这项随机对照试验提供了一种可重复的标准化针灸联合加减小续命汤作为急性缺血性卒中辅助治疗的方案。该干预措施与第28天神经功能的轻度改善及部分生物标志物的变化相关；个体层面的分析结果不支持中介效应或因果中介效应的结论。
研究文章
标准化针灸联合加味小续命汤治疗急性缺血性卒中：一项随机对照试验
* These authors contributed equally
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摘要
摘要
急性缺血性卒中常伴随全身性炎症反应和肠道微生物紊乱。本单中心、评估者盲法的随机对照试验旨在验证在标准治疗基础上加用标准化针灸联合改良小续命汤，是否可改善早期神经功能恢复，并与预设的肠道及炎症生物标志物相关。研究纳入发病72小时内经影像学确诊、美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS）评分为4–15分的成年患者，按1:1比例随机分配至标准治疗组或联合干预组，每组64例，干预持续28天。主要终点为校正基线NIHSS评分、年龄、性别、再灌注治疗及发病至随机化时间后的第28天NIHSS评分，缺失数据采用30次多重插补法处理。次要及探索性终点包括巴氏指数（Barthel Index）、第90天改良Rankin量表（mRS）评分、不良事件、炎症标志物、脂多糖（LPS）、粪便微生物多样性、特定菌属及短链脂肪酸水平。多重插补分析显示，干预组第28天NIHSS评分更低（校正后差异：−1.30分；95%置信区间：−2.36至−0.24；P = 0.017）。干预组第28天巴氏指数较高，但第90天NIHSS评分、巴氏指数及mRS 0–2分的比例差异无统计学意义。第28天时，干预组香农多样性指数和粪便丁酸盐水平较高，白细胞介素-6（interleukin-6）和LPS水平较低。丁酸盐、白细胞介素-6、LPS及香农多样性在个体水平上的变化与NIHSS评分变化无显著关联，因此未进行中介分析。未发现与干预相关的严重不良事件。该联合干预与轻微的早期神经功能改善及部分生物标志物差异相关，但生物学发现属探索性质，尚不能确立脑-肠轴的因果通路。
引言
卒中仍是全球范围内导致死亡和长期残疾的主要原因，其中缺血性卒中占大多数病例。标准治疗强调快速诊断、必要时进行再灌注治疗、抗血小板治疗、危险因素管理、并发症预防以及康复训练1,2。即使采取了这些措施，患者仍常遗留神经功能缺损，这促使人们进一步评估可重复的辅助干预措施。
缺血后炎症、内皮细胞和血脑屏障应激、外周免疫系统激活以及代谢紊乱均会加剧继发性损伤并影响恢复过程3。脑卒中还可能改变肠道运动功能、通透性、微生物组成以及肠道来源的免疫信号传导，从而形成通常被称为脑-肠轴的双向关联4。
临床研究发现，急性缺血性脑卒中与肠道菌群失调、短链脂肪酸（SCFA）谱的改变以及更差的临床预后相关5。丁酸之所以受到关注，是因为它有助于维持肠上皮屏障的完整性，并调节免疫信号传导6。这些观察结果支持在评估神经功能结局的同时，测量微生物多样性、微生物代谢产物、内毒素暴露及炎症介质；但需认识到，平行发生的变化并不能证明因果中介关系。
针灸已被评估作为中风治疗的辅助疗法，但已发表的试验在治疗时机、穴位选择、治疗频率和结局评估方面存在差异7,8。因此，一个可重复的研究方案需要明确的针刺、刺激、留针、安全性和依从性操作流程。小续命汤是一种用于治疗中风相关病症的经典中药方剂。系统性与药理学研究表明其可能具有疗效，但临床证据仍受限于样本量小、研究异质性及偏倚风险9,10。在两组联合干预设计中，无法将小续命汤的疗效与针灸分开评估。
本试验通过临床结局和预设的探索性肠道及炎症生物标志物评估了一种标准化的联合干预措施11。研究假设是在标准治疗基础上加用标准化针灸联合加减小续命汤，可改善早期神经功能恢复，并对预设的脑-肠轴相关生物标志物产生有利影响。
方案
本研究的伦理批准由中国达州市中西医结合医院医学伦理委员会于2025年6月10日签发（批准文号：2025–29；有效期至2027年6月9日）。每位受试者或其法定授权代表在随机分组前均签署了书面知情同意书。知情同意内容涵盖针灸治疗、中药治疗、血液与粪便样本采集、微生物组数据保护，以及可在不丧失标准治疗权益的前提下退出生物学样本采集。本研究遵循《赫尔辛基宣言》的伦理准则。本方案中使用的研究工具列于材料表中。该试验未进行前瞻性注册，因在受试者招募开始前尚未完成注册程序。
1. 研究设计与随机分组
受试者于2025年3月1日至12月31日招募，每位受试者随访90天。本研究采用单中心、评估者设盲、平行分组设计，干预期为28天的主动治疗。符合条件的受试者按1:1比例随机分配至标准治疗组或标准治疗联合针灸及加减小续命汤组。随机化采用计算机生成的4或6例区组，并根据基线NIHSS评分（4–8）进行分层 对比9–15)。采用按序编号、不透明且密封的信封进行分配隐藏。
最终的28天干预于2026年1月28日完成，最终随访于2026年3月31日完成，数据库于2026年4月15日锁定，预先设定的分析于2026年4月30日前完成。本研究遵循CONSORT原则12；受试者流程见图1，评估时间表见表1。
2. 受试者筛选与入组
发病后72小时内或末次正常时间点72小时内，通过计算机断层扫描或磁共振成像确诊为急性缺血性卒中的患者被纳入筛选。符合条件的受试者为年龄在40至80岁之间的成年人，基线美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS）评分在4–15分之间，经急诊评估后生命体征稳定，能够在24小时内开始指定干预措施，并愿意提供血液和粪便样本。NIHSS评估由经过培训的评估人员完成13。
排除标准包括：脑出血；无梗死的短暂性脑缺血发作；昏迷；计划进行减压手术；经口摄入不安全；需要全身使用抗生素的活动性感染；近4周内使用过抗生素、益生菌补充剂或益前生物补充剂；炎症性肠病；慢性腹泻；近6个月内接受过胃肠道手术；恶性肿瘤；严重肝肾功能障碍；未控制的高血压；不稳定冠心病；不适合的心律失常；血小板计数 < 80 × 109/L；针灸禁忌证；对中药方剂过敏；妊娠或哺乳期；近3个月内参与过其他干预性临床试验；或无法完成随访。普通植物性食物、腌制蔬菜和腐乳未被列为禁用产品，因为日常中式饮食难以完全标准化。
3. 标准护理及与微生物组相关的暴露
两组均接受指南指导的治疗，包括必要时的静脉溶栓和/或机械取栓；抗血小板、降脂、血压和血糖管理；补液与营养支持；吞咽困难筛查；肺炎和深静脉血栓预防；康复治疗；以及二级预防14. 研究参与并未导致再灌注治疗的延迟或替代。
从随机分组至第28天，禁止使用非研究相关的针灸、艾灸、中风相关中药处方、益生菌/益生元/合生元补充剂以及靶向肠道菌群的制剂。研究人员已告知参与者及照护人员，这些限制适用于补充剂和市售益生菌产品，而非日常食物。
记录了再灌注治疗及方案偏离情况。记录饮食、吞咽困难严重程度、肠内营养、随机分组后抗生素使用、质子泵抑制剂使用、便秘及住院时间，作为潜在的与微生物组相关的混杂因素。这些变量未被纳入微生物组统计模型作为协变量，因此被视为残余混杂因素。
4. 分配隐藏
随机化序列由一名独立的统计学家生成。由一名不参与受试者招募、治疗、结局评估、实验室工作或统计分析的协调员准备了按顺序编号、不透明且密封的信封。只有在获得知情同意、确认符合入组条件并完成基线评估后，才会打开下一个信封。随机化序列保存在一个设有密码保护的文件中，在主要分析完成之前，结局评估人员、实验室人员和分析人员均无法访问该文件。
5. 结局、实验室及分析盲法
NIHSS、Barthel 指数和改良 Rankin 量表（mRS）评估由独立于治疗实施的评估人员进行。研究人员指导参与者及照护者不得向结局评估人员透露治疗分组情况。生物样本采用编码标识进行标记，实验室工作人员和统计分析人员在预设分析完成前均对分组编码保持盲态。任何意外破盲事件均被记录在案。
6. 标准化手动针灸
在随机分组后24小时内，由主治神经科医生确认血流动力学稳定且出血风险可接受后，开始针灸治疗。治疗计划为每周5天，每天1次，每次30分钟，持续4周，共计划进行20次治疗。
受试者取安全体位，针刺前对皮肤进行消毒。根据表215中规定的左右侧别和进针深度，对百会（GV20）、水沟（GV26）、双侧风池（GB20）、曲池（LI11）、合谷（LI4）、足三里（ST36）、阳陵泉（GB34）和三阴交（SP6）进行针刺。
使用无菌的一次性不锈钢针灸针，规格为 0.25 mm × 40 mm。根据穴位及个体体型差异，进针深度为 10–25 mm。采用手动提插、捻转手法，直至产生得气感或局部针刺反应。留针时间为 30 分钟，每隔 10 分钟手动重复刺激一次。未使用电针疗法。
针灸由具有至少5年临床经验的持证针灸师实施。若患者出现发热、血压不稳定、神经功能恶化、活动性出血、严重躁动或疲劳，或患者拒绝接受治疗时，应推迟治疗。需记录推迟治疗的原因及相关不良事件。
7. 加味小续命汤
每日剂量包含麻黄6 g、桂枝9 g、白芍12 g、防风9 g、生姜6 g、甘草6 g、当归10 g、川芎10 g、黄芪20 g、茯苓15 g以及赤芍12 g。处方中所用生药的真伪经医院药房鉴定确认后，按常规调配与煎煮流程进行。该方剂详见表39˒16。
仅允许进行预定义的调整。便秘者可加用 Cannabis Fructus 10 g，便溏者可将茯苓加至 20 g，明显自汗者可将黄芪加至 30 g。每次调整、漏服剂量、呕吐事件及治疗中断均需记录。
每日一剂，在医院药房煎煮后浓缩至400 mL，分两次给药，每次200 mL，分别于早餐和晚餐后服用，连续给药28天。若存在吞咽不安全、持续性呕吐、过敏、丙氨酸/天冬氨酸氨基转移酶异常等情况，则暂停给药。 >3× 正常上限，估算的肾小球滤过率 <45 mL/min/1.73 m²2，未受控制的血压、具有临床意义的快速性心律失常、新发胸痛或研究者判定的风险。
8. 对照组限制条件
分配至对照组的受试者仅接受标准治疗。禁止在第28天前使用非方案规定的针灸、艾灸、与中风相关的中药治疗、益生菌/益生元/合生元补充剂以及靶向肠道菌群的产品。任何使用上述干预措施的情况均需记录为方案偏离。
9. 依从性与安全性监测
针灸依从性计算为完成的治疗次数除以计划的20次治疗。草药依从性通过回收的药品包装和服药日记进行评估。符合方案依从性定义为完成至少16次针灸治疗，并服用了至少80%的 prescribed decoction 剂量。住院患者每日接受观察，门诊患者在计划的随访时点进行监测。记录的不良事件包括局部出血、血肿、疼痛、头晕、晕厥、感染、胃肠道症状、皮疹、肝肾异常、心悸、血压波动和过敏反应。严重不良事件及其相关性由两名临床医生独立分类，分为无关、可能相关、很可能相关或肯定相关。
10. 临床结局评估
在基线以及第14天、第28天和第90天评估NIHSS。主要终点为校正基线NIHSS后的第28天NIHSS。Barthel指数在基线以及第28天和第90天进行评估，mRS在第90天进行评估。通过第90天记录复发性卒中、全因死亡和不良事件17。第90天的良好结局定义为mRS 0–2。临床和生物学结局、评估时间点、定义及分析分类汇总于表4中。
11. 血液采集与生物标志物检测
在干预前基线期以及第14天和第28天收集静脉血，优先选择在隔夜禁食后于06:30至08:30之间进行。若未禁食采血，则予以记录。
样本在2小时内进行处理。在4 °C条件下，以850 × g离心10分钟。血清和血浆分装至无菌冻存管中，并在−80 °C保存。同一受试者的样本尽可能保持在同一检测批次中。
使用指定的检测方法对高敏C反应蛋白、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α、脂多糖（LPS）和连蛋白进行定量。IL-6、肿瘤坏死因子-α、LPS和连蛋白均进行双份测定，当双份测定的变异系数超过15%时，重新进行测量。
制造商提供的目录规格（而非本研究特异性验证结果）如下：超敏C反应蛋白（hs-CRP）检测灵敏度为5.36 pg/mL，检测范围为18.75–1,200 pg/mL，血清批内/批间变异系数（CV）分别为1.4%和4.0%；白细胞介素-6（IL-6）检测灵敏度为0.7 pg/mL，检测范围为3.12–300 pg/mL，血清/血浆批内变异系数为1.6%–4.2%，批间变异系数为3.3%–6.4%；肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-alpha）检测灵敏度为6.23 pg/mL，检测范围为15.6–1,000 pg/mL，批内变异系数为2.2%–3.0%，批间变异系数为7.3%–8.4%；zonulin的检测下限为0.183 ng/mL，定量下限为0.183 ng/mL，线性范围为3.03–40.25 ng/mL，重复性变异系数为3.5%–6.0%，重现性变异系数为7.7%–8.3%。zonulin的检测下限和定量下限为应用样本稀释因子前由制造商报告的数值。
LPS 浓度以 EU/mL 表示，血浆三甲胺 N-氧化物浓度以 µmol/L 表示。这两项检测指标均被视为探索性生物标志物结果。
12. 粪便采集与16S rRNA测序
在基线和第28天，使用无菌管收集粪便样本，并记录排便和冷冻时间。当受试者在计划的采集窗口内无法排便时，将在临床可行的情况下尽快收集下一次自发排便的样本。所有随机入组的受试者最终均提供了适合进行微生物组和短链脂肪酸分析的粪便样本；延迟采集程序并未导致计划中的基于粪便的分析缺失样本。记录采集延迟情况和便秘状态，且未仅为研究采样而给予泻药。
新鲜粪便样本在2小时内运送。若无法立即运输，则在−80 °C保存前于4 °C保存不超过6小时。避免反复冻融。使用指定的粪便DNA提取试剂盒提取DNA。采用引物338F和806R扩增V3–V4区，并进行双端300 bp测序。在QIIME 2版本2024.10.1（RRID: SCR_021258）中对序列进行解复用并切除引物。使用DADA2进行质量过滤、去噪、双端序列拼接、嵌合体去除以及扩增子序列变体推断。分类学注释基于SILVA数据库第138.1版（RRID: SCR_006423）。
α多样性采用Shannon指数和Chao1指数进行计算。β多样性采用Bray–Curtis距离和主坐标分析，同时使用置换多元方差分析（PERMANOVA）评估β多样性的差异18。
13. 粪便短链脂肪酸定量
约100 mg解冻粪便样品与1.0 mL 0.5%磷酸溶液混合，涡旋振荡60 s，随后在14,000 × g 10 分钟 4 °C上清液用含有4-甲基戊酸作为内标的乙酸乙酯进行萃取。
采用30 m × 0.25 mm × 0.25 µm的DB-FFAP色谱柱，通过气相色谱-质谱选择性检测联用技术分析1 µL样品。载气为氦气，流速为1.0 mL/min，分流比为10:1，电子轰击电离能量为70 eV。
乙酸、丙酸、丁酸、异丁酸、戊酸和异戊酸被定量，总短链脂肪酸定义为这些物质的总和。分析人员对治疗分组保持盲态，短链脂肪酸分析被视为探索性分析。
14. 探索性生物标志物反应
探索性复合应答定义为在第28天时，以下四项变化中至少出现两项：Shannon指数升高 > 0.20，粪便丁酸盐增加 > 20%，血浆LPS降低 > 15%，且IL-6降低 > 20%。这些实用阈值旨在超过微小的分析波动，尚未经过临床验证，仅用于探索性描述。未设定香农阈值 < 1.5 被使用。
15. 样本量计算
样本量计算假设第28天 NIHSS 变化值的组间差异为1.2分，标准差为2.3，双侧α水平为0.05，检验效能为80%。据此计算，每组需要58名受试者。考虑到10%的主要终点数据可能不完整，将每组目标入组人数定为64名，共计128名随机化受试者19。
16. 数据管理与质量控制
采用标准化的病例报告表记录临床数据，并进行双人独立数据录入。在数据库锁定前实施了数据范围和一致性核查，所有差异均通过核对原始记录予以解决。结局评估人员在入组前接受了统一培训。使用编码标识符追踪样本采集、处理时间、储存温度、冻融循环次数、检测批次以及测序批次。
17. 统计学分析
所有128名随机化参与者均被纳入主要的意向性治疗分析。符合方案人群定义为完成第28天评估、接受了至少80%指定干预暴露且无重大方案违背的参与者。所有接受治疗的参与者均被纳入安全性分析。微生物组和短链脂肪酸分析采用在基线和第28天收集的可评估粪便样本进行。由于所有随机化参与者均提供了可分析的粪便样本，因此未排除任何参与者，粪便相关分析也无需对缺失样本进行填补。
在随机缺失假设下，使用包含治疗方案、基线及第14天 NIHSS 评分、基线 Barthel 指数、年龄、性别、再灌注治疗和发病至随机化时间的链式方程贝叶斯岭模型，对缺失的第28天 NIHSS 值进行了30次多重插补。采用 Rubin 法则合并估计结果，并以完整病例分析作为敏感性分析。
通过检查直方图和 Q–Q 图，并应用 Shapiro–Wilk 检验来评估模型残差的正态性。主要完整病例 ANCOVA 的残差符合正态分布（P = 0.308）。对于明显右偏的生物标志物，在需要时于线性建模前进行变换。在进行逻辑回归时，二分类结局变量的分布无需满足正态性；同时评估了连续预测变量的线性关系及有影响力的观测值。
采用协方差分析（ANCOVA）对第28天的美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS）评分进行分析，模型中纳入了治疗分组、基线 NIHSS 评分、年龄、性别、再灌注治疗以及发病至随机化的时间20。对于第28天的连续性探索性结局指标，采用基于基线调整的线性模型进行分析。分类变量比较采用卡方检验或 Fisher 精确检验，Bray–Curtis 距离采用包含9,999次置换的 PERMANOVA 进行分析。微生物组多样性及群落结构分析未对饮食、吞咽困难严重程度、肠内营养、随机化后抗生素使用、质子泵抑制剂使用、便秘或住院时间等因素进行调整；这些因素被视为潜在的残余混杂因素。
在所展示的三个属上应用了Benjamini–Hochberg错误发现率校正，同时报告了名义P值和q值。在个体水平的探索性关联分析中采用Spearman rho法，并进行5,000次自助重采样，Pearson相关系数未用于推论性解释。仅当暴露–中介变量和中介变量–结局关联均具有统计学支持时，才计划进行中介分析。主要及预先设定的临床结局采用双侧P < 0.05作为检验水准。
图1：受试者流程与评估时间表。（A）采用CONSORT流程图形式展示筛选（n = 176）、排除（n = 48）、随机分组（每组64例）、静脉溶栓治疗（对照组16例，干预组18例）、机械取栓（4例；5例）、第28天NIHSS数据可获得性（59例；58例）、实际完成第90天随访（57例；56例）以及分析人群情况。（B）干预措施与评估时间安排。NIHSS，美国国立卫生研究院卒中量表；ITT，意向性治疗分析；mRS，改良Rankin量表。请点击此处查看该图的放大版本。
| 研究流程 | 筛选 | 基线 | 第1–28天 | 第14天 | 第28天 | 第90天 |
| 日历窗口 | 2025年3月1日–12月31日 | 与随机分组同日 | 2025年3月–2026年1月 | ±2天 | ±3天 | ±7天 |
| 入组资格评估 | ✓ | |||||
| 签署书面知情同意书 | ✓ | |||||
| CT/MRI 确认缺血性卒中 | ✓ | |||||
| 收集人口统计学和临床数据 | ✓ | |||||
| 随机分组 | ✓ | |||||
| 标准急性缺血性卒中治疗 | ✓ | ✓ | ✓ | ✓ | ✓ | |
| 标准化手法针灸 | ✓ | |||||
| 改良小续命汤 | ✓ | |||||
| NIHSS 评估 | ✓ | ✓ | ✓ | ✓ | ||
| Barthel 指数评估 | ✓ | ✓ | ✓ | |||
| 改良 Rankin 量表评估 | ✓ | |||||
| 外周血样本采集 | ✓ | ✓ | ✓ | |||
| 粪便样本采集 | ✓ | ✓ | ||||
| 不良事件监测 | ✓ | ✓ | ✓ | ✓ | ✓ | |
| 完成最终临床随访 | 2026年3月31日前 | |||||
| 数据清理与统计分析 | 2026年4月1日–4月30日 |
表1：研究时间表、干预暴露、样本采集和结局评估。 CT，计算机断层扫描；MRI，磁共振成像；NIHSS，美国国立卫生研究院卒中量表。
| 穴位 | 定位类别 | 左右侧 | 针刺深度 | 刺激方法 | 留针时间 | 治疗频率 | 安全注意事项 |
| Baihui (GV20) | 头皮点 | 单侧 | 10–15 mm | 斜刺，轻度手法刺激 | 30 min | 每周5次，持续4周 | 生命体征不稳定的患者应避免过度刺激 |
| Shuigou (GV26) | 面部点 | 单侧 | 5–10 mm | 斜刺，轻度手法刺激 | 30 min | 每周5次，持续4周 | 局部皮肤损伤、感染或不配合的患者应避免针刺 |
| Fengchi (GB20) | 头颈部穴位 | 双侧 | 15–25 mm | 斜刺；避免向内深刺 | 30 min | 每周5次，持续4周 | 避免向脊髓腔或椎动脉区域深刺 |
| Quchi (LI11) | 上肢穴位 | 双侧 | 15–25 mm | 手法提插捻转 | 30 min | 每周5次，持续4周 | 瘀伤、水肿或感染的皮肤区域应避免针刺 |
| Hegu (LI4) | 上肢穴位 | 双侧 | 10–20 mm | 手法提插捻转 | 30 min | 每周5次，持续4周 | 体质虚弱或疼痛耐受性差的患者应避免过度操作 |
| Zusanli (ST36) | 下肢穴位 | 双侧 | 20–25 mm | 手法提插捻转 | 30 min | 每周5次，持续4周 | 水肿、感染或局部创伤区域应避免针刺 |
| Yanglingquan (GB34) | 下肢穴位 | 双侧 | 20–25 mm | 手法提插捻转 | 30 min | 每周5次，持续4周 | 严重肢体疼痛、创伤或躁动的患者应避免针刺 |
| Sanyinjiao (SP6) | 下肢穴位 | 双侧 | 15–25 mm | 手法提插捻转 | 30 min | 每周5次，持续4周 | 孕妇及局部皮肤病变患者应避免针刺 |
表2：标准化针灸处方及操作规程。 操作说明：使用无菌一次性不锈钢针，规格为0.25 mm × 40 mm。进行手法刺激，直至患者报告得气感或观察到局部针刺反应。留针30分钟，在留针期间每10分钟重复手法刺激一次。
| 成分 | 拉丁药典名称 | 每日剂量 | 在处方中的功能作用 | 质量控制与安全注意事项 |
| Ephedra | Ephedrae Herba | 6 g | 祛风通络成分 | 治疗期间监测血压、心悸、胸闷及失眠情况 |
| Cinnamon twig | Cinnamomi Ramulus | 9 g | 温经助阳成分 | 对于多汗或热证患者应慎用 |
| White peony root | Paeoniae Radix Alba | 12 g | 调和营卫、缓急止痛成分 | 需提供药房鉴定及批次记录文件 |
| Saposhnikovia root | Saposhnikoviae Radix | 9 g | 祛风解表成分 | 需提供药房鉴定及批次记录文件 |
| Fresh ginger | Zingiberis Rhizoma Recens | 6 g | 调和胃肠成分 | 如出现持续性呕吐，应暂停给药 |
| Licorice root | Glycyrrhizae Radix et Rhizoma | 6 g | 调和诸药成分 | 对高风险患者需监测电解质紊乱和水肿情况 |
| Angelica root | Angelicae Sinensis Radix | 10 g | 补血活血成分 | 需记录是否同时使用抗血小板或抗凝药物 |
| Chuanxiong rhizome | Chuanxiong Rhizoma | 10 g | 活血行气成分 | 需监测并记录与出血相关的不良事件 |
| Astragalus root | Astragali Radix | 20 g | 补气成分 | 如为明显自汗，可根据方案定义的修改记录将剂量增加至30 g |
| Poria | Poria | 15 g | 健脾利湿成分 | 如出现稀便，可根据方案定义的修改记录将剂量增加至20 g |
| Red peony root | Paeoniae Radix Rubra | 12 g | 活血化瘀、清热凉血成分 | 需提供药房鉴定及批次记录文件 |
| Hemp seed | Cannabis Fructus | 10 g, if needed | 仅用于便秘调节 | 仅在出现便秘时添加，并作为方案定义的修改进行记录 |
表3：加减小续命汤的组成及给药方案。 给药方案：每日一剂，由医院药房煎煮并浓缩至400 mL，分两次给药，每次200 mL，分别于早餐和晚餐后口服，连续给药28天。若患者存在吞咽不安全、持续呕吐、疑似过敏反应、丙氨酸氨基转移酶或天冬氨酸氨基转移酶超过正常值上限3倍以上、估算的肾小球滤过率低于45 mL/min/1.73 m2、经标准治疗后血压仍控制不佳、有临床意义的心动过速性心律失常、新发胸痛，或研究者判断存在的其他安全性问题，则暂停给药。
| 结局类别 | 变量 | 评估时间点 | 定义或测量方法 | 分析分类 |
| 神经功能缺损 | NIHSS 评分 | 基线、第14天、第28天、第90天 | 由盲法神经科医生评估的美国国立卫生研究院卒中量表（National Institutes of Health Stroke Scale） | 主要临床结局在第28天；次要结局在第14天/第90天 |
| 日常生活功能 | Barthel 指数 | 基线、第28天、第90天 | 由经过培训的盲法评估人员评定的日常生活活动能力评分 | 次要临床结局 |
| 整体残疾程度 | 改良 Rankin 量表 | 第90天 | 功能残疾评分 0–6 | 次要临床结局；观察分布情况，并单独标注意向性治疗（ITT）二分类结果 |
| 良好功能结局 | mRS 0–2 | 第90天 | mRS 评分为 0、1 或 2 的受试者 | 次要临床结局 |
| 卒中复发 | 复发性缺血性卒中 | 至第90天为止 | 神经科医生诊断，必要时辅以影像学检查 | 与安全性相关的结局 |
| 死亡率 | 全因死亡 | 至第90天为止 | 任何原因导致的死亡 | 安全性结局 |
| 全身性炎症 | hs-CRP、IL-6、TNF-α | 基线、第14天、第28天 | 血清/血浆浓度 | 探索性生物标志物结局 |
| 内毒素/屏障标志物 | LPS、zonulin | 基线、第14天、第28天 | 基于血液的浓度 | 探索性生物标志物结局 |
| 微生物代谢产物 | TMAO | 基线、第28天 | 血浆浓度 | 探索性生物标志物结局 |
| 肠道菌群多样性 | Shannon、Chao1、Bray–Curtis | 基线、第28天 | 基于16S rRNA测得的多样性 | 探索性生物标志物结局 |
| 微生物组成 | 选定属 | 第28天 | 属水平的相对丰度 | 探索性分析；对三个指定属分别进行名义 P 值和 BH-FDR q 值校正 |
| 短链脂肪酸 | 乙酸、丙酸、丁酸、总短链脂肪酸 | 第28天 | 通过气相色谱-质谱法（GC-MS）测定粪便中的浓度 | 探索性生物标志物结局 |
| 探索性应答 | 复合应答 | 第28天 | 满足至少两项：Shannon >0.20；丁酸 >20%；LPS 下降 >15%；IL-6 下降 >20% | 探索性分析；阈值尚未经过临床验证 |
| 干预安全性 | 不良事件和严重不良事件 | 第1–90天 | 由研究者记录的事件及其归因 | 安全性结局 |
表4：临床与生物学结局指标、评估时间窗、定义及分析分类。 本表总结了预先设定的临床与生物学结局指标、评估时间点、操作性定义以及分析分类。FDR，错误发现率；hs-CRP，高敏C反应蛋白；IL-6，白细胞介素-6；LPS，脂多糖；mRS，改良Rankin量表；NIHSS，美国国立卫生研究院卒中量表；SCFA，短链脂肪酸；TMAO，氧化三甲胺。
结果
受试者流程与分析人群
在筛选的176例患者中，随机化前排除了48例，共128例患者被随机分组（每组64例；图1）。所有随机分组的受试者均纳入意向性治疗分析和安全性分析人群。其中，59例对照组和58例干预组受试者完成了第28天的美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS）评估；第90天随访分别由57例和56例受试者完成。符合方案集人群包括58例和57例受试者（图2）。
基线特征
组间的基线特征相似（表5）。平均年龄为65.1岁 ± 8.7 与 64.7 ± 9.1 年，基线 NIHSS 为 8.6 ± 2.6 与 8.4 ± 2.9，基线 Barthel 指数为 43.5 ± 13.2 与 44.8 ± 12.7. 对照组中有16/64（25.0%）的参与者接受了静脉溶栓治疗，干预组中有18/64（28.1%）的参与者接受了该治疗；机械取栓在对照组和干预组中分别实施于4/64（6.3%）和5/64（7.8%）的参与者。
干预依从性
在干预组中，中位针灸治疗次数为18次（四分位数范围为17–20次）；57名受试者完成了≥16次治疗，58名受试者服用了≥80%的汤剂。在两名对照组受试者和一名干预组受试者中出现了非方案规定的益生菌/益生元使用情况；这些受试者被纳入意向性治疗分析，但被排除在符合方案分析之外（补充表1）。
临床结局
对照组（第28天，n = 59）的观察NIHSS评分从8.6 ± 2.6降至5.5 ± 3.1，干预组（n = 58）从8.4 ± 2.9降至4.1 ± 2.9（图3A）。观察到的平均变化分别为−3.34 ± 4.14分和−3.97 ± 4.03分（图3B）。在预先设定的30次填补ANCOVA分析中，校正后的第28天NIHSS评分在干预组低1.30分（95%置信区间[CI]，−2.36至−0.24；P = 0.017）。
发病第14天NIHSS评分为5.49 ± 2.45 与 4.61 ± 2.23（校正基线后 P = 0.041），观察到第90天 NIHSS 评分为 3.68 ± 2.68（n = 57） 与 2.88 ± 2.36（n = 56；P = 0.091； 图3A).
第28天的巴氏指数为61.39 ± 18.80 对比 68.82 ± 19.36（经基线调整后P = 0.040）；观察到的第90天数值分别为75.56 ± 19.22 对比 81.49 ± 17.67（P = 0.098；图3C）。在纳入第90天mRS观察病例分析的受试者中，对照组有32/57例（56.1%）达到良好结局，干预组有38/56例（67.9%；P = 0.200）。完整的mRS类别分布情况见于图3D和补充表1。采用多重插补法对二分类mRS结局进行的意向性治疗（ITT）估计结果（36/64 对比 44/64；P = 0.144）将另行报告。
与脑-肠轴相关的生物标志物
所有随机分组的受试者（每组64人）在预定分析时间点均提供了粪便样本并成功完成分析。第28天的Shannon多样性指数为3.08 ± 0.52 与 3.31 ± 0.57（基线校正后P = 0.019； 图4A），粪便丁酸为10.21 ± 4.27 与 12.91 ± 5.08 µmol/g (P = 0.002； 图4B).
IL-6 在第14天为18.23 ± 9.44 对比 15.62 ± 8.06 pg/mL（名义P = 0.095），在第28天为14.61 ± 8.18 对比 11.84 ± 6.83 pg/mL（校正基线后P = 0.041；图4C）。LPS 在第14天为0.85 ± 0.32 对比 0.78 ± 0.30 EU/mL（P = 0.204），在第28天为0.78 ± 0.31 对比 0.66 ± 0.28 EU/mL（校正基线后P = 0.023；图4D）。
第28天， Faecalibacterium 和 罗氏菌属 干预组中更为丰富（名义 P 值分别为 0.006 和 0.009；q 值均为 0.013），而 双歧杆菌 未达到名义显著性水平（P = q = 0.056； 图4E对所显示的三个属应用了Benjamini–Hochberg校正。
在64名对照组参与者中，有21名（32.8%）达到了探索性复合应答标准，而在64名干预组参与者中，有34名（53.1%）达到该标准（P = 0.020）。各组分结果见图4F和补充表2；所采用的阈值为探索性设定，尚未经过临床验证。
个体水平的探索性关联
采用Spearman秩相关系数并结合5,000次自助重采样法评估个体水平的探索性关联。粪便丁酸、IL-6、LPS和Shannon多样性变化与相应的神经学或生物标志物变化之间无显著关联（图5）。
粪便丁酸盐变化与 NIHSS 评分变化无显著相关性（Spearman rho = −0.05；95% 自助法置信区间 [CI]，−0.23 至 0.13；P = 0.601；n = 117）。IL-6 变化与 NIHSS 评分变化无相关性（rho = −0.01；95% 自助法 CI，−0.18 至 0.15；P = 0.887；n = 117），LPS 变化与 IL-6 变化亦无相关性（rho = −0.14；95% 自助法 CI，−0.29 至 0.03；P = 0.125；n = 128）。
Shannon 多样性变化与 NIHSS 变化无显著关联（rho = −0.15；95% CI，−0.34 至 0.06；P = 0.119；n = 117）。由于预先设定的个体层面暴露–中介因子和中介因子–结局关联未得到支持，因此未进行中介分析，也未推断出间接效应或因果性脑–肠通路。
安全性结果
在64名对照组参与者中有8人，64名干预组参与者中有11人发生了不良事件（12.5%） 与 17.2%；P = 0.456）。针刺部位瘀斑发生于0 与 5名受试者（P = 0.023）中出现症状，未经治疗即自行缓解；3名出现轻度胃肠道不适 与 6名参与者（P = 0.300； 表6).
在3名对照组和2名干预组参与者中发生了严重不良事件（P = 0.648）。每组各发生1例死亡；无任何严重不良事件被判定为肯定与针灸或改良小续命汤相关。
综上所述，联合干预措施与第28天NIHSS评分及部分第28天生物标志物的轻度改善相关。第90天的临床差异无统计学意义，且个体水平的数据不支持通过所测生物标志物产生中介效应。
图 2：临床与生物样本采集流程。 采集血液和粪便样本，用于微生物组、短链脂肪酸（SCFA）、炎症以及肠道屏障相关指标的检测。该流程用于探索性关联分析，不主张存在因果性的脑-肠机制。请点击此处查看此图的放大版本。
图3：临床结局。（A）NIHSS 变化轨迹；数据点表示均值 ± 标准差（SD），各时间点的样本量（n）已标出。（B）从基线至第28天观察到的 NIHSS 变化，以均值 ± 标准差表示（对照组 n = 59；干预组 n = 58）；注释中报告了基于基线 NIHSS、年龄、性别、再灌注状态及发病至随机化时间进行调整的30次多重插补 ANCOVA 结果。（C）Barthel 指数，以均值 ± 标准差表示，并标出样本量（n）。（D）观察病例第90天 mRS 分类情况（对照组 n = 57；干预组 n = 56）；百分比计算基于实际观察到的分母。P 值为双侧检验结果。未使用显著性符号。CI，置信区间；MI，多重插补；SD，标准差。请点击此处查看该图的放大版本。
图4：探索性生物标志物。 柱状图与散点表示均值 ± 标准差（SD）。所有随机分组的受试者均提供了可用于相应分析的可评估样本，因此每组可用于各检测面板的样本量 n = 64。所有受试者均成功采集并处理了粪便样本，包括在预设采集时间窗内延迟采集者。（A） Shannon 指数与（B）粪便丁酸盐：第28天基线校正线性模型。（C） IL-6 与（D） LPS 动态变化：第14天 Welch 检验与第28天基线校正模型。（E） 第28天选定菌属：针对图中显示的三个菌属进行 Benjamini–Hochberg 校正的 Welch 检验；同时显示名义 P 值与 q 值。（F） 应答组分：Pearson 卡方检验。所有 P 值均为双侧检验；未使用显著性符号标注。IL-6：白细胞介素-6；LPS：脂多糖；SCFA：短链脂肪酸；SD：标准差。请点击此处查看该图的高清版本。
图5：个体水平的探索性关联。（A） 丁酸盐变化与 NIHSS 变化的关系（n = 117） (B) IL-6 变化 与 NIHSS 变化（n = 117）。 （C） LPS 变化与 IL-6 变化的关系（n = 128）。线条仅用于可视化，不代表基于回归的推断。统计推断基于 Spearman's rho，并进行 5,000 次自助重采样。 (D) Spearman 估计值，采用 5,000 次重采样 Bootstrap 法计算 95% 置信区间，包括 Shannon 指数变化与 NIHSS 评分变化之间的相关性（n = 117）。无任何关联达到 P < 0.05 的显著性水平。 < 0.05；因此未进行中介分析。未使用显著性符号。 请点击此处以查看此图的放大版本。
| 变量 | 对照组 (n = 64) | 干预组 (n = 64) | P 值 |
| 年龄，年 | 65.1 ± 8.7 | 64.6 ± 9.0 | 0.775 |
| 男性，n (%) | 40 (62.5) | 39 (60.9) | 0.855 |
| 发病至随机化时间，h | 41.7 ± 14.9 | 40.9 ± 15.7 | 0.773 |
| 基线 NIHSS 评分 | 8.6 ± 2.6 | 8.4 ± 2.9 | 0.665 |
| 基线 Barthel 指数 | 43.5 ± 13.2 | 44.8 ± 12.7 | 0.573 |
| 高血压，n (%) | 42 (65.6) | 41 (64.1) | 0.855 |
| 糖尿病，n (%) | 18 (28.1) | 17 (26.6) | 0.839 |
| 静脉溶栓，n (%) | 16 (25.0) | 18 (28.1) | 0.690 |
| 机械取栓，n (%) | 4 (6.3) | 5 (7.8) | 0.732 |
| hs-CRP，mg/L | 7.21 ± 4.18 | 7.04 ± 4.03 | 0.813 |
| IL-6，pg/mL | 24.03 ± 10.14 | 23.62 ± 9.96 | 0.817 |
| TNF-alpha，pg/mL | 30.5 ± 11.2 | 30.0 ± 11.0 | 0.799 |
| Shannon 指数 | 2.84 ± 0.55 | 2.86 ± 0.56 | 0.833 |
| 粪便丁酸盐，µmol/g | 8.41 ± 3.99 | 8.53 ± 4.04 | 0.859 |
| LPS，EU/mL | 0.94 ± 0.34 | 0.93 ± 0.35 | 0.870 |
| Zonulin，ng/mL | 54.50 ± 15.60 | 54.11 ± 15.08 | 0.885 |
表5：基线人口统计学、临床和生物标志物特征。 本表总结了对照组和干预组的基线人口统计学、临床、治疗相关及生物标志物特征。数值以均值±标准差或n（%）表示。静脉溶栓和机械取栓分别列为标准治疗的不同类别。
| 安全性结局 | 对照组 (n=64) | 干预组 (n=64) | P 值 |
| 任何不良事件，n (%) | 8 (12.5) | 11 (17.2) | 0.456 |
| 针刺部位瘀斑，n (%) | 0 | 5 (7.8) | 0.023 |
| 轻度胃肠道不适，n (%) | 3 (4.7) | 6 (9.4) | 0.3 |
| 一过性头晕，n (%) | 2 (3.1) | 3 (4.7) | 0.648 |
| 轻度皮疹，n (%) | 1 (1.6) | 2 (3.1) | 0.56 |
| 肝功能异常，n (%) | 1 (1.6) | 2 (3.1) | 0.56 |
| 肾功能异常，n (%) | 1 (1.6) | 1 (1.6) | 1 |
| 血压波动，n (%) | 2 (3.1) | 3 (4.7) | 0.648 |
| 心悸，n (%) | 0 | 1 (1.6) | 0.315 |
| 严重不良事件，n (%) | 3 (4.7) | 2 (3.1) | 0.648 |
| 与干预相关的严重不良事件，n (%) | 0 | 0 | -- |
| 全因死亡，n (%) | 1 (1.6) | 1 (1.6) | 1 |
表6：不良事件和严重不良事件。 本表总结了对照组和干预组中的不良事件、严重不良事件、与干预相关的严重不良事件以及全因死亡情况。数值以n（%）表示。
数据可用性：
支持本报告中临床、生物标志物、微生物组、依从性和安全性分析的去标识化参与者层面数据，已在 Zenodo 公开提供（https://zenodo.org/records/22725409）。
补充表 1：随访、依从性及临床结局。 观察到的分析人群与经填补的分析人群分别标注。主要估计值采用 30 次多重填补法，并通过协方差分析（ANCOVA）对基线 NIHSS 评分、年龄、性别、再灌注情况以及发病至随机化时间进行校正。CI，置信区间；IQR，四分位距；mRS，改良 Rankin 量表；NIHSS，美国国立卫生研究院卒中量表。请点击此处下载该文件。
补充表 2：探索性生物标志物结果。 数值以均值 ± 标准差或 n（%）表示。区分名义 P 值与经 FDR 校正的 q 值。复合应答要求四项预先指定的变化中至少满足两项，且尚未经过临床验证。相关性分析为探索性分析；由于参与者水平的先决关联不显著，未进行中介分析。请点击此处下载该文件。
补充文件 1：对应于图和表的原始数据。请点击此处下载该文件。
讨论
联合干预方案在早期神经功能缺损方面表现出轻度改善，通过多重插补ANCOVA估计，第28天NIHSS评分差异为−1.30分。第28天Barthel指数及部分第28天生物标志物也存在差异，而第90天的结局未达到统计学显著性。这些结果支持将联合干预作为再灌注、抗血栓治疗、康复治疗或其他标准治疗的辅助手段进行评估，而非替代方案。
本试验观察到的临床效应与日益增多的观点一致，即针灸可能在中风后恢复中发挥超出症状调节的作用。既往研究表明，针灸可能改善急性缺血性中风患者的神经功能并降低炎症活性，但不同研究中疗效的强度和持久性仍存在差异21。本研究通过将针灸作为与标准化中药方剂联合干预的一部分，并将临床效应与预设的脑-肠轴相关生物标志物相联系，进一步拓展了这一证据链。效应量较小而非显著，这一点在解释结果时尤为重要。在轻度至中度中风患者中，伴随功能和生物学信号的1分NIHSS校正差异可能具有临床意义，但不应将其解读为该干预措施单独决定康复进程的证据。最影响可重复性的关键步骤包括一致的入组时间、隐藏分组、安全针刺、标准化汤剂暴露、盲法结局评估以及快速、温度受控的样本处理。常见的操作问题包括错过针灸治疗、吞咽不安全、排便延迟以及运输过程中的解冻。针对这些问题，本研究通过记录推迟情况、在不安全时暂停口服治疗、在不使用仅用于研究的泻药情况下收集下一次自发粪便、记录便秘和采集延迟情况，以及追踪处理和冻融历史予以解决。
第28天的Shannon多样性、丁酸盐、IL-6和LPS差异为探索性组间关联分析。在个体层面探索丁酸盐–NIHSS、IL-6–NIHSS、LPS–IL-6以及Shannon–NIHSS之间的关联分析未能支持中介分析所需的先决关系；因此未进行中介分析，数据不足以确立脑–肠通路的因果关系。其他替代方法，包括宏基因组测序、使用同位素标记标准品的靶向代谢组学、连续膳食记录及重复生物标志物采样，相较于16S rRNA测序和两次粪便采样时间点，可更直接地表征功能与时间顺序。22,23,24.
本研究的解释受到单中心样本、参与者未设盲、入组前缺乏前瞻性试验注册以及干预设计为联合治疗（无单独针灸或单独汤剂组）的限制。因此，该设计无法将效应归因于某一单一组分或协同作用。常规饮食、吞咽困难严重程度、肠内营养、随机分组后的抗生素使用、质子泵抑制剂使用、便秘、康复强度及住院时间等因素可能对微生物组结果产生混杂影响。这些因素未纳入校正后的微生物组模型中，因此仍可能作为残余混杂因素存在。所选属水平的FDR校正仅限于图中展示的三个属，且探索性反应阈值未经过外部验证。生物标志物分析为探索性分析；部分IL-6和TNF-α浓度低于试剂厂商标称的检测范围，应谨慎解读。
未来的研究应采用前瞻性注册、多中心招募、析因设计、经过来源验证的共干预数据、标准化的饮食/暴露信息采集，以及可由独立研究者重复的微生物组学和代谢组学分析流程。在检验中介效应、治疗组分效应或基于微生物组的治疗选择之前，需要更大的样本量和更频繁的采样。安全性监测未发现明确与干预相关的严重不良事件，但样本量过小，无法排除罕见危害。在将针灸和草药治疗整合到急性中风治疗中时，应特别关注出血风险、吞咽安全性、胃肠道耐受性、肝/肾功能、血压及心律失常等问题。
总之，在标准治疗基础上加用标准化针灸联合加减小续命汤与第28天神经功能的轻度改善及部分生物标志物的变化相关。生物学结果具有提出假设的意义，但并未证实存在因果性的脑-肠作用机制。
披露
作者声明无竞争利益。
作者 贡献：
黄志强参与了研究概念化、方法学、调查、数据整理以及初稿撰写；王博参与了形式化分析、软件开发、可视化以及稿件审阅与修改；陈震参与了调查、资源提供和验证；王爱萍参与了调查、数据整理和项目管理；王龙海参与了研究概念化、监督、项目管理以及稿件审阅与修改。所有作者均已批准最终稿件。
致谢
作者衷心感谢四川省达州市中西医结合医院的临床及实验室工作人员在受试者招募、临床护理和数据收集过程中提供的支持。作者同时感谢参与本项随机对照试验的患者及其家属。本研究未从任何公共、商业或非营利性资助机构获得特定资助。
材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 4-甲基戊酸 | Sigma-Aldrich, USA | 142342 | GC-MS 内标物 |
| 16S rRNA 基因引物（V3–V4 区域） | Sangon Biotech, 中国 | 定制合成 | 341F/806R 引物对 |
| 针灸针 | Hwato（苏州医疗器械厂），中国 | 0.25 × 40 mm | 无菌一次性不锈钢针 |
| Barthel 指数评估 | 不适用 | 不适用 | 日常生活活动能力评估 |
| 冻存管 | Corning, USA | 430659 | 粪便样本储存 |
| 乙酸乙酯（色谱纯） | Merck, 德国 | 109623 | 有机萃取溶剂 |
| 滤芯吸头 | Axygen, USA | 多种规格 | 无 RNase/DNase |
| 气相色谱仪 | Agilent Technologies, USA | 7890B GC | GC 分离系统 |
| 人 IL-6 ELISA 试剂盒 | R&D Systems, USA | D6050 | 血清 IL-6 定量检测 |
| 人脂多糖（LPS）ELISA 试剂盒 | Cusabio, 中国 | CSB-E13066h | 血清 LPS 定量检测 |
| 人 TMAO 检测试剂盒 | Sigma-Aldrich, USA | MAK264 | 比色/荧光法 TMAO 定量 |
| 质谱选择性检测器 | Agilent Technologies, USA | 5977B MSD | 四极杆质谱仪 |
| MassHunter 工作站软件 | Agilent Technologies, USA | G1701EA | GC-MS 数据采集与分析 |
| 微量移液器 | Eppendorf, 德国 | Research plus 系列 | 实验室液体操作 |
| MiSeq 试剂盒 v3（600 个循环） | Illumina, USA | MS-102-3003 | 双端 2 × 300 bp 测序 |
| MiSeq 系统 | Illumina, USA | SY-410-1003 | 双端测序平台；2 × 300 bp 测序化学体系 |
| 改良 Rankin 量表（mRS）评估 | 不适用 | 不适用 | 第 90 天功能结局评估 |
| 加味小续命汤（中药方剂） | 达州市中西医结合医院药剂科 | 不适用 | 按医疗机构药学标准配制；由医院药师鉴定并调配 |
| 美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS）评估表 | 美国国家神经疾病与卒中研究所 | 不适用 | 标准化临床评估工具 |
| NumPy | NumPy 开发团队 | RRID: SCR_008633 | 版本 1.26.x |
| pandas | pandas 开发团队 | RRID: SCR_018239 | 版本 2.1.x |
| 磷酸 | Sigma-Aldrich, USA | 79619 | 分析纯试剂 |
| Python | Python 软件基金会 | RRID: SCR_008394 | 版本 3.11.x |
| QIAamp PowerFecal Pro DNA 试剂盒 | Qiagen, 德国 | 51804 | 粪便微生物组 DNA 提取 |
| QIIME 2 | QIIME 2 开发团队 | RRID: SCR_008249 | 版本 2024.5 |
| Qubit dsDNA HS 检测试剂盒 | Thermo Fisher Scientific, USA | Q32851 | 基于荧光的 DNA 定量 |
| scikit-learn | scikit-learn 开发者 | RRID: SCR_002577 | 版本 1.4.x |
| SciPy | SciPy 开发者 | RRID: SCR_008058 | 版本 1.11.x |
| SILVA rRNA 数据库 | SILVA 项目 | RRID: SCR_006423 | 版本 138.1 |
| 超低温冰箱 | Thermo Fisher Scientific | TSX60086A | −80 °C 储存 |
参考文献
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