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方法文章

莫里斯水迷宫实验

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DOI:

10.3791/897

2008年9月24日

本文内容

摘要

Morris水迷宫是一种被广泛接受的工具,用于记录海马体在行为任务中的作用。

摘要

莫里斯水迷宫被广泛用于研究空间记忆和学习。实验中,将动物放入盛有水的水池中,水池中的水通过添加脱脂奶粉或无毒水彩颜料使其呈不透明状,动物必须在水中游动以寻找隐藏的逃生平台。由于水体不透明,动物无法直接看到平台,也无法依靠气味找到逃生路径,而必须依赖外部/迷宫外的线索进行定位。随着动物对任务逐渐熟悉,它们能够更快地找到平台。该实验范式由 Richard G. Morris 于 1984 年开发,现已成为行为神经科学领域的“金标准”之一。

方案

建立水迷宫

  1. 水迷宫装置的主要组成部分应是一个圆形水池,直径约6英尺,深度约3英尺。如果使用摄像机记录实验过程,请确保迷宫的所有区域均处于摄像机视野范围内。
  2. 用水龙头的水注满水迷宫,水温应接近26°C。注水过程可能需要数小时,因此应提前完成。需定期检查水温,确保其与26°C的偏差不超过1°C。
  3. 将逃生平台置于水池中央。在训练阶段,平台应露出水面约1英寸。这有助于让大鼠认识到存在一个平台,并且可通过该平台离开水面。之后,当动物完成训练并进入测试阶段时,逃生平台将被置于水面以下,由于水中会加入牛奶或无毒颜料使水变得不透明,平台将不可见。
       
    此时,水迷宫已准备好用于 动物训练。

水迷宫训练前准备

  1. 进行水迷宫训练时,平台应置于水池中央,并高出水面一英寸,以便动物能够察觉其存在。水温应控制在26°C正负一度范围内。
  2. 每只动物需进行连续三次试验。首先,将动物放置在平台上静止20秒。
  3. 水迷宫设有四个起始位置:北、南、东或西。  将动物带至其中一个起始位置。  用手托住动物,使其尾部先入水,轻柔地将其放入水中。切勿将动物头部朝下直接浸入水中,以免造成应激反应。
  4. 允许动物游泳并寻找平台,最长不超过60秒。初期,动物可能沿池壁游动,试图寻找出口。  最终,动物将学会主动搜索平台并攀爬上去。 
  5. 一旦啮齿类动物到达平台,立即停止计时并记录所需时间。  若在60秒内未能找到平台,则将本次试验时间记录为一分钟。若动物未能抵达平台,不得直接将其捞起。应让动物明白必须通过游泳到达平台,因此需用手轻轻引导其游向平台。  让动物在平台上停留15秒;若其掉落或跳下,应轻柔地将其重新引导回平台。此步骤旨在训练动物理解:只有停留在平台上才能从水中被救出。
  6. 以不同起始方向重复上述过程,再进行两次试验。
  7. 待动物完成全部三次试验后,用毛巾将其身体擦干。随后依次对所有动物重复此三轮训练流程。所有动物的起始方向应保持一致,并详细记录每只动物的寻台时间。
  8. 经过训练后,动物已具备进行水迷宫测试的条件,可正式开始实验。

水迷宫测试

  1. 开始进行水迷宫实验时,向水池注水,使平台位于水面以下一英寸处。使用脱脂奶粉或125毫升无毒白色水粉颜料使水呈不透明状态。 
  2. 光照条件和水温应与训练过程中的条件保持一致。每只动物将接受12次试验,即从每个起始方向各进行3次 。每次试验持续60秒。开始前需确定起始方向的顺序,不得连续两次使用相同的起始方向,也不得在不同试验中重复完全相同的顺序。
  3. 实验操作人员应面朝水池壁,将动物放入水中,随后离开水池边缘并坐到指定位置,观察动物完成迷宫任务的过程。可使用动物行为追踪系统(如San Diego Instruments公司的SMART系统)记录动物的运动路径及其他相关变量。逐次录像也是一种成本较低且完全适用的替代方法。
  4. 持续观察动物直至其找到平台,并记录所需时间。若动物在60秒内未能找到平台,则操作人员应如训练阶段一样,引导其到达平台。无论哪种情况,均让动物在平台上停留10秒,然后将其擦干并放回暂养笼中。
  5. 对每只动物依次完成全部12次试验,每次试验中操作人员均应回到相同的指定位置。测试顺序应为:所有动物先进行第1次试验,再进行第2次试验,然后是第3次试验,依此类推。每次试验之间应至少间隔2分钟。定期清理水池,确认平台位置正确,并检查水温是否保持恒定。
  6. 所有动物完成12次试验后,每只动物将进行一次探查试验,即从水池中移除平台。探查试验用于验证动物对平台位置的记忆程度,并观察其在发现平台缺失后所采取的搜索策略。操作人员应从北侧释放动物,记录其在 30秒内穿越水池中心区域的次数。
  7. 所有探查试验完成后,将动物擦干,并排空水池。

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讨论

水迷宫实验由 Morris 开发5。该实验可通过多种方式进行修改,以研究工作记忆、参考记忆以及任务策略6。本文所述的操作流程包含两个关键变量,使其区别于其他版本的水迷宫实验:预训练和单日测试。

预训练——海马体参与空间/关系记忆7-8。水迷宫特别用于检测空间记忆3。然而,该任务还包含许多不涉及空间记忆的其他组成部分:任务带来的应激、对任务规则的理解(即动物必须找到一个隐藏平台并停留在上面才能“逃脱”),以及认识到存在一种逃离任务的方式9。习得性无助实验也涉及水箱,但其规则(无逃脱可能)截然不同10。三次预训练试验旨在“教会”动物这些任务特性。它们学会自己将被放入温水中游泳约一分钟,随后会被移出;学会通过可见平台找到它,并知道停留在平台上即可从迷宫中“逃脱”;同时学会任务具有终点。因此,这种不依赖海马体的学习不会干扰后续水迷宫测试数据的分析。

单...

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披露

作者无任何利益冲突需要披露。

致谢

JLN 获得 MH 68347 项目的支持。

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材料

本文使用的材料清单
姓名公司目录编号评论
SMART 系统San Diego Instruments该系统并非必需 – 市面上存在许多其他行为学系统。

参考文献

  1. de Bruin, J. P., Swinkels, W. A., de Brabander, J. M. Response learning of rats in a Morris water maze: involvement of the medial prefrontal cortex. Behav. Brain Res. 85, 47-55 (1997).
  2. Redish, A. D., Touretzky, D. S. The role of the hippocampus in solving the Morris water maze. Neural. Comput. 1, 73-111 (1998).
  3. D'Hooge, R., De Deyn, P. P. Applications of the Morris water maze in the study of learning and memory. Brain Res. Rev. 36, 60-90 (2001).
  4. Kallai, J., Makany, T., Karadi, K., Jacobs, W. J. Spatial orientation strategies in Morris-type virtual water task for humans. Behav. Brain Res. 159, 187-196 (2005).
  5. Morris, R. Developments of a water-maze procedure for studying spatial learning in the rat. J. Neurosci. Methods. 11, 47-60 (1984).
  6. Brandeis, R., Brandys, Y., Yehuda, S. The use of the Morris Water Maze in the study of learning and memory. Int. J. Neurosci. 48, 26-69 (1989).
  7. Kesner, R. P., Exans, R. B., Hunt, M. A. Further evidence in support of the neurobiological bases of an attribute model of memory: role of the hippocampus. Int. J. Neurosci. 21-22, 21-22 (1987-8).
  8. Jarrard, L. E., Okaichi, H., Steward, O., Goldschmidt, R. B. On the role of hippocampal connections in the performance of place and cue tasks: comparisons with damage to the hippocampus. Behav. Neurosci. 98, 946-954 (1984).
  9. Hodges, H. Maze procedures: the radial-arm and water maze compared. Cogn. Brain Res. 3, 167-181 (1996).
  10. Shumake, J., Gonzalez-Lima, F. Brain systems underlying susceptibility to helplessness and depression. Behav. Cogn. Neurosci. Rev. 2, 198-221 (2003).
  11. Owen, J. A. Physiology of the menstrual cycle. Am. J. Clin. Nutr. 28, 333-338 (1975).
  12. Everett, J. W. Neurobiology of reproduction in the female rat. Monogr. Endocrinol. 32, 1-133 (1989).
  13. Warren, S. G., Humphreys, A. G., Juraska, J. M., Greenough, W. T. LTP varies across the estrous cycle: enhanced synaptic plasticity in proestrus rats. Brain Res. 703, 26-30 (1995).
  14. Warren, S. G., Juraska, J. M. Spatial and nonspatial learning across the rat estrous cycle. Behav. Neurosci. 111, 259-266 (1997).

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空间记忆逃生平台不透明水视频追踪水温训练试验实验试验动物行为行为神经科学