Name: 海马神经元的基因枪转 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 44 s
Description: 学习使用基因枪技术对海马神经元进行转染的完整实验流程。本方法通过精确分离海马组织并进行切片培养，为神经科学研究提供可靠的体外实验模型。

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作者无任何利益冲突需要披露。

基因枪转染海马神经元

Gene-gun Transfection of Hippocampal Neurons

您好，我是Kma。我在布朗大学Case实验室工作，使用70%乙醇清洁切片仪载台。将培养板插件放入六孔板中。将培养板加入培养基后，于37摄氏度孵育，用镊子夹取全脑，置于中脑与四叠体之间。分离一侧海马体，再分离另一侧海马体。将海马体置于一滴PBS中。吸出 PBS，使用组织切片机进行矢状切面切割。重复将切片转移至盛有 PBS 的容器中，通过添加并吸出 PBS 和培养基进行轻柔洗涤。用镊子分离切片。用 PBS 和培养基洗涤切片。再次将切片转移至培养板中并插入。使用镊子吸除切片中的培养基。将基因枪软管连接到氦气瓶上。将枪管安装到基因枪上。用子弹填充弹夹。将载弹匣插入基因枪中。调节氦气罐的射击压力。将EGFP包被的微珠射入组织切片。现在。

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海马神经元的基因枪转

我们介绍了一种制备DNA包被金微粒的方法，并展示了利用此类微粒对培养的海马脑片中的神经元进行基因枪轰击转染的技术。...

基因枪弹丸的制备及脑片培养中神经元的基因枪转化

活细胞成像在研究细胞器运输动态时具有特别重要的应用价值。本文描述了一种利用宽场荧光显微镜对培养神经元中致密核心囊泡进行活体成像的实验方案。该方案具有良好的灵活性，可经适当调整用于成像其他细胞器，如线粒体、内体和过氧化物酶体。...

活体成像原代培养的海马神经元中的致密核心囊泡

本方案概述了分离、通过电穿孔转染以及培养小鼠海马和皮层神经元所需的步骤。短期培养可用于轴突生长和导向研究，而长期培养则适用于突触形成和树突棘分析的研究。...

胚胎小鼠海马和皮层神经元的核转染与原代培养

来源：Keener, D. G., et al. 在不同类器官型脑片培养中对小鼠海马兴奋性及类别特异性抑制性神经元进行单细胞电穿孔。J. Vis. Exp.

通过单细胞电穿孔在小鼠海马脑片培养中实现基因表达

来源：Denaxa, M., et al.，化学遗传学改造的皮层中间神经元前体移植至出生后早期小鼠大脑。J. Vis. Exp.

琼脂糖包埋电穿孔辅助的基因转移技术在小鼠皮层中间神经元前体细胞中的应用

磷酸钙沉淀法是一种方便且经济的转染培养细胞的方法。经过优化，该方法也可用于原代神经元等难转染细胞的转染。本文中，我们详细描述了海马神经元与星形胶质细胞共培养体系中磷酸钙转染的实验方案。...

原代海马神经元的磷酸钙转染

近年来，脑组织切片培养技术的进步使其在生物技术应用中得以广泛利用。脑组织切片能够保持局部结构特征 体内 生物学，包括功能性突触连接。本文介绍一种区域选择性的基因枪递送方法，用于标记并进行遗传学操作这些脑片。...

使用改良基因枪在脑组织切片中实现区域选择性基因枪轰击

本文介绍了一种改良的滚管法，可用于对啮齿类动物脑片进行长期培养，并在光刻蚀盖玻片上实现精确复位的间歇性高分辨率成像。该方法能良好维持神经元的存活率和脑片的形态结构。文中还展示了利用该完全封闭系统，结合病毒实现细胞类型特异性表达的应用实例。...

封闭系统中长期培养脑片期间实现精确定位与重复间歇成像的改良滚筒管法

本文介绍了一种单细胞电穿孔技术方案，可用于在不同体外培养年龄的海马脑片中，向兴奋性和抑制性神经元递送基因。该方法可实现单个细胞中基因的精确且高效的表达，可用于研究细胞自主性及细胞间功能。...

小鼠海马兴奋性及类别特异性抑制性神经元在不同脑片培养体系中的单细胞电穿孔

该技术展示了一种高效制备编码人癌基因的复制缺陷型逆转录病毒储备液的方法，并可用于在小鼠模型中诱导骨髓增殖性疾病。...

通过瞬时转染293T细胞生产复制缺陷型逆转录病毒

学习使用基因枪技术对海马神经元进行转染的完整实验流程。本方法通过精确分离海马组织并进行切片培养，为神经科学研究提供可靠的体外实验模型。

基因枪转染海马神经元

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