5.4: 啮齿动物识别 I

1. 耳冲识别

耳打码已发展成为一种快速和廉价的方法来标记个别动物。有三种风格的耳朵拳: 剪刀拳, 拇指拳, 和杠杆冲床。动物的右耳用于单位数, 左耳为十, 耳朵中间为数百人。

1. 抑制动物, 使耳朵容易接近。大多数老鼠在断奶时都被标记为个体识别。这需要温和的处理, 由于其较小, 更脆弱的大小。如果后肢可以在笼顶或台面等表面上休息, 一些老鼠就不太可能挣扎。
2. 确定所需的耳拳, 以符合动物的实验数量或在笼子内识别。
   1. 根据所使用的代码, 冲床将是凹槽或孔。
   2. ear 标记上的最后一个数字通常用作识别的第二种方法时的耳打孔标识符。
   3. 如果动物在稳定的笼群中进行短期研究, 它们可以得到连续的数字。这通常是在没有耳朵标签的情况下完成的。
3. 打耳朵
   1. 为了使一个缺口, 冲床是放置在边缘的耳朵耳廓。
   2. 要制造一个洞, 把耳朵放在拳孔中, 使冲头的洞远离耳廓边缘的位置。
   3. 将压力施加到拇指或杠杆上, 或快速、牢固地将剪刀冲进耳朵的皮肤。
   4. 当使用拇指或杠杆拳时, 轻轻地将冲床从耳朵上抬起来。打开剪刀, 把它从耳朵里移开。
   5. 避免拉或扭拳, 以防止撕裂耳朵。
   6. 拳击会在一段时间后变得迟钝。如果一拳打不进耳朵, 松开冲床, 并选择一个新的耳朵冲床。在同一位置重新定位新冲床。
4. 每次使用后都要清洗拳头。
   1. 所有冲床类型将沉闷, 如果蒸压。建议用消毒剂清洗, 用酒精冲洗。彻底干燥, 防止生锈。
   2. 用于 PCR 的耳拳通常在溶液中浸泡3分钟以去除残留的 DNA 或 RNA。使用前, 用酒精冲洗, 擦干。

图1。用剪刀冲压的小鼠耳朵。

2. 耳标签识别

定制的耳标签可以订购的制造商与字母和/或数字代码, 这允许分化的小鼠菌株或调查。耳标签可以用金属或塑料制成。

1. 选择适合于要识别的动物的耳标签。有几种风格的 appliers 可从耳标签制造商。一定要订购的变更是特定的大小和风格的耳朵标签正在使用。
2. 轻轻地从纸板架上取下一个标签, 并将其定向到变更, 以便与孔的末端位于变更的缺口区域上。标记的尖端应该在缺口的对面。
3. 抑制动物, 使耳朵容易接近。如果后肢可以在一个表面上休息, 例如笼顶或台面, 动物可能会更不容易挣扎。
4. 正确定位耳标签的位置。
   1. 把耳朵标记的点和耳朵的最深的位置尽可能地放在一起, 这样标签号就会面对动物的背部。
   2. 要使耳朵标记数字面对动物的鼻子, 放置标记的点在耳廓的基地在耳朵的后面。
5. 应用标签。
   1. 牢牢地挤压变更关闭。耳朵的标签会刺穿耳朵和锁在一起。
   2. 释放变更, 标记的耳朵将从变更中脱落。

图2。在耳廓上正确定位的带有耳标签的鼠标。

6. 卸下金属耳标签。
   注意: 有时, 金属耳标签会引起耳朵发炎和肿胀。肿胀和刺激往往导致感染的耳廓。治疗应包括去除标签;然而, 在严重刺激或感染的情况下, 动物可能需要麻醉。
   1. 用一个用防腐溶液浸湿的棉签将碎片从标签周围移走。
   2. 从边与线切割器的标签环顶部切割。不要穿过平坦的表面, 因为这会压缩标签, 捏耳朵, 并造成进一步的损害。
   3. 避免在切割时使用扭矩, 以防止撕裂耳朵。
7. 使用止血将耳标签的切端分开。
   1. 用止血轻轻地引导耳朵标签通过-和出-耳朵。减少创伤, 避免扩大穿孔孔和滑动的标签, 使卷曲的结束没有通过耳朵。
   2. 一旦标签不见了, 用防腐浸泡的棉签棒擦拭耳朵。
   3. 如果耳朵有脓性分泌物, 则可能需要进行后续治疗, 并建议与兽医人员进行协商以进行评估。

正确识别实验动物是生物医学研究的基本要求。研究人员必须能够区分个体动物，以便将正确的动物用于实验程序和数据收集。科学家们已经开发了几种永久和临时方法来识别个体实验动物。在这里，我们将讨论两种最常用的方法：耳标和打耳。

在深入研究打耳程序之前，让我们先介绍一下打耳代码、可用的打孔类型，并讨论这种方法的优缺点。正如您可能已经猜到的那样，打耳是指在动物的外耳或耳廓上打一个孔或一个缺口。为了标准化这种方法，已经开发了通用的打耳码。

根据位置，右耳上的缺口代表个位数，如 1、3 和 5，双缺口代表 2。使用这些凹口的不同组合，并汇总每个凹口的值，您可以从 1 到 9 标记动物。同样，在左耳上，相同的缺口代表 10。同样，不同的组合将涵盖 10 到 90 的范围。右侧和左侧耳廓中心的孔分别代表 100 和 200。两个洞都表示 300。因此，例如，如果你想给动物贴上 173 的标签，你应该在右耳中央打一个孔 100，在左年打三个缺口，将总数加到 70，在右上耳打一个缺口，代表单位的位置 "三"。

现在，让我们讨论一下市售的三种类型的耳打孔器：剪刀式打孔器、拇指式打孔器和杠杆式打孔器。这些都有其优点和缺点。

拇指打孔器需要捏合动作，但足够小，可以放入 Eppendorf 管中，以便更容易收集耳组织。从人体工程学的角度来看，杠杆冲头比拇指冲头更容易使用，特别是对于老年大鼠较厚的耳朵。剪刀式冲头不需要捏合动作，从而避免了腕管疲劳和受伤。

尽管是一种快速简单的识别方法，但打耳确实有一些局限性。首先，上面讨论的 ear punch 代码的上限为 399，这可能会限制这种方法在一些大规模研究中的使用。另一个限制是大多数动物必须抓住 scruff 才能读取代码，从而增加了它们被处理的时间。随着老鼠年龄的增长，它们的耳朵皮肤会变厚，很难在不对动物造成严重痛苦的情况下进行打耳。因此，最好在幼鼠断奶时对它们进行打耳。对于需要识别的成年大鼠，在进行耳部打孔时应考虑使用吸入麻醉剂。

现在您已经了解了有关耳穿刺代码和可用工具类型的一些背景信息，让我们学习如何在小鼠中执行此技术。

在开始该程序之前，建议用消毒剂溶液清洁冲孔工具，用酒精冲洗并彻底干燥。避免高压灭菌耳突，因为它最终会使它们变钝。

首先，确定动物的实验代码和要使用的冲头。让我们在这里使用代码 173 和剪刀打孔作为示例。相同的程序适用于任何其他代码或冲头。准备好后，抓住动物的骷髅头以束缚它，以便于接触耳朵。从 100 号洞开始。将右耳放入打孔器中，使打孔器的孔远离耳廓边缘。接下来，施加压力以快速牢固地合上剪刀以切开皮肤。然后，松开打头并将其从耳朵中取出。避免拉扯或扭动冲头，以免撕裂耳朵。要制作缺口，请将冲头放在耳廓边缘的正确位置，在本例中为右耳顶部代码单元位置的"三"，然后执行相同的作 - 快速而有力地按压，然后打开剪刀将其取下。在另一只耳朵上重复相同的步骤，打出三个槽口 - 两个用于外角附近的 "20"，一个用于内角附近的 "50"，总计代码为 "70"。

在将动物放回笼子之前，确认打出了正确的代码。同样，用消毒剂清洁冲床，用酒精冲洗并彻底干燥以防止生锈。

现在，让我们继续讨论耳标，这是另一种廉价且易于执行的小鼠和大鼠个体识别方法。市售的耳标种类繁多。这些包括：蚀刻有一系列数字和/或字母的金属标签，以及在鲜艳背景上带有字符或条形码的塑料标签。

金属标签的一个缺点是经常需要拿起动物才能读取代码。相比之下，塑料标签易于读取，无需处理动物。塑料标签的另一个优点是它们与 MRI 成像的兼容性。虽然这些标签为老鼠或老鼠提供了单独的标识符，但它们并非万无一失。标签可能会因过度梳理、皮炎或感染、由于不耐受、打架和侵略性繁殖行为而试图去除标签造成的自我创伤而丢失。如果几只动物被关在同一个笼子里，丢失耳标可能会很麻烦。为了规避这个问题，应该使用第二种身份识别形式，例如在标签对面的耳朵上打孔代码。设施应标准化要标记的耳的选择和在另一只耳上使用的代码，并且所有代码都应在笼卡上标明。

现在让我们学习如何正确佩戴耳标，因为不正确的定位可能会产生一些不幸的后果。应用后，我们还将讨论移除耳标，这通常是在因标签应用而感染的情况下进行的。

第一步是为要识别的动物选择合适的标签。在这里，我们将使用金属标签在小鼠身上演示该过程。请务必订购适合所用耳标特定尺寸和样式的涂抹器。轻轻地从纸板架上取下标签，并将其定向到涂布器中，使带孔的一端位于涂布器的缺口区域上。标签的尖头应与槽口相对。

当您准备佩戴耳标时，请束缚动物，以便于接触耳朵。如果后肢可以放在笼子顶部或台面上，动物可能不太可能挣扎。束缚动物后，将耳标的尖端深深地放在耳甲中，使耳标编号面向动物的背部。然后，用力将涂抹钳合上;耳标会刺穿耳朵并锁在一起。当您松开时，带标记的耳将从涂抹器中掉出。确认标记已正确定位和应用。如果您希望耳标号码面向动物的鼻子，请将标籤的尖端放在耳廓底部的耳廓底部，然后挤压以将标烙锁定到位。

标签的放置方式必须使其不会导致耳朵弯曲、干扰动物的活动能力或卡住笼子的任何部分。如果标签放置得太靠近耳朵边缘，很容易被撕裂。如果位置离头部太近，颈部区域的皮肤会卡在标签中，产生刺激、疼痛和运动受限，从而导致自我创伤。有时，金属标签会引起耳朵刺激和肿胀。这通常会导致耳廓感染，立即治疗应包括去除标签。

为了去除标签，请用消毒液润湿棉签涂抹器，然后用它来去除标签周围的任何碎屑。在严重的感染病例中，可能需要对动物进行麻醉。然后，使用线切割钳，从边到边切割标记循环的顶部。重要的是，不要划过平坦的表面，因为这会压缩标签、夹住耳朵并损坏耳朵。使用止血钳轻轻地将耳标穿过和传出耳朵。将标签滑出，使卷曲端不会穿过，从而导致穿孔的创伤和扩大。标签消失后，用浸有防腐剂的棉签棒擦拭耳朵，然后将动物放回笼子里。如果耳朵有脓性分泌物，则可能需要进行后续治疗，并建议咨询兽医人员进行评估。

现在您知道如何使用耳标和打孔器标记实验动物，让我们回顾一下这些方法可能有用的一些实验。使用耳打孔代码的一个主要优点是，打孔器可以兼作组织样本进行基因分型，从而减少因重复处理而对动物造成的压力。但是，如果您打算使用打孔器收集 PCR 样品，请记住先将设备浸泡在表面去污溶液中至少 3 分钟，以去除残留的 DNA 或 RNA，然后在使用前用酒精冲洗。

如果实验持续数天，鉴定技术的重要性会进一步增加。例如，在这个实验中，科学家们首先使用金属标签标记动物，然后他们向坐骨神经注射了表达荧光素酶蛋白的转基因肿瘤细胞悬浮液。接下来，为了量化癌症进展，他们在注射后 1 天、10 天和 18 天使用生物发光对动物进行成像。

您刚刚观看了 JoVE 的演示，演示了啮齿动物的两种常用鉴定方法：耳标和打耳器。您现在应该了解耳卡代码，了解不同类型的市售啮齿动物耳标，并且应该能够准确地执行这些程序而不会引起动物的严重不适。

请记住，每种技术都有其优点和缺点，必须根据您的实验需求来考虑。除了考虑成本外，在选择合适的鉴定方法时，技术的难易程度和对动物的痛苦程度应该是一些主要考虑因素。一如既往，感谢您的观看！