使用可编程拉制仪制备膜片钳电极和尖电极

摘要

本视频展示了如何使用可编程拉制仪制备用于电生理学的膜片钳移液管和尖电极。相同的程序也可用于制备多种玻璃工具，包括注射针。

摘要

玻璃微电极（也称为移液管）几十年来一直是电生理学研究的重要工具。如今，这类移液管通过程序化拉制仪，由玻璃毛细管拉制而成。此类仪器利用金属丝或激光加热毛细管，并借助重力、电机或两者结合的方式将玻璃拉伸。用于膜片钳记录的移液管仅通过加热和重力形成，而用于细胞内记录的尖锐电极则需结合加热、重力和电机共同作用。制备细胞内记录移液管的过程与制备多种用途注射针（包括向非洲爪蟾卵母细胞注射cRNA）的工艺相似。通常，外径 <1.2 mm 的毛细玻璃管用于制备膜片钳记录移液管，而细胞内记录则使用更细的玻璃管（外径 = 1.0 mm）。对于不同用途的移液管，拉制仪的程序设置略有差异。本视频展示了如何使用预设的拉制程序制备上述两种类型的记录移液管。

方案

拉制移液管

使用微电极拉制仪（如 Sutter P-97 Flaming/Brown），拉制约 10–20 根移液管。

1. 选择毛细玻璃管。我们使用硼硅酸盐玻璃毛细管（Sutter BF150-110-10，外径1.5 mm，内径1.1 mm，长度10 cm）。请妥善保存玻璃管，确保其清洁且无灰尘。
2. 设计拉制程序。我们采用五步程序，每一步的加热温度和拉伸速度逐步降低，并在最后一步施加轻微拉力。Sutter的移液管程序手册是开发合适拉制程序的优秀参考资源。
3. 在显微镜下检查移液管尖端，以确定开口直径和平滑度。丢弃表面粗糙、不均匀或形状不规则的尖端。良好的拉制方案应确保此类缺陷极少出现。对于标准膜片钳记录，尖端开口直径应为1–3微米。较陡的锥形（钝头）可在相同开口直径下产生较低电阻。可通过加压抛光来调整尖端的形状和大小。

火焰抛光移液管

1. 设置一个带有铂金加热丝的抛光装置（微加工仪），并通过脚踏开关控制加热丝。可使用 ALA Scientific 公司（CPM-2）提供的成套设备，或自行组装类似装置。
2. 可选步骤：在移液管表面涂覆一层绝缘材料，以降低电容并改善噪声特性。我们通常使用牙科蜡，也可选用 Sylgard 184™（聚二甲基硅氧烷弹性体，即 PDMS）。
3. 若使用蜡涂层，需在附近准备少量....

讨论

本文所示方案在电生理学实验室中每日使用，也用于制备向细胞和动物注射的注射针。使用可编程拉针仪，可轻松制备适用于多种用途的移液管。  只要细心操作和维护，拉针仪上的灯丝可使用一年或更长时间。  祝您的实验顺利成功。

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材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
微移液器拉制仪	仪器	Sutter Instrument Co.	P-97	或类似仪器（例如 Sutter P-87 或 P-2000）
玻璃毛细管	试剂	Sutter Instrument Co.	BF150-86-10	或类似毛细管玻璃。为便于填充移液管，建议使用带玻璃丝的毛细管。