分枝杆菌的电穿孔

摘要

分枝杆菌的致病机制仍不甚清楚。大多数分枝杆菌生长缓慢，细胞壁难以穿透，且操作病原体存在安全风险，这些因素使得分枝杆菌难以研究，也是我们对这类生物认知有限的主要原因。在本视频中，我们将演示电穿孔技术，该技术通过短暂的高强度电脉冲处理细胞，使DNA进入细胞内部。这是将DNA导入分枝杆菌细胞中最常用的方法。

摘要

高效转化是分枝杆菌研究中的主要限制因素。分枝杆菌属的转化较为困难，这主要归因于其厚实且富含蜡质的细胞壁，同时由于大多数分子技术是为大肠杆菌（Escherichia coli）和枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）等亲缘关系较远的物种开发的，这一难题进一步加剧。尽管存在这些障碍，目前已鉴定出可用于分枝杆菌的质粒，并已有多种分枝杆菌的DNA转化方法的报道。将DNA导入分枝杆菌最成功的方法是电穿孔法。多种因素影响转化的成功率，包括菌种/菌株、待转化DNA的性质、所用的选择标记、培养基以及电穿孔脉冲的条件。本文详细描述了适用于生长缓慢和生长快速分枝杆菌的优化转化方法，并报道了不同分枝杆菌物种及不同选择标记下的转化效率。