Question 1

为什么不能直接培养B细胞来生产单克隆抗体？

Accepted Answer

B细胞在长期培养中存活不佳，这使得无法无限期地维持它们以进行抗体生产。为了克服这一限制，科学家将B细胞与永生化的骨髓瘤细胞融合，以创建杂交瘤细胞，这些细胞结合了B细胞的抗体生产特性和骨髓瘤细胞的无限增长能力。

Question 2

多克隆抗体和单克隆抗体有什么区别？

Accepted Answer

多克隆抗体是由多个B细胞克隆产生的抗体混合物，每种抗体识别抗原上的不同表位。单克隆抗体是由单一杂交瘤细胞系产生的同一抗体，只识别一个特定的表位。这使单克隆抗体更加特异，并且在区分相似抗原时更加有用。

Question 3

限制稀释如何确保单克隆抗体的产生？

Accepted Answer

限制稀释是一个连续稀释过程，统计上确保单个细胞被接种到筛选板井中。含有一个细胞的井生长成单克隆群体，产生相同的抗体。这种克隆方法保证了所得的杂交瘤细胞系只释放所需的已知特异性抗体。

Question 4

硫酸铵在抗体纯化中扮演什么角色？

Accepted Answer

硫酸铵沉淀通过与蛋白质争夺水分子中的亲水相互作用从培养基中去除抗体。高电荷的铵离子和硫酸根离子降低了抗体的溶解度，导致它们从溶液中沉淀出来。这种盐析方法是从培养上清液中纯化蛋白质的标准技术。

Question 5

为什么在硫酸铵沉淀之后使用透析管？

Accepted Answer

透析管通过渗透交换从抗体溶液中去除残留的硫酸铵。将抗体溶液放入透析管中，并在PBS缓冲液中过夜沉浸。水和小盐离子通过管膜，而抗体保留在内部，从而得到不含硫酸铵的纯化抗体。

Question 6

纯化后如何确定抗体浓度？

Accepted Answer

抗体浓度使用分光光度计在280纳米处测量，该仪器检测蛋白质吸光度。在PBS中制备抗体样品的20倍稀释液，然后使用分光光度计进行分析。浓度使用标准公式计算并记录下来，以备纯化单克隆抗体的记录和存储。

Question 7

用于识别产生所需抗体的杂交瘤的筛选方法是什么？

Accepted Answer

elisa assays indirect sandwich 和 competitive 方法用于筛选杂交瘤培养基中是否存在目标抗体。在杂交瘤融合和限制性稀释克隆之后，ELISA 检测哪些孔中的细胞产生了所需的单克隆抗体。这一筛选步骤确保只有具有正确抗体特异性的杂交瘤被选择用于扩展和抗体生产。

抗体生成：利用杂交瘤技术制备单克隆抗体 - 评估测验