+比值较高（P < 0.001）。观察组中CD4+ T细胞的增加、CD8+ T细胞的减少以及CD4+/CD8+比值的升高也更为显著（P < 0.001，P = 0.004，以及 P < 分别为 0.001； 图 1).
图 1外周血T细胞亚群治疗前后测量结果。(A) 治疗前后 CD4+ T 细胞百分比及其相应增幅。 (B) 治疗前后 CD8+ T 细胞百分比及其相应下降幅度。 (C) 治疗前后的CD4+/CD8+比值及相应增幅。CD4+与CD8+ T细胞的变化以百分点表示，而CD4+/CD8+比值的变化为无量纲值。#P < 0.05 对比 对应的预处理前数值； &P < 0.05 对比 观察组。 请点击此处查看此图的放大版本。
局部宫颈体征与妇科检查结果的比较
治疗后，观察组宫颈色泽异常及接触性出血的发生率均低于对照组（P值分别为0.015和0.038）。两组在宫颈柱状上皮异位、宫颈肥大或宫颈息肉/新生物样改变方面未观察到差异（P > 0.05; 表 5).
| 观察组（n=57） | 对照组 (n=68) | 统计 | P 值 | |
| 宫颈柱状上皮外翻（治疗前） | 34 (59.65) | 42 (61.76) | χ2=0.058 | 0.809 |
| 宫颈柱状上皮异位（治疗后） | 15 (26.32) | 27 (39.71) | χ2=2.492 | 0.114 |
| 宫颈颜色异常（治疗前） | 46 (80.70) | 55 (80.88) | χ2=0.001 | 0.98 |
| 宫颈颜色异常（治疗后） | 14 (24.56) | 31 (45.59) | χ2=5.950 | 0.015 |
| 宫颈肥大（治疗前） | 22 (38.60) | 25 (36.76) | χ2=0.044 | 0.833 |
| 宫颈肥大（治疗后） | 9 (15.79) | 19 (27.94) | χ2=2.634 | 0.105 |
| 宫颈息肉/肿瘤样改变（治疗前） | 5 (8.77) | 7 (10.29) | χ2=0.083 | 0.774 |
| 宫颈息肉/瘤样病变（治疗后） | 3 (5.26) | 5 (7.35) | Fisher | 0.726 |
| 接触性出血（治疗前） | 26 (45.61) | 32 (47.06) | χ2=0.026 | 0.872 |
| 接触性出血（治疗后） | 6 (10.53) | 17 (25.00) | χ2=4.326 | 0.038 |
表5：治疗前后局部宫颈检查结果。 观察组与对照组治疗前后宫颈柱状上皮异位、宫颈色泽异常、宫颈肥大、宫颈息肉或赘生物样改变及接触性出血情况的比较。
主要结局指标改善幅度的比较
观察组在 Nugent 评分、Donders 评分及中医证候总积分方面的降幅均大于对照组（所有 P 值）。 < 0.001）。观察组中乳杆菌优势的恢复率及微生态正常化率亦较高（81.08% 对比 58.70%，P = 0.029；70.18% 对比 50.00%，P = 0.022； 表 6).
| 观察组（n=57） | 对照组 (n=68) | 统计 | P 值 | |
| Nugent 评分（分值）降低 | 3.21±1.68 | 2.16±1.55 | t=3.628 | <0.001 |
| Donders 评分降低（分） | 3.05±1.44 | 2.03±1.37 | t=4.056 | <0.001 |
| 中医证候总积分（分）的降低 | 11.74±3.91 | 8.38±3.78 | t=4.865 | <0.001 |
| 恢复乳杆菌优势 | 30/37 (81.08) | 27/46 (58.70) | χ2=4.777 | 0.029 |
| 微生态正常化 | 40 (70.18) | 34 (50.00) | χ2=5.226 | 0.022 |
表6：额外变化评分与微生态标准化结果。 观察组与对照组在 Nugent 评分、Donders 评分、中医证候总积分降低，以及乳杆菌优势恢复和微生态正常化方面的比较。
安全性与不良反应
治疗期间，观察组15/57例（26.32%）患者及对照组29/68例（42.65%）患者记录到不良事件；组间差异未达到统计学显著性（P = 0.057）。观察组中阴道分泌物增多、外阴阴道念珠菌病及细菌性阴道病的记录发生率较低（分别为P = 0.040、P = 0.034及P = 0.049），而胃肠道不适在数值上更为常见（12.28% 对比 2.94%；Fisher’具体P值 = 0.078）。这些单独的对比不应被解释为存在整体安全性优势的证据。表 7).
| 不良反应/安全性指标 | 观察组 (n=57) | 对照组 (n=68) | 统计学 | P值 |
| 阴道瘙痒 | 6 (10.53) | 14 (20.59) | χ2=2.336 | 0.126 |
| 阴道灼烧感 | 4 (7.02) | 11 (16.18) | χ2=2.463 | 0.117 |
| 下腹部膨隆 | 5 (8.77) | 12 (17.65) | χ2=2.079 | 0.149 |
| 阴道分泌物增多 | 8 (14.04) | 20 (29.41) | χ2=4.218 | 0.04 |
| 阴道异常出血 | 1 (1.75) | 3 (4.41) | Fisher | 0.625 |
| 外阴阴道念珠菌病 | 3 (5.26) | 12 (17.65) | χ2=4.503 | 0.034 |
| 细菌性阴道病 | 4 (7.02) | 13 (19.12) | χ2=3.864 | 0.049 |
| 胃肠道不适 | 7 (12.28) | 2 (2.94) | 费希尔 | 0.078 |
| 治疗中止 | 1 (1.75) | 4 (5.88) | Fisher | 0.375 |
| 总不良反应 | 15 (26.32) | 29 (42.65) | χ2=3.626 | 0.057 |
表7：治疗期间记录的不良事件。 观察组与对照组记录的不良事件比较，包括阴道瘙痒、阴道灼热感、下腹胀痛、阴道分泌物增多、阴道异常出血、外阴阴道假丝酵母菌病、细菌性阴道病、胃肠道不适、治疗中断及总不良反应。
数据可用性
支持本研究结论的去标识化参与者个体原始数据已提供于 补充文件 1.
补充表1：中医证候评分标准。
中医证候总分八项评分标准。每项评分范围为0分–3 分制，基于症状严重程度，分数越高表示症状越严重。 请点击此处下载此文件。
补充表2：按基线HPV16/18状态分层的探索性HPV结局。
根据基线HPV16/18状态对HPV结局进行探索性比较。HPV16/18阴性患者存在HR-HPV感染，涉及检测中包含的一种或多种其他高危型HPV基因型。在去标识化的分析数据集中未保留个体非16/18型别的具体标签；因此，未重建针对个体非16/18型别的型别特异性清除率估计值。这些分析为探索性分析。 请点击此处下载此文件。
补充文件 1：本方案的去标识化参与者级别原始数据。 请点击此处下载此文件。
讨论
这项回顾性研究发现，与单独使用重组人干扰素α-2b（rhIFN-α-2b）相比，温经除湿汤联合rhIFN-α-2b在人乳头瘤病毒相关指标和常规阴道微生态指标方面具有更优的疗效，同时在外周血T细胞亚群检测指标上也存在差异，而两组间记录的不良事件总体发生率无显著差异。上述结果提示有必要进一步开展前瞻性研究，以评估温经除湿汤作为辅助治疗的作用；同时，应结合本研究非随机化设计及结局指标为回顾性收集的特点来解读研究结果。
从病毒学角度来看，观察组的总有效率更高、首次转阴时间更短，具有优势，但两组在四分类HPV结局分布上的总体差异无统计学意义。经调整的敏感性分析显示总有效率的关联结果相似，但由于本研究为回顾性设计，尚不能确立因果关系。这可能部分归因于重组人干扰素α-2b（rhIFN-α-2b）作为一种局部抗病毒治疗药物已显示出一定的临床价值，且已有研究提示中药联合rhIFN-α-2b治疗宫颈HPV感染或相关病变可能有助于HPV清除及改善免疫相关指标18,19。然而，持续性高危型HPV（HR-HPV）感染的清除不仅依赖于局部抗病毒治疗，还受到宿主免疫状态、宫颈与阴道局部炎症以及微生态稳定性的影响20。即使采用规范的干扰素治疗，仍可能因局部屏障受损、慢性炎症或细胞免疫应答不足而导致转阴缓慢或持续阳性21。加用温经除湿汤（WDT）可能通过健脾化湿、减少异常白带及缓解局部炎症刺激，改善干扰素发挥作用的局部环境。既往研究报道，中药联合干扰素可提高HR-HPV感染治疗的临床疗效，并改善异常阴道分泌物及相关症状22,23，与本研究结果一致。观察组中HPV16/18型特异性转阴比例数值上高于对照组，但差异无统计学显著性。大多数HPV16/18阳性患者在基线时存在多型别感染，因此该亚组中HR-HPV完全转阴依赖于HPV16/18及其他合并感染基因型的同时清除。在探索性的HPV16/18阴性亚组中，观察组的HR-HPV完全转阴更为常见；然而，本研究未针对按基因型分层的比较进行效能设计，未预先设定交互作用分析，且去标识化的分析数据集中无法获得各个非16/18基因型的具体标签。因此，这些亚组结果应谨慎解读，尚不能证明不同HPV基因型间疗效存在差异。
观察组治疗后阴道微生态指标的改善也更为显著。阴道乳杆菌是维持阴道微生态稳态的关键组分，其通过产生乳酸、过氧化氢及抑菌物质，有助于维持酸性环境，从而抑制机会性病原体的过度增殖24。当阴道pH值升高，或乳杆菌数量减少、功能丧失时，局部屏障功能减弱，与细菌性阴道病（BV）相关的菌群失调、真菌感染及混合感染的风险随之增加；这也可能为持续性人乳头瘤病毒（HPV）感染提供条件25。在两组治疗中，乳杆菌优势状态与过氧化氢正常水平之间的关联性表现一致，提示这些常规微生态指标之间存在内在联系。然而，本检测未对乳杆菌的具体菌种或菌株特异性的H₂O₂产生能力进行鉴定，因此尚不能证明具有特定保护作用的乳杆菌群落已恢复。既往关于WDT干预阴道炎及局部阴道症状的研究显示，可改善阴道症状并调节局部微环境26，这与本研究中观察到的乳杆菌优势恢复及微生态改善结果一致。尽管如此，虽然唾液酸酶阳性率呈下降趋势，但组间差异未达到统计学意义，这可能与BV的严重程度、采样时间点以及检测方法的敏感性有关。
外周T细胞亚群的变化应被解读为全身免疫构成的改变，而非抗HPV免疫增强的直接证据。尽管观察组在治疗后表现出更高的CD4+/CD8+比值以及外周CD8+ T细胞百分比更大幅度的下降，但细胞毒性CD8+ T细胞在抗病毒免疫应答中具有重要作用，外周百分比较低本身并不一定具有益处。本研究未检测HPV特异性T细胞功能及宫颈-阴道黏膜免疫状态，因此这些外周免疫变化与局部病毒清除之间的关系尚不明确。由此，病毒学指标与外周免疫指标的平行变化应视为提出假设的线索，而非因果免疫机制的证据。观察组记录到的总体不良事件发生率数值上较低，但差异无统计学意义，不应将其解释为五加生乳片（WDT）具有保护作用。若干局部阴道不良事件发生频率较低，这一趋势与常规微生态学发现方向一致；然而观察组中胃肠道不适的发生率数值上更高。但不良事件的确认依赖于回顾性临床记录，因此不能排除轻度或一过性事件被漏记，以及不同组间记录存在差异的可能性。未来需要开展具有预设不良事件监测方案的前瞻性研究，以明确其安全性特征。
尽管测得的基线特征具有可比性，且敏感性分析已对记录的基线协变量进行了校正，但性交频率、避孕方式、性伴侣HPV状态、复发性阴道炎病史、吸烟、饮酒及其他生活方式因素在回顾性记录中并未完整获取，因此无法进行校正。故仍可能存在残余混杂因素，观察到的组间关联不应被解释为因果治疗效应。此外，在去标识化的分析数据集中未保留个体非16/18基因型标签，从而限制了更详细的型别特异性清除和持续性分析。随访时间相对较短，不足以评估HPV长期持续阴性、复发率或宫颈病变的进展。未来需要开展前瞻性、多中心、大样本且延长随访时间的研究，以进一步验证这些发现。
结论：
在持续 HR-HPV 感染且具有脾虚证候的患者中，与单独使用 rhIFN-α-2b 相比，使用 WDT 联合 rhIFN-α-2b 与更优的 HPV 相关指标、阴道微生态、外周血 T 细胞亚群及症状改善相关。两组间记录的不良事件总发生率无显著差异。由于治疗分组为非随机分配，且存在若干未控制的潜在混杂因素，上述结果应视为关联性发现，尚需前瞻性研究进一步验证。
披露
作者声明无利益冲突。
致谢
本研究由湖州市科学技术局资助（项目编号：2023GY58）。
材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 21种HPV基因芯片诊断试剂盒 | HybriBio Ltd., Chaozhou, Guangdong, China | HBGA-21PKG | 多个临床批次，可在实验室记录中追溯 |
| BD Multitest CD3 FITC/CD8 PE/CD45 PerCP/CD4 APC 试剂 | BD Biosciences | 货号 340499 | 多个临床批次，可在实验室记录中追溯 |
| 快速核酸分子杂交仪 | HybriBio Ltd., Chaozhou, Guangdong, China | HMM-2 | 仪器型号 |
| 女性样本采集试剂盒 | HybriBio Ltd., Chaozhou, Guangdong, China | HBCK-F | 宫颈脱落细胞采集 |
| 流式细胞仪 | Mindray, Shenzhen, China | BriCyte E6 | 仪器型号 |
| HPV DNA扩增分析仪 | 杭州博日科技有限公司，中国杭州 | TC-96/G/H6 | 仪器型号 |
| 重组人干扰素α-2b阴道栓剂 | 长春生物制品研究所有限公司 | 500,000 IU/粒 | 国药准字 S19991019；多个临床批次，可在药房记录中追溯 |
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