该实验方法的完整文字方案可在<a href="http://mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb1110/current/abstract?hd=author,Powers]">《细胞生物学实验指南》</a>中获取。

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从非洲爪蟾雌性个体中获取卵子

Obtaining Eggs from Xenopus laevis Females

非洲爪蟾（Xenopus laevis）的完整卵、裂解卵及分馏卵适用于多种实验。本方案介绍如何诱导排卵、收集卵并去除卵膜，以及如何筛选卵以剔除任何受损的卵。

完整、裂解和/或分离的非洲爪蟾（Xenopus laevis）卵在多种实验中具有广泛应用。本实验方案展示了如何诱导排卵、收集并去除卵的胶状层，以及如何筛选卵以剔除任何受损的卵。

非洲爪蟾（Xenopus laevis）的完整卵、裂解卵及卵组分可用于多种实验。本方案介绍如何诱导产卵，……

非洲爪蟾卵提取物可作为细胞质和细胞器材料的来源，用于体外重建核组装和核蛋白输入等细胞事件。当然，在使用卵提取物之前，首先需要从雌性青蛙体内获取卵。大家好，我叫Marie Cross，是位于佐治亚州亚特兰大市埃默里大学细胞生物学系Maureen Power博士实验室的一名研究生。今天我们将向您展示如何从成熟的非洲爪蟾雌性个体中获取D期蛙卵。该实验流程包括以下步骤：使用孕马血清促性腺激素对蛙进行促排卵处理，再用人绒毛膜促性腺激素诱导产卵，最后筛选出不合格的卵或卵母细胞。现在让我们开始吧。为了获得卵子，首先使用孕马血清促性腺激素对性成熟的雌性青蛙进行促排处理。开始促排程序时，准备一个含有百毫摩尔氯化钠的容器用于饲养青蛙。注射后，每升溶液中应饲养约一只青蛙。通过将青蛙饲养在18摄氏度的环境中，可维持最佳的产卵量。使用连接在1毫升注射器上的27号针头，向青蛙背侧淋巴囊皮下注射0.5毫升、每毫升含200单位的孕马血清促性腺激素。将优质的青蛙放回含有100毫摩尔氯化钠的水箱中。经过两到三天后，通过向青蛙背淋巴囊皮下注射0.5毫升每毫升100单位的人绒毛膜促性腺激素，再次诱导其产卵。注射后，将每只青蛙放入含有五升100毫摩尔氯化钠溶液的容器中。最好将每只青蛙单独放置，因为不同青蛙所产卵的质量存在差异。在人绒毛膜促性腺激素注射后约16至22小时，将青蛙移至清洁的水箱中，并将卵倒入烧杯中。建议在注射部位观察青蛙一至两天，以检查是否有感染迹象。在此阶段，每个卵子周围都有一层透明的胶状膜，可防止卵子相互接触。为去除卵子的胶状膜，需将卵子用2% L-半胱氨酸（pH 8）溶液冲洗一次，然后继续在每只青蛙对应的100 mL 2% L-半胱氨酸溶液中孵育约五分钟。在室温下，每隔五分钟轻轻摇动卵子。将半胱氨酸溶液从去壳卵中倒出，然后用 0.25 × 改良林格液洗涤三次。为去除碎片，将卵倒入直径 100 毫米的玻璃培养皿中，在解剖显微镜下操作。用巴氏吸管从培养皿中移除坏卵。成熟的爪蟾卵上半部分呈深色色素沉着，下半部分颜色较浅。在成熟卵深色半球的中央，应可见一个白色针尖大小的斑点，表明卵母细胞已成熟。优质的卵应具有均匀分布的色素沉着。任何没有此白色斑点的均为卵母细胞，应予以剔除。凡是呈白色、肿胀或色素分布不均的卵子也应一并剔除。特别劣质的卵子会呈现为一个白色的蓬松球状物，其半球之间的边界完全模糊不清。将筛选后的卵子用卵裂解缓冲液冲洗2到3次，每次加入缓冲液后轻轻倾倒去除，尽量减少卵子的洒出。现在可以裂解卵子并制备提取物了。我们刚刚向您展示了如何从成熟的非洲爪蟾（Xenopus laevis）雌性个体中获取卵子并去除胶状层。请务必查看我们的另外两个视频，它们将向您展示如何制备粗制卵提取物，以及如何利用分步纯化的卵提取物在体外重建细胞核的组装过程。以上就是全部内容。感谢观看，祝您的实验顺利成功。

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Research

科研

JoVE Journal

Biology

生物学

从非洲爪蟾女性获得卵子

Emory University.  非洲爪蟾的鸡蛋完好，裂解，和/或分割为各种各样的实验。该协议显示了如何诱导产卵，收集和dejelly鸡蛋，和排序，以消除任何损坏鸡蛋的蛋。

Summary

非洲爪蟾（Xenopus laevis）的完整卵、裂解卵及分馏卵适用于多种实验。本方案介绍如何诱导排卵、收集卵并去除卵膜，以及如何筛选卵以剔除任何受损的卵。

从非洲爪蟾雌性个体中获取卵子

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