Name: gentleMACS Dissociator从小鼠脾脏单细胞悬浮液的制备 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-12-11T00:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 18 s
Description: 学习使用gentleMACS Dissociator自动化解离小鼠脾脏组织，制备高活性单细胞悬液。该方法通过专用C管和过滤步骤，为流式细胞术等下游免疫学研究提供可重复的标准化细胞样本。

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仪器设备简介
<ol>
<li>使用紫色 C 管将组织轻柔地解离成具有活性的单细胞悬液。</li>
<li>采用 PBS/BSA EDTA 缓冲液进行细胞解离。该缓冲液的配制方法是将 1 份 BSA 储存液加入到 20 份含 EDTA 的 autoMACS 冲洗液中。</li>
<li>使用 MACS 分离前过滤器，以确保解离后的组织样本中无任何细胞团块，从而促进后续 MACS 分离及分析的成功。</li>
</ol>
分离脾细胞
<ol>
<li>使用 gentleMACS 解离仪将整个脾脏解离成单细胞悬液形式的脾细胞。</li>
<li>开始操作前，根据脾脏质量向 C 管中加入相应体积的缓冲液。一只年轻成年雌性 BALB/c 小鼠的健康脾脏重量约为 80–120 mg。每 1 至 2 个此质量范围的脾脏需要 3 mL 缓冲液。来自年老动物或感染动物的脾脏通常更大，需在缓冲液中称重，并相应调整缓冲液体积。总缓冲液体积不得超过 10 mL。</li>
<li>将解剖得到的脾脏加入含有 3 mL 缓冲液的 C 管中。</li>
<li>确保 C 管盖拧紧，并将 C 管以管盖朝下的方式安装到解离仪上。</li>
<li>启动解离仪。对于 1–2 个脾脏，选择程序 m_spleen_01，该程序运行时间为 56 秒。若脾脏数量更多，请使用程序 m_spleen_04；此程序适用于最多 720 mg 的脾组织。</li>
<li>程序完成后，原始脾组织已被解离成脾细胞悬液。</li>
<li>在室温下以 300×g 离心整个细胞悬液约 30 秒，以确保转子和定子上的所有细胞均被清除并收集到 C 管底部。</li>
<li>使用 1000 微升移液器通过 C 管盖上的隔膜密封开口取出样本。</li>
</ol>
过滤步骤
<ol>
<li>开始过滤步骤时，将解离的组织加入预分离滤器或孔径为 30 µm 的细胞筛中。若处理 1-2 个脾脏，细胞筛应适配 15 mL 离心管；若处理超过 2 个脾脏，则应适配 50 mL 离心管。</li>
<li>让细胞悬液自然滤过，随后用 5 mL 缓冲液冲洗滤器。</li>
<li>将含有细胞悬液的离心管在室温下以 300×g 离心 10 分钟，以收集所有脾细胞，形成脾细胞沉淀。</li>
<li>获得解离后的脾细胞沉淀后，需吸除上清液，并将细胞沉淀重悬于适量缓冲液中。</li>
</ol>
使用 gentleMACS 解离仪进行脾脏解离可获得高比例的活脾细胞，通过 MACSQuant 分析仪进行流式细胞术分析可证明这一点。死细胞由碘化丙啶染色。在提供的示例中，前向侧向散点图显示了制备的脾细胞。

所有实验方案和数据表均可在 <a href="http://www.miltenyibiotec.com">http://www.miltenyibiotec.com</a> 获取。

为避免繁琐且常伴有疼痛的手动解离过程，gentleMACS解离仪可在受控且可重复的条件下高效地进行组织解离。该组织解离过程对细胞温和，所得细胞悬液具有较高的细胞活力。gentleMACS解离仪与C管联用，专为从多种组织制备单细胞悬液而设计。该仪器配备多种预设程序，可用于解离小鼠脾脏、肝脏、肺脏或神经组织。其程序与方案范围将持续扩展，以涵盖更多类型的组织。

<table><tbody><tr><td>gentleMACS&amp;#8482; 起始试剂盒</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-235</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>C 管</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-237</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>13 mL 管</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-596</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_751_13_mL_Tubes_for_LS_Columns.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_751_13_mL_Tubes_for_LS_Columns.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>autoMACS&amp;#8482; 冲洗液</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-222</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>MACS&amp;#174; BSA 储存液</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-376</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>预分离滤器</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-041-407</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_247_Pre_Separation_Filters.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_247_Pre_Separation_Filters.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>MACSQuant 分析仪</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-092-197</td><td></td></tr><tr><td>碘化丙啶溶液</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-233</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx&lt;/a&gt;</td></tr></tbody></table>

使用 gentlemacs 解离器制备小鼠脾脏单细胞悬液

Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Spleen with the gentleMACS Dissociator

单细胞悬液是细胞分离、细胞分析和细胞培养实验的前提条件。为避免繁琐且常带来不适的手工解离操作，gentleMACS解离仪可在可控且可重复的条件下高效地解离组织。gentleMACS解离仪能够高效解离小鼠脾脏，兼具节省时间、操作标准化和保障使用者安全的优点。

本视频介绍了如何使用gentleMACS解离仪解离小鼠脾脏。gentleMACS解离仪是一种自动化台式设备，可通过特制管材对组织进行机械解离，从而获得具有活性的单细胞悬液。解离完成后，脾脏组织经过滤、离心和重悬，可用于后续实验。

本视频介绍了一种利用gentleMACS解离仪自动化解离组织以制备小鼠脾细胞单细胞悬液的简单且节省时间的技术。

使用 gentleMACS 解离器制备小鼠脾脏单细胞悬液

单细胞悬液是细胞分离、细胞分析和细胞培养实验的前提条件。为避免繁琐且常具创伤性的手动……

在本视频方案中，您将看到如何使用 Gentle Max 对小鼠脾脏进行解离。Gentle Max 是一种自动化的台式设备，可通过特制管材对组织进行机械性解离，从而获得具有活性的单细胞悬液。解离后的脾脏样品经过 Max Pres 分离滤器过滤，离心后重悬，可用于后续实验。您好，我叫 Melanie mlu。我是位于德国BE实验室园区的Milton生物技术公司的科学家。今天，我将向您展示如何使用GenX解离法从小鼠脾脏制备单细胞悬液。GenX解离法可实现单细胞悬液的简便快速制备。那么，让我们开始吧。为了避免繁琐且常常痛苦的手动解离过程，温和的Max DI解离仪可在可控且可重复的条件下高效地解离组织。利用Violet C管，可将组织轻柔地解离为具有活性的单细胞悬液。C管在盖子中心提供了一个带有隔膜密封的开口，使您能够在始终维持无菌条件的情况下从管中进行移液操作。为了悬浮解离的细胞，您需要使用适当的PBS-BSA-EDTA缓冲液。该缓冲液的配制方法是将1份BSA储备溶液加入到20份含有EDTA的AutoMax fencing溶液中。使用 Max Pres 分离滤器，可将解离的组织样本中所有细胞团块去除，从而实现高效的细胞分离及后续分析。开始操作时，我们向C管中加入一定体积的缓冲液。根据脾脏质量，一只6至7周龄雌性活检小鼠的健康脾脏重量约为80至120毫克。每处理一到两个该质量的脾脏需要三毫升缓冲液。总体积不得超过十毫升。现在可以将解剖得到的脾脏加入含有三毫升缓冲液的C管中。来自年长动物或感染动物的脾脏通常较大，必须在缓冲液中称重。随后必须相应调整缓冲液体积，但总体积仍不得超过10毫升。现在，确保C管盖拧紧，将C管连接至解离仪，管口朝下。启动解离仪，处理一至两个脾脏时选择程序M spleen oh one。该程序完成需56秒；若脾脏数量更多，则使用程序M spleen oh four。该程序最多可用于720毫克脾组织。程序完成后，天然脾组织将被解离为PLE细胞悬液，外观如下所示。短暂离心以使样本聚集于管底。这将确保转子和定子上的所有细胞均被收集至C管底部。使用1000微升移液器，通过C管帽上密封隔膜的开口取出样品。开始过滤步骤时，将解离的组织加入预先放置的分离滤器或孔径为30微米的滤网中。该滤网应适配15毫升离心管（用于一至两个脾脏）或50毫升离心管（用于两个以上的脾脏）。让细胞悬液通过滤膜，然后加入五毫升缓冲液洗涤滤膜。接下来，将含有细胞悬液的离心管在室温下以300 × g离心10分钟，以收集所有细胞，形成脾细胞沉淀。现在我们已获得解离后的细胞沉淀，需吸除上清液，并将细胞沉淀重悬于适量的脾组织解离缓冲液中。使用 gentle max 可获得高比例的有活力 PLE 细胞，这一点通过 max quant 进行流式细胞术分析得以证实。死细胞被碘化丙啶染色，如所提供的示例所示。前向侧向散射点图显示了制备好的 SP 细胞。好的。我已向您展示了如何使用这种温和的X解离方法来解离脾脏组织。进行此操作时，重要的是要根据样本大小调整缓冲液的用量，并选择合适的Gentle X程序。好了，就这些。祝您的实验顺利。

preparation-single-cell-suspensions-from-mouse-spleen-with-gentlemacs

Research

科研

JoVE Journal

Biology

生物学

gentleMACS Dissociator从小鼠脾脏单细胞悬浮液的制备

我们描述了用于体外扩增抗原特异性大鼠T淋巴细胞系的T细胞生长因子的制备方法。...

从大鼠脾细胞制备T细胞生长因子

从特定组织类型中解离细胞需要优化组织震荡参数，以获得大量具有活性且可培养的细胞。Miltenyi gentleMACS...

使用 gentleMACS 解离仪制备小鼠肺组织单细胞悬液的标准方案

从特定组织类型中解离细胞需要优化组织解离的参数，以获得大量具有活性且可培养的细胞。Miltenyi gentleMACS...

从小鼠神经组织制备单细胞悬液

本视频演示了一种将高盐处理的抗原呈递性树突状细胞（DCs）过继转移至小鼠体内的实验方法。将小鼠CD11c+树突状细胞（DCs）暴露于含高浓度钠的培养基中，使细胞内形成异构左旋糖醛（IsoLG）-蛋白加合物。这些加合物作为新抗原，呈递于DC细胞表面。随后通过过继细胞转移技术，将经高盐处理的细胞注射入小鼠体内。...

一种高盐处理树突状细胞及其过继性转移至小鼠的方法

该视频展示了从小鼠脑组织制备免疫细胞单细胞悬液的过程。首先通过酶消化法将细胞从脑组织中释放出来，随后利用密度梯度离心法根据细胞密度分离免疫细胞，从而获得单细胞悬液。...

制备小鼠脑组织中免疫细胞的单细胞悬液

流式细胞术可用于评估T细胞内染色质的状态。该方案使科研人员能够通过荧光组蛋白H3抗体的平均荧光强度（MFI）升高，来解读T细胞活化过程中染色质去凝集的证据...

利用流式细胞术评估T细胞中染色质状态

本文介绍了一种通过磁性细胞分选法从小鼠脾脏中分离树突状细胞，并将其过继转移至未致敏小鼠的实验方案。选用高盐激活的树突状细胞模型，以详细说明过继转移及流式细胞术的各个操作步骤。...

高盐处理抗原提呈树突状细胞的分离与过继性转移

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本文介绍一种简单高效的方法，用于从成年小鼠睾丸中分离存活的减数分裂期及减数分裂后生殖细胞。通过使用低细胞毒性、紫光激发的DNA结合染料结合荧光激活细胞分选技术，可获得高度富集的生精细胞群体，适用于多种下游应用。...

使用紫光激发的细胞通透性DNA结合染料分离小鼠生精细胞

本文介绍了一种将脾脏细胞在半固体基底膜基质中进行聚集和包封的实验方案。基底膜基质构建物可用于三维培养，以研究类器官的发育，或用于 体内...

基底膜基质包埋细胞聚集体用于研究小鼠脾脏组织形成

本文介绍了一种利用I型胶原酶消化与超速离心相结合的方法，从小鼠脾脏中分离外泌体的实验方案。...

从小鼠脾组织中分离和表征外泌体

学习使用gentleMACS Dissociator自动化解离小鼠脾脏组织，制备高活性单细胞悬液。该方法通过专用C管和过滤步骤，为流式细胞术等下游免疫学研究提供可重复的标准化细胞样本。

使用 gentleMACS 解离器制备小鼠脾脏单细胞悬液

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