Name: 人类胚胎干细胞（ES细胞）的繁殖 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 52 s
Description: 学习使用胶原酶分离技术培养人类胚胎干细胞H1和H9细胞系的方法。该技术可维持细胞团块状态，避免胰蛋白酶导致的细胞过度增殖和异常分化，为干细胞研究和再生医学应用提供可靠基础。

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<ol><li>Kawasaki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+midbrain+dopaminergic+neurons+from+ES+cells+by+stromal+cell-derived+inducing+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Induction of midbrain dopaminergic neurons from ES cells by stromal cell-derived inducing activity.</a> Neuron. 28, 31-40 (2000).</li>
<li>Perrier, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+of+midbrain+dopamine+neurons+from+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Derivation of midbrain dopamine neurons from human embryonic stem cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 12543-12548 (2004).</li>
<li>Pruszak, J., Isacson, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+into+dopaminergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Directed differentiation of human embryonic stem cells into dopaminergic neurons.</a> , John Wiley and Sons. (2007).</li>
<li>Pruszak, J., Sonntag, K. C., Aung, M. H., Sanchez-Pernaute, R., Isacson, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Markers+and+methods+for+cell+sorting+of+human+embryonic+stem+cell-derived+neural+cell+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Markers and methods for cell sorting of human embryonic stem cell-derived neural cell populations.</a> Stem Cells. 25, 2257-2268 (2007).</li>
<li>Sonntag, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+yield+of+neuroepithelial+precursors+and+midbrain-like+dopaminergic+neurons+from+human+embryonic+stem+cells+using+the+bone+morphogenic+protein+antagonist+noggin%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Enhanced yield of neuroepithelial precursors and midbrain-like dopaminergic neurons from human embryonic stem cells using the bone morphogenic protein antagonist noggin.</a> Stem Cells. 25, 411-418 (2007).</li>
<li>Kawasaki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+dopaminergic+neurons+and+pigmented+epithelia+from+primate+ES+cells+by+stromal+cell-derived+inducing+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Generation of dopaminergic neurons and pigmented epithelia from primate ES cells by stromal cell-derived inducing activity.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 99, 1580-1585 (2002).</li>
<li>Ko, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+embryonic+stem+cell-derived+neural+precursors+as+a+continuous%2C+stable%2C+and+on-demand+source+for+human+dopamine+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Human embryonic stem cell-derived neural precursors as a continuous, stable, and on-demand source for human dopamine neurons.</a> J Neurochem. 103, 1417-1429 (2007).</li>
<li>Hong, S., Kang, U. J., Isacson, O., Kim, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+precursors+derived+from+human+embryonic+stem+cells+maintain+long-term+proliferation+without+losing+the+potential+to+differentiate+into+all+three+neural+lineages%2C+including+dopaminergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Neural precursors derived from human embryonic stem cells maintain long-term proliferation without losing the potential to differentiate into all three neural lineages, including dopaminergic neurons.</a> J Neurochem. , (2007).</li>
<li>Zhang, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+subtype+specification+from+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Pathol%22%5BJournal%5D)">Neural subtype specification from embryonic stem cells.</a> Brain Pathol. 16, 132-142 (2006).</li>
<li>Pankratz, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+neural+differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+via+an+obligated+primitive+anterior+stage%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Directed neural differentiation of human embryonic stem cells via an obligated primitive anterior stage.</a> Stem Cells. 25, 1511-1520 (2007).</li>
<li>Lazzari, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+derivation+of+neural+rosettes+from+cloned+bovine+blastocysts%3A+a+model+of+early+neurulation+events+and+neural+crest+specification+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Direct derivation of neural rosettes from cloned bovine blastocysts: a model of early neurulation events and neural crest specification in vitro.</a> Stem Cells. 24, 2514-2521 (2006).</li>
<li>Pomp, O., Brokhman, I., Ben-Dor, I., Reubinoff, B., Goldstein, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+peripheral+sensory+and+sympathetic+neurons+and+neural+crest+cells+from+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Generation of peripheral sensory and sympathetic neurons and neural crest cells from human embryonic stem cells.</a> Stem Cells. 23, 923-930 (2005).</li>
</ol>

人类胚胎干细胞（es细胞）的传代培养

Propagation of Human Embryonic Stem (ES) Cells

人类胚胎干细胞（ES细胞）的传代培养

是的，我是Lauren Deon，负责MGH的人类Amgen干细胞共用设施。是的，我是Lauren，负责MGH的人类AM干细胞共用设施。我多年来一直从事人源Amgen干细胞的研究，从我在George De Lab做博士后时就开始了，至今已有四年。目前，我们拥有两个细胞系，H1和H9，均来自Y细胞。我们目前在培养中扩增或维持这些细胞的方法是通过胶原酶来传代这些细胞。因此，我在接种细胞后的最初几次传代中，通常会采用一种技术，即挑取克隆。在这种情况下，我可以在显微镜下观察哪些克隆生长良好、分化程度合适且形态理想，然后仅收集这些克隆，将其切成若干小块，重新接种到新的培养皿中。而对于那些看起来分化程度异常的克隆，则不予处理，任其留在原处。另一种传代细胞的方法是使用胰蛋白酶。但在此我并不采用这种技术。我认为胶原酶相对更安全一些，因为人类干细胞不喜欢被分散成单个细胞，或者说不喜欢处于孤立状态。因此，如果你使用胰蛋白酶消化时间稍长，比如使用三到四分钟——这是我们用于其他类型细胞（如人干细胞）的常规方法——细胞将被分散成单个细胞，而其中大多数会死亡，或发生分化，或无法贴附于基质。因此关键在于必须将细胞保持为细胞团块状态，不要让它们在培养瓶中单独存在。因此，使用胶原酶的优势在于能够保持细胞的活性。而使用芯片法时，你只是筛选出那些能够在这种极为严酷的调理作用过程中存活下来的细胞。因此，这些细胞通常具有极高的增殖能力。因此，您可以使细胞适应这种胰蛋白酶消化过程。问题在于，有些细胞的行为方式不同，增殖速度明显加快。其中一个风险是，在这种极高分裂频率的过程中，可能会出现某些商业性异常。所以您是说，传代培养会导致培养物中增殖能力最强的细胞被筛选出来，对吗？没错，这些细胞增殖活性更高，可能还具有比其他细胞更高的存活率。因此，在经过多次传代、胰酶消化和增殖后，培养物本质上会发生改变，表现出不同的特性。因此，很难确定它们是否完全相同。如果你进行检测，比如常规检测，假设你检测终末分化细胞的标志物，如OC4、NANOG、SSEA-4、CD30等，这些分子可能仍然会表达。如果你进行跨上皮电阻（TER）形成实验，这些细胞可能仍然能够分化并形成类似于正常细胞的结构。如果观察核型，可能会发现某些异常，但也可能仍然呈现正常的核型。这种选择性优势可能仅仅源于一种通过核型分析无法检测到的突变。因此，我认为它们生长速度明显更快这一事实本身已经有些令人担忧。如果我们将来想将这些细胞用于移植，我绝对不建议使用这类细胞。好的。那么，您能否告诉我，使用这种技术进行细胞传代时，主要存在哪些技术问题？请使用 S，是的。时间会稍微长一些，而且由于细胞生长速度较慢，要获得足够数量的细胞来进行实验就需要更长的时间。所以我认为这会不太方便。您能简单介绍一下您实验的目标吗？如何使用CS细胞？好的，我这里的主要项目是从人AB型干细胞中获

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Research

科研

JoVE Journal

Biology

生物学

人类胚胎干细胞（ES细胞）的繁殖

人类胚胎干细胞具有自我更新能力，并能分化为体内所有类型的细胞，这表明它们在医学应用以及作为研究发育和疾病基本问题的工具方面具有巨大潜力。本文提供了一种简明的逐步实验方案，通过免疫外科手术法分离内细胞团，从胚胎中获取人类胚胎干细胞。...

通过免疫手术法建立人类胚胎干细胞系

ESC的分化伴随着染色质结构和组成的细胞类型特异性变化。检测这些变化可为定义干细胞特性及细胞分化的机制提供重要见解。染色质免疫沉淀（ChIP）是一种有价值的手段，可用于解析干细胞分化背后的分子机制。...

人类胚胎干细胞的染色质免疫沉淀

本视频展示了如何在无饲养层细胞的条件下维持人类胚胎干细胞（hESCs）的生长，以及如何在无饲养层细胞的条件下对hESCs进行连续传代。同时演示了通过免疫荧光显微镜检测在无饲养层细胞条件下培养的hESCs多能性的方法。本视频为共3部分中的第3部分。...

从 MEF 到 Matrigel 3：将人胚胎干细胞从 Matrigel 传代至 Matrigel

人类胚胎干细胞向特定细胞类型的定向分化在再生医学领域引起了广泛关注。我们提供了一种简明、逐步的实验方案，用于确定 体内...

通过畸胎瘤形成对人类胚胎干细胞进行命运图谱绘制

尽管基因修饰技术已取得近期进展，人类胚胎干细胞（HESCs）的转染仍是一个不稳定的过程。据我们所知，目前尚未有报道关于系统性且高效转染人类诱导多能干细胞（iPSCs）的方法。本文中，我们描述了高效转染和核转染人类iPSCs的可靠方案。...

转染和核转染人诱导性多能干细胞

我们已建立一种在特定条件下利用小分子直接从多能性人胚胎干细胞诱导生成神经母细胞的方案，该方法能够大量获得发育中中枢神经系统所需的神经前体细胞和神经元细胞类型，用于神经修复。...

利用小分子诱导高效地从多能性人胚胎干细胞分化获得人神经前体细胞与神经元

本文描述了一种通过逆转录病毒介导的OCT4、SOX2、KLF4和MYC异位表达来生成人诱导性多能干细胞（iPSCs）的方法。同时还讨论了一种基于GFP表达识别人iPSC克隆的实用方法。...

利用携带GFP的逆转录病毒载体将人类体细胞重编程为诱导性多能干细胞（iPSCs）

单细胞基因表达检测对于理解干细胞异质性至关重要。...

通过定量RT-PCR对单个人类胚胎干细胞进行基因表达谱分析

本文介绍了一种人类胚胎干细胞单细胞培养及其后续分化为神经前体细胞的实验方案。该方案操作简便、稳定可靠、可扩展性强，适用于药物筛选和再生医学应用。...

利用人胚胎干细胞单细胞培养实现高效神经分化

本文展示了我们实验室如何冻存HuES人类胚胎干细胞系。...

冻存人类胚胎干细胞

学习使用胶原酶分离技术培养人类胚胎干细胞H1和H9细胞系的方法。该技术可维持细胞团块状态，避免胰蛋白酶导致的细胞过度增殖和异常分化，为干细胞研究和再生医学应用提供可靠基础。

人类胚胎干细胞（ES细胞）的传代培养

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