本研究利用活性炭和膨润土优化环介导等温扩增（LAMP）检测方法，用于检测海产品中致病性Vibrio菌种。该前处理方法可有效去除反应抑制物，与传统方法相比，显著提高了检测速度和灵敏度，且更具成本效益。
本文内容
摘要
摘要
的 弧菌属 属内包含100多个物种，其中12种被认为对人类具有致病性；在食品中最常分离到的物种是 V. cholerae, 副溶血性弧菌, 创伤弧菌， 和 V. alginolyticus主要问题在于通过传统微生物学方法进行鉴定时成本较高且诊断周期较长。采用环介导等温扩增（LAMP）技术对以下目标进行鉴定 霍乱弧菌，副溶血性弧菌，创伤弧菌 和 V. alginolyticus活性炭与膨润土（ACB）用于去除抑制物，从而提高检测的灵敏度；测试了pH 6、7和9，以及样品与ACB之间的不同接触时间。在虾、鱼和牡蛎样品中，使用活性炭和膨润土去除反应抑制物后，LAMP检测的灵敏度得到提升。所有测试样品的LAMP灵敏度、阴性预测值、阳性预测值和LAMP特异性均等于或高于90%。LAMP方法可作为鉴定的替代方案 霍乱弧菌，副溶血性弧菌, 创伤弧菌， 和 V. alginolyticus 由于比标准方法应用更快、灵敏度更高且成本更低，因此在水产品中广泛应用。
引言
物种的 弧菌属 属在海洋环境中广泛分布，可能与鱼类、软体动物或甲壳类动物相关，其关系可为致病性或共栖性。已有报道指出，其中12个种可对人类具有致病性，可引起 霍乱弧菌, 副溶血性弧菌, V. vulnificus，以及 V. alginolyticus 揭示出在渔业产品中分离到该病原体的频率更高。在美国，卫生当局估计 弧菌 spp. 每年导致超过 80,000 例感染1,2,3,4,5通过常规方法分离弧菌属细菌，包括预增菌、选择性培养基培养，以及生化和血清学试验确认6,7。这些传统方法受限于分离病原体所需时间较长（长达5天）以及分辨率不足，往往无法准确区分同一属内亲缘关系密切的物种 弧菌属 由于表型和生化特征相似而归入同一属6,7,8.
此外，环介导等温扩增（Loop-mediated isothermal amplification, LAMP）已被报道为一种快速、准确且经济的分子检测技术，可用于病原体的鉴定9,10。该方法比传统PCR更具成本效益且速度更快，因其无需使用如热循环仪等复杂设备9。LAMP技术可在单一反应步骤中通过观察反应管中浊度的变化来检测目标基因，该浊度源于焦磷酸镁沉淀；由于焦磷酸镁在LAMP技术所采用的65 °C条件下是稳定的反应产物，浊度的增加与合成的DNA量成正比，从而避免了琼脂糖凝胶电泳和凝胶成像系统的使用11,12,13,14,15。
通过去除可能抑制Bst聚合酶或与DNA靶标结合从而阻碍扩增的反应抑制剂（如蛋白酶、钙离子、糖原和脂质），可提高对这些病原体的检测灵敏度13,16,17,18,19,20。已有报道表明，活性炭与膨润土的复合物（ACB）在消除扩增抑制剂方面具有高效性，因此可提高牡蛎样品中大肠杆菌（Escherichia coli）检测的灵敏度，同时由于ACB的成本低于商用试剂盒，有助于降低检测成本21。
本研究拟通过使用活性炭和膨润土优化LAMP方法，以提高直接从水产品中检测V. cholerae、V. parahaemolyticus、V. vulnificus和V. alginolyticus的灵敏度。该优化方法为食品行业中的常规监测与质量控制提供了实用指导，适用于病原体的快速诊断，避免了耗时的前增菌步骤。在预期性能方面，该方法在鱼类和虾类等基质中表现出优异的灵敏度（高于98%）和特异性（100%）。然而，需注意的一个关键局限性是，在来自源头的高污染样本（如牡蛎）中，ACB系统无法完全去除所有干扰性有机物质，可能导致检测灵敏度略有下降（94%–98%）。
方案
本研究未涉及人类或脊椎动物实验对象，因此无需机构伦理审批。所用试剂和设备列于材料表中。
1. 使用的细菌菌株及DNA提取
Vibrio cholerae no O1 CECT 55、V. parahaemolyticus ATCC 17802、V. vulnificus ATCC 29037 和 V. alginolyticus ATCC 17749 菌株在含有 2% NaCl 的脑心浸出液（BHI）肉汤中，于 37 °C 培养 24 小时。大肠杆菌 Escherichia coli ATCC 25922、阪崎肠杆菌 Cronobacter sakazakii ATCC 12868、单核细胞增生李斯特菌 Listeria monocytogenes ATCC 49594 和鼠伤寒沙门菌 Salmonella Typhimurium ATCC 14028 菌株则在不含氯化钠的 BHI 肉汤中，于 37 °C 培养 24 小时，作为检测中的阴性对照。用于 DNA 提取时，将过夜培养物在 25 °C 条件下以 16,000 × g 离心 6 分钟。小心倾去上清液，避免扰动菌体沉淀，然后用移液器将沉淀充分重悬于 500 μL TAE 缓冲液（Tris-乙酸-EDTA，pH 8）中。将悬液煮沸 6 分钟以裂解细胞，随后立即置于冰上冷却 5 分钟。再进行一次最终离心，以沉淀细胞碎片，获得含有提取 DNA 的澄清上清液，该上清液随后用作 LAMP 扩增的模板22,23。
2. LAMP 程序
LAMP 中使用的引物（表1）被用于验证鉴定特异性 V. cholerae, 副溶血性弧菌, V. vulnificus，以及 V. alginolyticus. 每个的鉴定 弧菌属 使用LAMP对物种进行检测在反应管中进行，制备的终体积为 25 μL 混合物的组成包括： 1.6 μM 每种引物、1.4 mM dNTP混合物、6 mM MgSO₄、800 mM甜菜碱、8 U的 Bst DNA聚合酶，以及 5 μL 模板DNA。将反应混合物轻轻混匀后，置于水浴中孵育 65 °C 60 分钟。孵育结束后，将扩增产物在 1.5% 琼脂糖凝胶上进行分离。随后使用染色剂对扩增产物进行染色。 1 μL 1:100 稀释的荧光 DNA 染料，使用蓝光透射仪观察结果。另一种用于判断病原体检测是否为阳性的技术涉及添加 4 μL 羟基萘酚蓝（HNB， 125 μM将反应管中的溶液用肉眼观察颜色变化。阳性结果表现为蓝色的形成，阴性结果表现为紫色。24. 大肠杆菌 ATCC 25922 阪崎肠杆菌 ATCC 12868 单核细胞增生李斯特菌 ATCC 49594，以及 鼠伤寒沙门氏菌 ATCC 14028 被用作 LAMP 方法的阴性对照。LAMP 扩增产物通过琼脂糖凝胶电泳分离，并使用凝胶成像系统观察。所得图像采用 MS 1D Analysis Software 进行采集和数字化处理。
3. 蚝、虾和鱼类样品的处理以去除 弧菌 样本中自然存在的种
采集了10个牡蛎样品、10个虾样品和10个鱼样品，每个样品的重量约为200 g。为去除样品中天然存在的Vibrio细胞，采用先前已发表的方法21。称取每种样品各50 g，在桨叶式搅拌器中以260 rpm机械均质1分钟，制成均匀的组织悬液，随后于-70 °C保存72小时。之后，将样品置于40 °C水浴中完全解冻，并用300 mL磷酸盐盐水缓冲液（0.85% NaCl，pH 9）洗涤。为确保前述步骤已成功清除样品中的Vibrio，按照美国食品药品监督管理局《细菌学分析手册》第9章所述的预增菌方法进行验证7。将含有样品的盐水溶液替换为450 mL碱性蛋白胨水（APW，pH 9）。随后在APW中精确进行系列稀释，直至10⁻3稀释度，并于37 °C培养24小时。最后，取每支试管中的等分试样划线接种于硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖（TCBS）选择性琼脂培养基，于37 °C培养24小时，以肉眼确认无典型Vibrio菌落生长。所有实验均设三个重复。
4. 膨润土活性炭（ACB）的制备及细胞回收率的评价
为了确定活性炭-膨润土（ACB）在吸收水产品样品中抑制物时效率最高，同时对目标细胞的吸附最小化的条件，参照已发表的方法21，建立了ACB与食品样品之间作用的最佳pH值和接触时间。将活性炭用蒸馏水充分洗涤后，在55 °C下干燥。随后，将32.6 g活性炭与3.04 g膨润土混合，在150 rpm条件下持续搅拌24小时以确保均匀分布，再于55 °C下干燥并灭菌，最终得到细密均一的干燥ACB粉末。为评估Vibrio细胞与活性炭-膨润土（ACB）混合物混合后的细胞回收率，将各菌株分别在含2% NaCl的BHI肉汤中培养至细胞密度达到1.5 × 104 CFU/mL。然后，分别取1 mL各Vibrio菌株接种于100 mL磷酸盐缓冲液（PBS，0.85% NaCl，pH分别调节至4、6和9）中。将细菌悬液与4.6 g预先制备好的ACB混合，在150 rpm条件下分别搅拌15、30和60分钟，以促进充分接触。在每个指定的接触时间结束后，小心取出0.1 mL等分试样，涂布于TCBS琼脂平板上，于37 °C培养24小时后进行菌落计数。
5. 检测限的评估 V. cholerae, 副溶血性弧菌, V. vulnificus，以及 V. alginolyticus 在经活性炭和膨润土处理的牡蛎、虾和鱼样品中
每一个 弧菌 本研究中使用的菌种在BHI肉汤中培养，其细胞密度被精确调整为1.5 x 104，7.5 × 103，3.8 × 103，1.5 × 103，7.5 × 102，3 × 102，1.5 × 102，以及使用分光光度计测得的76 CFU/mL（A600 nm ~0.25）。随后，取每种1 mL 弧菌 培养物用于接种已进行预处理以消除任何可能存在的50克各样本（牡蛎、鱼类、虾类） 弧菌 存在。接种后的样品在桨叶式均质器中以360 rpm均质30秒，并加入450 mL APW（pH 6）稀释。随后将混合液在260 × g 5 分钟 4 °C 以分离大块杂质。将所得上清液倾入含有23 g ACB的烧瓶中，在150 rpm条件下搅拌15分钟以吸附抑制物，随后使用滤纸过滤，得到不含大颗粒的澄清洗脱液。该洗脱液随后在16,000 x g 10 分钟 4 °C，导致试管底部出现可见的细胞沉淀，随后用于提取DNA。每个 弧菌 通过LAMP方法鉴定物种。阴性对照包括接种了菌株的样本 大肠杆菌 coli ATCC 25922 阪崎肠杆菌 ATCC 12868，单核细胞增生李斯特菌 ATCC 49594，以及 沙门氏菌鼠伤寒血清型 ATCC 14028。将反应混合物置于水浴中孵育 65 °C 孵育60分钟。孵育结束后，将扩增产物在1.5%琼脂糖凝胶上电泳分离，并用荧光DNA染料染色。凝胶在蓝光透射仪中观察成像。最后， 4 μL 羟基萘酚蓝（125 μM向每支试管中加入）以进行肉眼检测24.
6. LAMP 方法阳性预测值、阴性预测值、特异性和灵敏度的确定
采用30个样本（虾样本10个、牡蛎样本10个、鱼样本10个）测定LAMP方法的灵敏度、特异性和预测值。每个样本均接种各Vibrio物种的最低可检出浓度。为确定灵敏度和特异性的百分比以及阴性预测值（NPV）和阳性预测值25，使用列联表汇总实验过程中获得的真阳性（TP）、真阴性（TN）、假阳性（FP）和假阴性（FN）结果（表2）。根据这些数据，应用以下公式：
结果
所用细菌菌株及DNA提取
已成功从所有致病菌株和阴性对照菌株中提取DNA，用于后续LAMP检测的模板。
LAMP 程序
本研究中使用的引物针对各分子靶标的扩增特异性设计 弧菌 物种。LAMP 扩增获得的产物 弧菌 菌株的使用表明，每对引物在各自目标基因的扩增中均具有特异性 弧菌属 物种图1).
对牡蛎、虾和鱼样品进行处理以消除样品中天然存在的Vibrio spp.
针对样品中天然存在的Vibrio spp. 的消除处理是有效的，可实现100%减少Vibrio spp.。按照BAM方法操作时，未观察到Vibrio spp. 的生长7。
含膨润土活性炭（ACB）的制备及细胞回收率评价
利用活性炭-膨润土去除反应抑制物，可提高LAMP方法对病原体检测的灵敏度。这归因于活性炭-膨润土能够吸附在扩增过程中可能影响聚合酶活性的抑制性物质，同时对细菌细胞的吸附较少（图2）。在不同pH值和接触时间条件下，Vibrio的回收率结果显示，当pH为6、接触时间为15分钟时，细胞回收率最高（93.4% ± 2.9%）。当pH为4时，未观察到任何Vibrio生长；而在pH为7和9时，回收率分别为33.4% ± 7.6%和67.2% ± 5.8%。本研究建议采用pH 6条件以提高该方法的检测灵敏度。
检测限的评估 V. cholerae, 副溶血性弧菌, V. vulnificus，以及 V. alginolyticus 在经活性炭和膨润土处理的牡蛎、虾和鱼样品中
在牡蛎样品中，检测限为 V. cholerae 为150 CFU/g，对于 V. alginolyticus, 创伤弧菌， 和 副溶血性弧菌 是 3 × 102 CFU/g；在虾和鱼样品中， V. cholerae 最低检测浓度为150 CFU/g，而 V. alginolyticus, 创伤弧菌， 和 副溶血性弧菌 为76 CFU/g。LAMP方法的结果显示，使用羟基萘酚蓝相较于未经ACB处理的样本，在消除反应抑制物方面提高了LAMP检测的灵敏度图3我们观察到，当样本经ACB处理后，LAMP的灵敏度更高。
环介导等温扩增（LAMP）方法的阳性预测值、阴性预测值、特异性和敏感性测定
通过150次试验系统评估了优化后的环介导等温扩增（LAMP）方法在有或无活性炭-膨润土（ACB）预处理条件下的诊断性能，以评价其稳健性（表3）。与未经处理的样品相比，使用ACB系统去除天然食物抑制物后，所有基质中的各项诊断参数（包括敏感性、特异性、阳性预测值（PPV）和阴性预测值（NPV））均显著提升，达到或超过90%。
在使用 ACB 处理的鱼类和虾类样本中，该检测方法表现出最佳的诊断性能，灵敏度、特异性、阳性预测值（PPV）和阴性预测值（NPV）均达到 100%（图 4）。相反，在未经处理的鱼类和虾类样本中，基质来源的抑制物严重影响了检测效果，使检测灵敏度分别下降至 62.5% 和 52.5%。对于高度复杂的牡蛎基质，ACB 处理成功减轻了主要干扰，整体灵敏度达到 95.0%，阴性预测值（NPV）为 71.4%（图 5）。相比之下，未经处理的牡蛎样本由于存在大量如糖原和脂质等会抑制聚合酶的有机化合物，检测灵敏度急剧下降至 32.5%，阴性预测值（NPV）降至 15.6%。
无论基质类型或预处理方式如何，在全部150次试验中，LAMP方法的诊断特异性始终保持在100%，未记录到任何假阳性结果。这种完全的特异性归因于引物组的高度选择性设计，这些引物靶向物种特异性基因（gyrB 用于 V. alginolyticus，ompW 用于 V. cholerae，tlh 用于 V. parahaemolyticus，以及 vvhA 用于 V. vulnificus）。这些统计结果表明，优化后的ACB-LAMP方法是一种高度可靠且稳健的工具，可用于在多种水产品中快速、无需培养地检测致病性 Vibrio 物种。
最后，我们认为，将LAMP方法与去除反应抑制剂的预处理步骤相结合，可提高利用LAMP法检测食品中病原体的灵敏度。因此，该技术应用于检测V. cholerae、V. parahaemolyticus、V. alginolyticus和V. vulnificus，将有助于监控并预防由这些微生物引起的感染。
数据可用性：
本研究所有支持研究结果的原始数据，包括在不同 pH 值和接触时间下的细菌回收菌落计数（CFU/g）数值，以及全部 150 次验证试验的完整诊断性能结果，均已公开存放在 Zenodo 仓储中，网址为 https://doi.org/10.5281/zenodo.21799272。相关数据集包含完整的电子表格文件（补充文件 1）。
图1：LAMP扩增产物在1.5%琼脂糖凝胶上的特异性分析。泳道M，100 bp分子量标记；泳道1，阴性对照（Escherichia coli ATCC 25922）；泳道2，阴性对照（Listeria monocytogenes ATCC 49594）；泳道3，V. alginolyticus ATCC 17749；泳道4，V. cholerae 非O1型 CECT 557；泳道5，V. parahaemolyticus ATCC 7802；泳道6，V. vulnificus ATCC 29037。请点击此处查看该图的放大版本。
图2：在不同pH条件和与活性炭-膨润土（ACB）混合物接触时间下，Vibrio菌株的回收率百分比。 将Vibrio菌株以1.5 × 104 CFU/mL的浓度接种于pH值调节为4.0、6.0、7.0和9.0的PBS中，分别与4.6 g ACB处理15分钟、30分钟和60分钟后，测定细胞回收率（%）。pH 6.0、接触时间为15分钟的数据点显示出最佳的细胞回收效果（93.4% ± 2.9%），表明短暂的接触时间足以高效回收目标细胞，同时保持较高的抑制物去除效率。请点击此处查看该图的放大版本。
图3：人工污染海产品样本中LAMP扩增产物的检测限。扩增结果分别为（A）牡蛎、（B）虾和（C）鱼样本，这些样本经ACB预处理后接种了系列稀释的Vibrio菌种。各管内容如下：（1）阴性对照；（2）V. alginolyticus；（3）V. parahaemolyticus；（4）V. vulnificus；（5）V. cholerae非O1型；以及（6）V. mimicus（作为目标对照）。上图：通过肉眼观察加入4 μL羟基萘酚蓝（HNB，125 μM）后的显色反应，阳性反应呈蓝色，阴性反应保持紫色。下图：在蓝光透射仪下使用Midori Green Advanced（MGA）染料进行荧光检测。请点击此处查看该图的放大版本。
图4：采用和未采用抑制剂去除步骤时LAMP方法的诊断性能参数比较。在鱼类、虾类和牡蛎样本中，于最低可检测限水平接种后（每种物种/基质组合进行10次试验，共150次试验），总体灵敏度、特异性、阳性预测值（PPV）和阴性预测值（NPV）的比较结果。柱状图比较了经优化的活性炭-膨润土（ACB）混合物预处理的样本与未经处理的对照组（无抑制剂去除）之间的差异。所有基质中霍乱弧菌（V. cholerae）的接种水平设定为150 CFU/g；副溶血性弧菌（V. parahaemolyticus）、溶藻弧菌（V. alginolyticus）和创伤弧菌（V. vulnificus）在牡蛎中的接种水平为300 CFU/g，在鱼类和虾类中为76 CFU/g。使用ACB进行预处理后，所有基质中的各项诊断参数均恢复至≥90%。请点击此处查看该图的放大版本。
图5：优化后的ACB-LAMP方法在不同海鲜基质中对靶标特异性的灵敏度和特异性。 个体诊断性能 V. alginolyticus, 霍乱弧菌，副溶血性弧菌，以及 V. vulnificus 在经ACB预处理的鱼类、虾类和牡蛎样品中（每种目标/食物组合n = 10次检测），由于采用针对物种特异性设计的引物，所有目标的特异性均达到100% gyrB, ompW, tlh，以及 vvhA 基因。在鱼类和虾类基质中，检测灵敏度达到100%，而在牡蛎中灵敏度略有下降至90%，这归因于有机基质背景复杂度较高，干扰了反应。 请点击此处以查看此图的放大版本。
表1：环介导等温扩增（LAMP）检测中使用的引物。 针对V. alginolyticus（gyrB）、V. parahaemolyticus（tlh）、V. vulnificus（vvhA）和V. cholerae（ompW）特异性设计的内引物（FIP、BIP）、外引物（F3、B3）以及环引物（LF、LB）的说明。请点击此处下载该表格。
表2：用于评估LAMP方法诊断性能参数的列联表。 采用标准的2×2矩阵设置，对加标和未加标的海产品样本中的真阳性（TP）、真阴性（TN）、假阳性（FP）和假阴性（FN）进行分类和汇总，以计算灵敏度、特异性、阳性预测值（PPV）和阴性预测值（NPV）。请点击此处下载该表格。
补充文件 1：支持本研究结果的原始数据集。请点击此处下载该文件。
讨论
本研究建立了优化条件，以提高环介导等温扩增（LAMP）检测受污染海产品中霍乱弧菌（V. cholerae）、副溶血性弧菌（V. parahaemolyticus）、溶藻弧菌（V. alginolyticus）和创伤弧菌（V. vulnificus）的灵敏度。通过省去传统的预增菌步骤，显著缩短了诊断时间，为直接从水产品中快速高效地鉴定病原体提供了有效方法。
本研究中一项关键的方法学改进是优化了抑制剂去除步骤。以往的方法在扩增前使用 pH 为 4 的条件21，但这导致弧菌菌株的回收率为零，主要原因是Vibrio（弧菌）物种对酸性环境高度敏感26。为解决这一问题，系统性地调整了实验条件，以同时提高细胞回收率并消除样品中天然存在的反应抑制物。结果表明，将活性炭与膨润土（ACB）在 pH 6 的缓冲液中悬浮，并与样品振荡混合 15 分钟，是最佳条件。该改进通过使环境接近细菌膜的等电点21,27,28，最大化细菌与 ACB 之间的静电排斥作用，从而最小化目标细胞的损失。因此，该方法学改进使检测灵敏度比未经 ACB 处理的样品高出 2–50 倍。
与这些方法学改进不同，若出现常见问题，成功实施本方案可能需要明确的故障排除措施。实施过程中常遇到的一个问题是有机物去除不完全，这可能会干扰聚合酶并降低LAMP的灵敏度，尤其是在高度污染的基质中。如果扩增失败或灵敏度下降，应首先检查ACB-样品混合物的pH值；若pH偏离6，可能导致细胞死亡（过酸时）或抑制剂吸附不足。此外，即使经过适当的ACB处理仍出现假阴性结果时，研究人员必须确保接触时间不超过15分钟，因为长时间暴露可能导致基质意外保留目标细胞。对于肉眼检测，若颜色变化不明确，可通过确保完全去除基质中的钙离子来排查问题，否则钙离子可能干扰LAMP检测中焦磷酸镁的沉淀反应。
本研究首次报道了 弧菌 利用LAMP方法结合ACB预处理技术对鱼类样本中的spp.进行检测。本研究通过建立一种快速、可靠且成本较低的水产品鉴定方法，推动了相关科学领域的发展13,19,23,29虽然常规PCR可作为检验该假设的替代方法，但本研究获得的高度特异性和预测值表明，ACB-LAMP检测是一种更优的选择。该技术的一项关键方法学优势在于无需依赖复杂的昂贵设备，如PCR仪、电泳槽和凝胶成像系统。9,30此外，结果的目视检测 通过 羟基萘酚蓝显著简化了数据解读。
尽管该研究已达到较高的灵敏度和特异性，但在基质本底污染较高的样品（如牡蛎样品）中仍存在明显局限性。在这些情况下，ACB系统无法完全去除所有干扰性有机物质，导致检测灵敏度相较于鱼类或虾类样品略有下降。最后，该方法的潜在应用凸显了其在食品行业中用于常规、高通量监测以预防食品安全问题的价值 弧菌-相关感染。未来的研究方向应优先考虑DNA提取和ACB抑制剂去除步骤的自动化。实现这些关键方法学特征的自动化是一项至关重要的优势，将显著减少人工操作时间，最大限度降低人为误差，并标准化故障排查中的变量，从而促进该技术在工业质量控制实验室中的大规模应用。
披露
作者声明无竞争利益。
材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 活性炭 | Sigma-Aldrich | C2764 | |
| 膨润土 | Sigma-Aldrich | 682659 | |
| 甜菜碱 | Sigma-Aldrich | B0300 | |
| Bio-Image systems 转基因成像仪 | Bio-Image systems | MBE-CP-01 | |
| Bst DNA 聚合酶 | New England Biolabs | M0374 | |
| 离心机（型号 J2-HS） | Beckman Coulter | https://www.americaninstrument.com/products/beckman-j2-hs-high-speed-1273g-centri | |
| 阪崎克罗诺杆菌 | ATCC | 12868 | |
| dNTP 混合物 | Thermo Fisher Scientific | R0241 | |
| 大肠杆菌 | ATCC | 25922 | |
| 羟基萘酚蓝 | Sigma-Aldrich | 219916 | |
| 单核细胞增生李斯特菌 | ATCC | 49594 | |
| Midori Green Advanced | Nippon Genetics | MG01 | |
| MS 1D 分析软件 | Major Science | MBE-IMG-SW | |
| 鼠伤寒沙门氏菌 | ATCC | 14028 | |
| 分光光度计（型号 6300） | Jenway | 630531 | |
| 均质器循环仪（型号 400） | Seward | 0400/000/AJ | |
| 溶藻弧菌 | ATCC | 17749 | |
| 非 O1 群霍乱弧菌 | CECT | 55 | |
| 副溶血性弧菌 | ATCC | 17802 | |
| 创伤弧菌 | ATCC | 29037 | |
| Whatman 滤纸 | Whatman | 1001-055 |
参考文献
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