Name: 长期使用宽视场显微镜的成像哺乳动物细胞 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 15 min
Description: 学习使用宽视场显微镜进行哺乳动物细胞长期活细胞成像技术。该方法在37摄氏度恒温条件下观察细胞分裂过程，为神经科学研究提供重要的动态数据。

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作者无任何利益冲突需要披露。

使用宽场显微镜对哺乳动物细胞进行长期成像

Long-term Imaging Mammalian Cells using Wide-Field Microscopy

实际上，我要先将其安装在这里，然后再更换您。现在我要开始吸液，并尽可能轻柔操作。好的，先静置几秒钟。好的。好了。因此，我们生活成像网格的重要特征是：它采用倒置显微镜，这意味着物镜位于样品下方。物镜朝上，整个显微镜——实际上是包括物镜和样品在内的绝大部分组件——都处于37摄氏度环境中。因此，这个塑料箱内的所有部分均维持在37摄氏度。在载物台正上方，我们有空气和二氧化碳的混合气体，其中二氧化碳浓度为5%。其原理是使样品处于类似细胞培养箱的环境中，就像在细胞培养箱中一样。因此，这是我们用于混合空气和CO2的装置，混合后的气体经过加湿和加热，然后通过管道输送到载物台上的样品。今天我们将仅进行单通道荧光检测，即GFP荧光检测。这是输送含5% CO2气体的软管，可直接插入载物台的接口中。这一点很重要。然后我们可以关闭这些窗口，将其移除，接着进入我们的第一个位置。接下来，我将前往第一个视野，即我的对照样本，并根据屏幕上所见来选择具体的位置。因此，每换一个新孔时，我都会确保实际观察显微镜，因为每个孔的焦平面不同，培养皿底部并非完全平整。因此，当从一个孔移动到另一个孔时，需要进行精细调节。目前我位于第一个孔，接下来的操作是：我将进行调焦，刚刚我已打开显微镜的透射光光源。我已经确保所有光线都进入目镜。然后我只需观察一下，确认视野清晰干净。接着，我会关闭透射光，打开荧光光源，检查所观察的细胞是否健康，无凋亡现象。然后，我将其关闭。接下来我要做的是发送信号，现在我将开始选择位置，这意味着我必须将光路切换至相机。这里的这个就是相机。因此，我会让显微镜将所有图像发送到相机，这样在目镜中就看不到任何东西。接下来，在控制显微镜的软件中，我将选择正确的滤光片组，对我们而言是psy滤光片组，然后设定曝光时间。我对这些细胞非常了解，我知道它们需要 0.2 秒的曝光时间。因此，我会将这一参数设置告知软件。接下来，我将进行对焦操作。这个视野中的细胞是活的。灯亮起后，你可以观察到细胞——哦，我不知道你是否能看到细胞，但这个视野之所以理想，是因为所有细胞的状态都非常均一，包括它们的荧光表现；没有凋亡细胞。凋亡细胞通常会非常明亮，而此视野中也没有任何碎片或杂质。你可以看到，这实际上是一个处于中期的细胞，而这是另一个中期细胞，这个细胞可能刚刚完成有丝分裂。我之所以能够判断这一点，是因为看起来这两组染色质彼此之间的排列非常整齐，就像刚刚结束分裂后期一样。这是一个良好的视野。现在我已经确定了曝光时间以及滤光片组设置是正确的，接下来的操作将取决于具体的软件。我将开始采集多个视野位置，此时软件会自动记录该视野的 X、Y、Z 坐标。当我选择下一个视野时，我会再次操作：在选择新的视野时，我会打开快门，观察屏幕上显示的图像，并根据屏幕上的成像结果来选择视野，而不是直接通过目镜观察来判断。所以我没看到我的任何对照样本在这里

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长期使用宽视场显微镜的成像哺乳动物细胞

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落射荧光显微镜，双光子显微镜，活体成像，免疫荧光，细胞外基质，胶原蛋白，基底膜，组织重塑，肿瘤微环境，炎症，纤维化

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本方案描述了制备一个大型（6 x 3 mm）2) 使用食品保鲜膜、透明硅胶和盖玻片制作颅窗。该颅窗可允许 体内...

体内 宽场与双光子钙成像技术在小鼠大颅窗中的应用

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整体成像技术用于可视化及量化外周晶状体结构、细胞形态与排列组织

学习使用宽视场显微镜进行哺乳动物细胞长期活细胞成像技术。该方法在37摄氏度恒温条件下观察细胞分裂过程，为神经科学研究提供重要的动态数据。

使用宽场显微镜对哺乳动物细胞进行长期成像

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