5.2: 基本护理程序

1. 处理免疫 (常规) 小鼠

已经证明, 小鼠的免疫失调与人类非常相似。²由于这些动物具有有限的免疫能力, 因此在处理和照料这些动物的过程中, 通过使用工程控制、个人防护设备来减少感染性疾病的风险。动物护理人员和标准操作规程;这些减少了锁定和其他动物接触的设备的污染。

1. 从装运容器中取出: 从其他机构或动物供应商处接收动物对已在动物设施内的动物构成风险。在转运过程中, 动物运输箱可以接触到致病剂。因此, 在拆解装运集装箱时应执行适当的程序。
   1. 最小的个人防护装备 (PPE) 要求是手套, 清洁的实验室大衣或磨砂, 一个微粒口罩, 和安全眼镜, 当处理动物。
   2. 选择适当的笼子, 包括电线酒吧盖子和障碍顶端。笼应配备适当的床上用品和筑巢材料。所有锁定应在动物到达之前准备好并放置在接收区。
   3. 抵达后, 运输箱放置在一个安全和温度控制的房间。然后, 检查容器是否损坏。
   4. 用胆碱产品对装运容器的外表面进行消毒, 以消灭任何有害的病原体。确保消毒剂与包装箱的接触符合厂家的推荐, 通常为15-30 分钟。
   5. 将容器放置在动物转移站 (ATS) 中。ATS 在引擎盖内提供高效过滤的气流, 通过在用户和工作区之间创建真空空气屏障来提供过敏原保护。这确保了最小的接触动物毛发/毛屑和笼床上用品材料。单向空气也能保护动物免受周围空气的污染。
   6. 一旦装运集装箱打开, 评估动物的整体健康状况。记下任何受伤或患病的动物。
   7. 把动物放在合适的群体大小的组合笼子里。分组应符合空间规则, 以及它们将被分配到的实验协议。
   8. 用铁丝条盖住笼子。确保线栏盖上的分隔条在盖子上创建两个区域。
   9. 选择合适的食物, 把食物放在铁丝条盖子的一侧。离开第二方开放, 以便更好地流通空气。
   10. 水将通过水瓶或自动浇水系统提供。水瓶是用于新断奶的小鼠, 以确保他们能够保持其水化水平。对于有自动浇水的下腔锁定, 在将其放在机架上之前, 先将浇水管充电。
   11. 把笼子放在架子上。如果使用 IVCs, 检查笼是否完全啮合到机架上, 并确保 sipper 管固定在浇水系统上。
2. 笼型改变常规小鼠
   1. 在安非他明类兴奋剂中改变动物笼。在每届会议结束时对苯丙胺类兴奋剂进行消毒。
   2. 一次只能打开一个笼子。
   3. 用适当的床上用品和筑巢材料准备的锁定被带进动物室。在安非他明类兴奋剂中放置了少量的笼子。
   4. 有内部 sipper 管的下腔静脉笼必须充电以迫使水进入 sipper, 以消除 sipper 管内空气的死亡空间。如果没有适当的充电, 老鼠可能无法提供足够的压力, sipper 管, 以消除空气。
   5. 最小的个人防护装备 (PPE) 要求是手套, 清洁的实验室大衣或磨砂, 一个微粒口罩, 和安全眼镜, 当处理动物。
   6. 将被改变的动物笼放在一个新的笼子里, 然后放在 ATS 里。
   7. 动物可以用手或用填充钳来转移。手套在笼子之间或在小组之间改变老鼠。手套也可以用无毒化学物质在笼子之间消毒。
   8. 已经证明, 将小鼠的筑巢区域转移到一个干净的笼子里有助于过渡到干净的笼子里, 特别是对于那些在人群中的雄性。其他浓缩物也转移到新的笼子里。
   9. 一旦笼顶或送料器放置在新的笼子, 食品添加。
   10. 屏障顶部被放置在新的笼子和笼子返回到机架。
   11. 下腔的笼子必须正确地停靠在机架上, 以确保空气和水阀门的啮合。

2. 处理免疫力低下的小鼠

1. 从装运集装箱拆箱
   1. 免疫缺陷动物必须在无菌条件下进行解压。所有处理免疫缺陷小鼠的人都必须佩戴蒸汽灭菌的礼服、面罩、头发罩和无菌手套。在搬运这些动物时, 应时刻使用无菌技术。
   2. 所有设备和锁定应已消毒的蒸汽, 紫外线辐射, 或化学灭菌, 浸泡在70% 乙醇至少30分钟有两种选择无菌锁定: 标准锁定, 已被包装和蒸汽灭菌, 或锁定被消毒-通常通过辐照-由供应商。这些笼子是一个用途, 一次性单位。
   3. 在操作小鼠的层流罩, 发动机罩是喷洒70% 乙醇与鼓风机操作。风帽鼓风机应保持在任何时候, 以保持无菌环境。每次使用后, 引擎盖喷上消毒剂, 擦拭所有杂物, 再喷洒70% 乙醇。
   4. 最理想的情况是, 两个人需要适当的接受免疫缺陷小鼠: 一个处理动物使用无菌技术 (无菌技术员), 一个将处理污染的项目 (菌技术员)。菌的人还要穿一件干净的长袖礼服;实验室大衣或工作服;掩;盖;和无菌手套, 以防止污染的内部不育, 如果他们需要达到的遮光罩。
   5. 准备一个层流罩, 如前所述。最好有一个专门为免疫缺陷动物的遮光罩。建议在抽油烟机的内部使用紫外线 (UV) 杀菌灯, 可用于杀菌。使用定时器来确保引擎盖表面有足够的紫外线照射。
   6. 所有放置在罩内的物品的外部都喷洒了70% 酒精, 包括食品、水和锁定的外包装。
   7. 装运集装箱在被放置在引擎盖之前喷洒二氧化氯溶液。一旦放置在引擎盖, 他们将保持未开封15-30 分钟。
   8. 指定的动物处理员打开无菌食物和水在敞篷之下。
   9. 菌技术员打开引擎盖下的装运箱。必须由菌技术员, 以避免接触的内部表面的引擎盖和内部的航运箱。
   10. 动物处理员打开无菌笼子, 并把食物和水放在笼子顶端来准备笼子。然后将小鼠从装运箱中取出, 放入无菌笼中。
   11. 动物状态由无菌动物处理员注意。任何出现疾病或有明显伤害的动物都将被隔离。所有标记有动物需要兽医注意的笼子将被放置在处理, 笼子改变, 或实验操作最后, 减少其他动物的潜在的污染。
   12. 菌的人将从引擎盖上取下填充的笼子。笼子可以放在一个标准的架子上作为静态笼子, 或在通风架上作为 IVCs。在 IVCs, 小鼠应提供额外的筑巢材料, 以协助热调节。
   13. 动物处理员应在每个装运容器后更换手套, 以避免可能的动物群的交叉污染。装运集装箱号记录在笼卡上, 以便在发生疾病时跟踪动物的起源。
   14. 如果原始容器可以密封, 则可以保存未使用的耗材以备将来使用。未使用的食物从房间被去除。
   15. 小鼠在实验前应经过一个星期的至少一周的驯化期。
2. 免疫缺陷小鼠的笼型改变
   1. 鼠标笼至少每周更改一次, 如果认为有必要, 则更频繁。
   2. 为胡德准备, 笼子准备, 和人员 PPE 的步骤是相同的, 为动物打开。
   3. 动物要么用手转移, 要么用填充钳。指定的动物处理员应在每5-10 笼后 reglove, 如果手套被撕裂或被污染, 或者动物出现不适。
   4. 任何有动物出现病的笼子将被放置在笼子的末端改变顺序, 避免可能暴露健康动物对病原生物或污染物。
   5. 如果食物和/或水必须在下一个预定的笼子改变之前添加到笼子里, 它必须在准备好的引擎盖下菌完成。

由于小鼠和大鼠占用于生物医学研究的动物的 90% 以上，因此适当照顾这些生物体对实验结果至关重要。这些护理程序从一开始就开始，从拆开动物的包装，从集装箱到更换笼子，再到保持适当的住房条件、提供适当的饮食和确保合适的环境。尽管有一些适用于实验室中大多数小鼠和大鼠的一般程序，但一些动物，例如免疫功能低下的动物，需要额外的关注才能维持它们用于实验目的。

本视频将介绍免疫功能正常和免疫功能低下的动物的标准和基本护理程序。最后，我们将说明一些示例实验，展示科学家如何将这些知识用于不同的研究目的。

从其他机构接收动物会对已经饲养在设施内的动物构成风险，因为在运输过程中，运输箱可能会接触到病原体。因此，在拆包集装箱时应采用适当的程序。

在处理任何动物之前，佩戴适当的个人防护设备 （PPE） 非常重要。最低限度需要佩戴的个人防护装备是实验室外套、手套、安全眼镜和外科口罩，以减少接触灰尘和过敏原。下一步是为进入的动物选择合适的笼子。然后，为笼子提供适当的垫料和筑巢材料。并将准备好的笼子带到温控接收室，以便在动物到达之前准备好转移。

货物到达后，请将运输箱放在收货室的安全位置。检查容器是否有任何损坏，并对外表面进行消毒以消灭任何有害病原体。根据制造商的建议，确保消毒剂与盒子接触至少 15-30 分钟。然后，将容器放入动物转运站 （ATS）。该站在通风橱内提供高效微粒空气 （HEPA） 过滤的单向气流。HEPA 保护用户免受过敏原的侵害，并保护动物免受周围室内空气的影响，从而最大限度地减少污染的机会。接下来，打开运输集装箱并评估啮齿动物的整体健康状况。记下任何似乎受伤或生病的动物。之后，将它们以适当的组尺寸放入已经组装好的笼子中，用金属丝杆盖住笼子并固定隔板以创建两个区域。选择合适的食物并将其放在一侧，让另一侧打开以允许更好的空气流通。最后，如果动物没有放在自动浇水的架子上，请添加一个水瓶以确保足够的水供应。请记住，ATS 必须在每次结束时进行消毒，并且在消毒时必须关闭鼓风机。

更换笼子时，将两个笼子（一个装有适当垫料的新笼子和装有动物的用过的笼子）放入 ATS 中。可以用手或使用带衬垫的镊子将动物从旧笼子转移到新笼子里。这两个方法都已在此集合的另一个视频中讨论过。请记住，一次只能打开一个动物笼子。对于有一窝的雄性小鼠或雌性小鼠，已经证明将小鼠的筑巢区域转移到干净的笼子中有助于动物过渡。将笼子顶部放在新笼子上后，将食物从旧笼子顶部转移到新笼子顶部，并在必要时添加更多食物。接下来，将屏障顶部放置，然后将笼子放回机架上。最好在笼子之间或组之间更换手套。

免疫功能低下的动物的拆包程序略有不同，因为东西需要无菌。建议在使用前至少 24 小时打开引擎盖内的鼓风机。与免疫功能正常的动物一样，货物到达后，在接收室用消毒液喷洒容器，并保持 15-30 分钟不开封。在专用于免疫功能低下小鼠的 ATS 中，在作动物前 30 分钟用 70% 乙醇喷洒层流罩。最好让两个人参与这个拆包活动——一个人是穿着蒸汽消毒服和双双无菌手套的无菌技术人员，以使用无菌技术处理动物，另一个人是穿着干净的隔离服和一副手套处理受污染物品的非无菌技术人员。两人都应该戴口罩、发帽和安全眼镜。

在打开引擎盖内的运输容器之前，将所有用品和笼子放入其中，并在其外部喷洒酒精。货物到达后，将收到的动物箱放入引擎盖中，并喷洒 70% 乙醇。无菌笼有两种选择，一种是经过包装和蒸汽灭菌的标准笼，另一种是供应商使用辐照消毒的一次性装置。

打开无菌食品，然后打开运输箱，开始开箱程序。此时，处理者应丢弃第一副无菌手套。接下来，未消毒的人打开无菌笼子的包装，无菌地将其传递给动物处理员，然后动物处理员取下盖子和金属丝杆盖，并将它们倒置在罩子中。随后，笼子上的吸入管在位于罩内的站处注满水。最后，动物驯兽师将动物放入笼子中，用铁丝杆盖固定，添加食物并将罩子固定到位。请注意，通风橱鼓风机应始终保持开启状态，以保持无菌环境。最后，未消毒的人从罩中取出填充的笼子，并将其放在适当的架子上。为避免组间可能出现的交叉污染，动物驯兽师应在每个运输容器后更换手套。

对于免疫功能低下动物的笼子更换，头罩和笼子的准备以及 PPE 与这些动物的拆包相同。转移技术与免疫功能正常的动物相同，但在无菌条件下。

现在让我们讨论动物的适当住房条件，这是提供基本护理的另一个重要方面。小鼠和大鼠主要饲养在鞋盒式笼子中，笼子的底部是实心的，里面有垫料。典型的鼠笼提供 75 平方英寸的占地面积，最多够 5 只成年小鼠使用。另一方面，一个鼠笼的面积为 142 平方英寸，足够 2 只成年老鼠使用。静态笼通常用金属丝杆盖覆盖，并在笼顶部添加过滤材料作为阀盖。单独通风的笼子 （IVC） 也有一个金属丝杆盖和盖子，但它们被放置在一个架子上，该架子为笼子提供气流。这消除了像更换静态笼子那样频繁更换笼子的需要，这可能对免疫功能低下的动物有益。

所有笼养系统都提供食物和水供应。动物笼内放置了喂食器，或者使用钢丝杆盖的一部分来储存食物。食物的放置位置必须使其不会被动物弄脏。水通常通过放置在笼子顶部的水瓶或通过动物笼子的内置组件自动饮水阀供应。对于饮水阀选项，当笼子接合到架子上时，水被输送到管中，用于自动浇水系统，该系统旨在满足整个动物设施中动物的需求。

《实验动物护理和使用指南》规定，所有笼子用具必须至少每 2 周消毒一次。一些笼子和附件可能需要根据外壳中的气味和氨气水平更频繁地更换。

现在让我们谈谈免疫功能正常和免疫功能低下的动物的适当食物和水供应。有许多市售饲料具有可变的蛋白质、碳水化合物和脂肪成分。理想情况下，饲料应包含 15-19% 的蛋白质、44% 的碳水化合物和 4-9% 的脂肪。对于免疫功能低下的动物，请确保饲料已经过绝育。

自来水或反渗透即 RO 水可用于免疫功能正常的动物，但对于免疫缺陷的动物，水可能是污染源，因此需要消毒。通过在 8 升 RO 水中加入 2 滴 12 摩尔盐酸来保持水中的无菌性，这将使水酸化至 2.5-3 的 pH 值并限制细菌生长。然后将水倒入单独的瓶子中，并用铝箔覆盖。将带有吸管的瓶盖单独放入高压灭菌袋中，然后将所有物品放入高压灭菌器中进行蒸汽灭菌。

现在让我们讨论一下动物护理所必需的标准环境条件。

在笼子里，社会住房是强制性的，除非有科学依据或动物与所有其他动物不相容。用纸屋和筑巢材料丰富环境可以让动物表现出物种特异性的行为，例如筑巢和挖洞，这反过来又降低了压力水平并增加了动物的整体健康状况。筑巢材料还提供了一个睡眠区域，其中充满了镇静信息素，有助于将多只雄性老鼠安置在同一个笼子里。如前所述，在更换笼子时将筑巢区移至干净的笼子有助于防止攻击性，尤其是雄性，因为动物被引入新环境。对于无胸腺裸体动物，应考虑在笼子中提供额外的床上用品和碎纸类筑巢材料，以帮助调节体温。

在房间水平，小鼠和大鼠的温度应在 68 到 79 之间？F.室内湿度水平应为 30-70%，因为较低的水平会导致称为环尾的情况。第三个 room 参数是 lighting。这包括光强度和周期。通常，动物房间设置为 12 小时光照/12 小时黑暗循环。照明强度应根据房间内的活动而变化。当技术人员工作时，可以使用更高的照明水平。但是，一旦所有活动结束，它应该降低到大约 325 lux。最后，还应仔细控制房间内的气流。每小时至少应更换 10-15 次 100% 新鲜空气。这减少了动物房间内的微生物和气味。

最后，让我们看看研究人员如何在他们的实验中利用这些关于实验动物的住房、饮食和环境偏好的知识。

如前所述，实验室动物通常表现出筑巢行为，这减轻了压力，研究人员已将其用作动物福利的指标。在这个特定的实验中，科学家们开发了一个无偏系统来对建造的巢穴进行评分，然后使用它来研究环境温度对筑巢行为的影响。如您所见，温度升高导致分数显着下降，突出了周围温度在动物福利中的作用。

鉴于小鼠和大鼠都喜欢碳水化合物，研究人员使用不同形状的饲料来测试动物的运动功能。这包括分析不同类型食品处理任务中的灵巧性，以及检查手术或药物干预后的到达行为。

最后，众所周知，老鼠和老鼠是夜行动物，它们不喜欢有灯的地方。科学家利用这些知识来构建环境来研究这些物种的焦虑。例如，在这里，研究人员将动物引入简单的旷场，并研究了野生型和敲除小鼠在内外田区花费的时间，以分析基因敲低对焦虑样行为的影响。

您刚刚观看了 JoVE 对小鼠和大鼠基本护理程序的介绍。您现在应该更好地了解应该采取的措施来确保这些动物的环境和处理不会对动物的健康造成任何伤害，并且您还应该知道研究人员如何修改这些参数以实现不同的科学目标。一如既往，感谢您的观看！